金胺O荧光染色法辅助诊断结核抗酸杆菌感染的价值分析*

廖子龙，徐加誉，陈宝玉，李勇

（1.广东省深圳市盐田区人民医院 病理科，广东 深圳 518000；2.中南大学湘雅医院 病理科，湖南 长沙 410008）

结核病是危害性极大的一种传染性疾病，近年来发病率日益升高，针对结核病的诊断受到越来越广泛的重视，目前结核病的主要确诊方式包括抗酸染色发、病理组织学等方法，抗酸染色法虽然特异性高，但镜检时间长、敏感性低，无法满足诊断需求，因此探索一种更佳的诊断方式意义重大[1-3]。为进一步提高结核抗酸杆菌感染的诊断效果，本研究通过对照分析金胺O荧光染色法应用于病理组织切片的诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择本院2017年6月-2018年6月收治的接受金胺O荧光染色、抗酸染色、痰涂片抗酸染色及血清学结核抗体金标法联合检测的病理组织切片患者195例，所有患者均对本次研究知情，签署了知情同意书，研究经院伦理委员会批准。195例患者包括男103例，女92例；年龄35～69岁，平均（48.37±5.24）岁。

1.2 方法

检测仪器包括：常规显微镜、电热恒温水槽及荧光显微镜。主要试剂包括：抗酸染液、金胺O荧光染液。抗酸染液按照齐尔-尼尔森（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法相关规程配制，金胺O荧光染液采用1 g金胺O放入95%乙醇10 ml中再加5%石炭酸液90 ml；脱色剂采用3%盐酸乙醇液；复染剂采用2.5%高锰酸钾。试剂盒由珠海贝索生物技术有限公司提供。

金胺O荧光染色法：将石蜡切片脱蜡至水，然后取金胺O荧光染液，将组织切片放入其中，以65℃电热恒温水槽进行15 min的染色，再以室温继续15 min染色，洗净后取3%盐酸乙醇进行1～2 min脱色处理，至外观无黄色呈现。最后使用2.5%高锰酸钾进行3～5 min的复染，洗净后烤干，中性树胶封固后待检。抗酸染色法：以常规的标准操作流程，对样本进行染色处理，包括病理组织切片抗酸染色、痰涂片抗酸染色。血清学结核抗体金标法：按照试剂盒说明书进行操作及判断。

1.3 观察指标

①观察计算金胺O荧光染色法、组织抗酸法、痰涂抗酸法及血清学结核抗体金标法的阳性检出情况。金胺O荧光染色法采用荧光显微镜20 倍物镜观察切片，背景为黑色，有时背景残留物呈淡黄色，而抗酸性菌呈明亮的橘黄色；抗酸染色法采用普通光学显微油镜、10倍目镜、100倍物镜进行观察，结核杆菌呈亮红色，其他组织呈淡粉红色或浅蓝色；金标法利用结核杆菌特异性外膜抗原，采用斑点免疫金渗滤试验原理进行检测，硝酸纤维膜上出现颜色深浅表示阳性程度。②观察计算上述方法诊断结核抗酸杆菌感染的敏感性和特异性，敏感性=真阳性例数/（真阳性例数 +假阴性例数）×100%，即正确判断感染率；特异性=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%，即正确判断非感染率。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.00分析，计数数据以百分比（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4种染色方法阳性率对比

经病理与临床明确诊断为阳性87例，金胺O荧光染色法检出60例阳性，阳性率为68.97%（60/87）；组织抗酸法阳性检出率为29.89% （26/87）；痰涂抗酸法阳性检出率为10.34%（9/87）；血清学结核抗体金标法检出13 例阳性，阳性率14.94%（13/87）。明确诊断为阴性80例，金胺O荧光染色法检出4例阳性，阳性率为5.00%；组织抗酸法、痰涂抗酸法、血清学结核抗体金标法均未检出阳性。临床诊断为结核抗酸杆菌感染而病理未确诊28例，金胺O荧光染色法检出14例阳性，阳性率为50.00%（14/28）；组织抗酸法阳性检出率为17.86%（5/28）；痰涂抗酸法阳性检出率为17.86%（5/28）；血清学结核抗体金标法检出4例阳性，阳性率14.29%（4/28）。金胺O荧光染色法各方面诊断阳性率比组织抗酸法、痰涂抗酸法及血清学结核抗体金标法阳性率均明显更高（确诊为阳性：χ2=37.79/76.53/65.59，P=0.000/0.000/0.000；确诊为阴性：χ2=4.10，P=0.043；临床诊断为阳性而病理未确诊：χ2=6.45/6.45/8.18，P=0.011/0.011/0.004）。

2.2 4种染色方法敏感性和特异性对比

金胺O荧光染色法的特异性与组织抗酸法、痰涂抗酸法及血清学结核抗体金标法比较差异无统计学意义（P＞0.05），金胺O荧光染色法的敏感性则比其他方法显著更高（P＜0.05），见表1。

表1 4种染色方法敏感性和特异性对比 %

3 讨论

临床在诊断结核抗酸杆菌感染中，结核样结节及干酪样坏死等是其主要病理表现，不过结合抗酸杆菌感染也存在不典型的病变，因此将结核抗酸杆菌直接在病变处找到是确诊结核病的重要途径[4-6]。目前临床通常采取痰涂片结核血清学金标法检测，病理组织也是确诊结核抗酸杆菌感染的重要方法，该方法作为金标准，具有很高的诊断准确性，不过在特殊情况下也需要采用特殊染色法进行辅助诊断，染色法则一般行Ziehl-Neelsen抗酸染色配合常规显微镜，但是检出率较低[7-9]。

金胺O荧光染色法与上述染色法原理相同，不过前者在低倍镜下可观察菌体呈亮绿色，背景黑暗，具有清晰的形态特征，不容易出现漏检情况，使镜检效率显著提高[10-12]。本研究中通过对195 例病理组织标本进行抗酸染色检测、血清学结核抗体检测及金胺O荧光染色检测，结果显示经病例与临床诊断确诊为阳性的87例病理组织切片中金胺O荧光染色法检测阳性率为68.97%，明显高于组织抗酸法（29.89%）、痰涂抗酸法（10.34%）、血清学结核抗体金标法（14.94%）。不过在确诊为阴性的80例病理切片之中，金胺O荧光染色法检出4例阳性，其他方法未检出阳性，该假阳性结果考虑与组织切片、染色等过程中杂质影响密切相关，杂质在荧光显微镜蓝色激发后，可产生亮绿色荧光，与抗酸杆菌相似，容易与之混淆，从而造成误诊。针对该类情况，笔者经验为如果在低倍镜下见形似抗酸杆菌，尤其是少量分布的形似抗酸杆菌，应调至高倍镜，或者由经验丰富的镜检人员确认。虽然金胺O荧光染色法有假阳性结果出现，但其特异性仍较高，与其他方法比较无明显差异，充分体现出金胺O荧光染色法辅助诊断结核抗酸杆菌感染的显著优势。

综合上述，临床诊断结核抗酸杆菌感染采用金胺O荧光染色法辅助诊断可促进阳性率提高，具有较高的敏感性和特异性，值得推广。