CMIA法检测老年人群梅毒螺旋体抗体的假阳性分析

2019-05-18王雨涵黄远帅

西南医科大学学报 2019年2期

王雨涵，黄远帅

(西南医科大学附属医院输血科，四川泸州 646000)

梅毒(syphilis)是由苍白密螺旋体(treponema pallidum，TP)引起的慢性全身性传染病[1-2]，主要由性接触传播，也可通过输血或母婴垂直传播[3]。近年来梅毒发病率升高较快，已成为较严重的公共卫生问题[4]。TP病毒感染早期诊断和发现，对预防传播和控制流行至关重要[5]。目前，梅毒检测已成为临床患者、献血人员和体检人群的常规筛查项目。面对标本量的急增，临床实验室需要有高灵敏度和特异性的梅毒测定方法，同时又需要操作简便和自动化程度高。化学发光法因其灵敏度高，特异性好，已经成为国外TP检测的主要方法，而国内化学发光TP检测还处在初期阶段[6]。化学发光微粒子免疫分析法(chemiluminescence microparticle immunoassay,CMIA)是一种新型免疫学检测技术，检测样本发光信号S/CO值明显高于ELISA方法，对于抗体效价低弱阳性标本，有明显的优势，利于早期发现感染[7]。但高敏感性的检测方法可能受到其他因素影响，导致假阳性增高，而老年人群基础疾病多，身体状况差，免疫功能紊乱，更易影响CMIA的检查结果，造成假阳性率增高，因此本研究旨在研究CMIA在老年人群TP抗体检测中的假阳性情况，并分析原因，提出相应处理措施。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2017年11月至2018年12月西南医科大学附属医院门诊及住院部108 345份需要进行TP筛查的患者血清为研究对象。根据年龄将研究对象分为观察组（年龄≥60岁）和对照组（年龄18～59岁）。其中观察组40 229例，对照组68 116例。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器

郑州安图生物科技有限公司Autolumo PLUS全自动化学发光测定仪。

1.2.2 试剂

郑州安图生物科技有限公司人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（CMIA法）；英国OMEGA公司梅毒螺旋体血球凝集试验试剂盒（TPHA法）。

1.3 方法

采用化学发光微粒子免疫分析法（郑州安图公司）对108 345份患者血清进行检测，阳性结果采用TPHA方法进行确诊。所有检测过程均按照标准化操作程序完成。

1.4 结果判定标准

CMIA法结果判定标准：待测样本发光值＜Cutoff值时，检测呈阴性反应；待测样本发光值≥Cutoff值时，检测呈阳性反应。Cutoff值=阳性对照孔平均发光值×0.2，仪器操作时，自动计算并保存每批试剂的Cutoff值。本实验中Cutoff值=1.0。有效性判断：阳性对照孔平均发光值/阴性性对照孔平均发光值应大于10，否则应重新试验。

TPHA法结果判读标准：阳性对照：在血凝板底部形成不规则凝集块；阴性对照：在孔底形成致密、规则的圆形细胞沉淀。目测：凡出现细胞凝集者为阳性反应，不出现凝集者为阴性反应：-/不凝集：细胞沉积在板孔中央呈边缘光滑的纽扣状；+/凝集：细胞形成多边形或不规则环状沉积；2+～4+/强凝集：细胞形成边缘粗糙不规则形状或薄膜状覆盖到板孔底。加入对照血清细胞的反应孔不应出现凝集，如果出现凝集，说明存在抗血细胞抗体，应重复试验。重复试验时，应先用对照细胞悬液将标本按1∶4稀释，在室温静置45～60 min，再经1 000 r/min离心5 min，取上清液按1∶5稀释，再进行试验，如果加入试验细胞悬液仍出现凝集，可判为阳性结果。

假阳性判断：化学发光微粒子免疫分析法阳性而TPHA试验阴性。真阳性判断：磁微粒发光化学法与TPHA试验均为阳性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 20.0软件，率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

纳入研究的108 345例患者血清标本采用化学发光微粒子免疫分析法共筛查出阳性样本4 442例，阳性率为4.10%。阳性结果全部采用TPHA方法进行确诊，确诊阳性率为93.86%。初筛阳性率观察组高于对照组（P＜0.05)。假阳性率观察组高于对照组（P ＜0.05)，男性高于女性（P ＜0.05)，见表1、表2。

表1 化学发光微粒子免疫分析法检测TP抗体的性能分析

3 讨论

由于人们对性传播疾病知识了解及防护程度不足，梅毒感染已由高危人群转向普通人群，隐性感染者大量增加。梅毒的临床症状表现多样，且隐性梅毒患者较多，传播速度快，社会危害大，且能经母婴传播，给胎儿带来重大危害[8-9]。临床工作中应推荐使用敏感性和特异性高的试剂用于筛查，有效降梅毒传播的风险。化学发光微粒子免疫分析法是将磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术三者结合起来的一种新兴分析方法。该技术充分利用了磁性分离技术的快速易自动化，化学发光技术的高敏感性，以及免疫分析的特异性，在梅毒抗体检测领域展现了不可替代的作用[10-11]。但据文献报道CMIA法检测TP抗体高敏感性的同时伴随着假阳性率增高，尤其是在老年人群中[12]。

本研究中采用CMIA法对最近1年本院就医患者进行TP抗体筛查，发现TP初筛阳性率为4.10%，与张旭东等[6]的4.52%相近，高于秦宏、庞丽平、靳秀英等[13-15]的报道，流行情况仍较为严峻。一方面是本院所在地区位于川、滇、黔、渝结合部，人口流动大、劳务输出和静脉吸毒人员均比较多，使得TP的阳性率较高[16]。另一方面，所在地经济发展水平相对落后，在梅毒检测、预防、治疗以及宣传等方面的经费投入不足，公众对梅毒的危害以及自我保护知识了解甚少。

在本研究中采用CMIA法检测阳性结果中与TPHA结果比较假阳性率为6.15%，与国内学者报道结果[2]接近。在CMIA法梅毒血清学试验阳性的老年人中，较大一部分无任何临床症状及体征、无疾病相关流行史、无高危行为、无TP病毒感染史，其假阳性的可能性大。本研究中，老年患者（年龄≥60岁）经CMIA法检测出的阳性率为8.14%，而经TPHA检测出的假阳性率为0.76%，经比较老年组出现的低值阳性率和假阳性率均明显升高，差距有统计学意义（P＜0.05)，与何江才的报告类似[17]。这部分人假阳性的原因可能是：①老年人身体功能减退，常合并一些基础疾病，如心血管病、糖尿病等，这些疾病可使机体释放诱导产生抗类脂抗体（或）抗TP抗体的交叉抗原；②老年患者伴有类风湿关节炎、接受免疫抑制剂治疗的患者比例相对更高，更容易产生一些自身抗体、异嗜性抗体、异常蛋白等交叉反应物质[18]，干扰化学发光反应出现假阳性。因此，老年人CMIA法检测TP抗体结果呈现低值阳性时，一定要结合病史、临床表现和其他检验结果等综合考虑[19]。尽量避免梅毒化验结果假阳性造成的误诊，这对于避免医患纠纷是十分必要的[20]。值得注意的是本研究所采取的TP确诊方法是TPHA法，具有一定的局限性。据报道，如果用TPHA法确证TP-CMIA法的假阳性，会有真阳性误判为假阳性，可采用灵敏度、特异性均较高的TP-Western Blot作为确诊试验[21]。

CMIA技术检测TP抗体具有灵敏性高、特异度高、重复性好、线性范围宽等优点。但同时存在假阳性率较高，特别是老年人群更要慎重对待。可从以下几个方面采取措施，提高诊断的准确性：①首先，对老年人群阳性结果尤其是低值阳性检测结果应采取多种方法进行复检及确诊，或定期随访观察；②与临床医生沟通，结合患者的疾病诊断、症状体征、病史、其他实验室检查、治疗反应及流行病学等信息综合考虑；③患者处于其它感染活动期，体内可能存在抗体干扰，建议间隔一段时间复查；④对不合格的样本拒收，做好样本检测前处理工作；⑤必要时结合TP免疫印迹试验或梅毒螺旋体检测和定期复检，以最大限度预防TP的传播。