NEDD9在胰腺癌组织中的表达及与临床病理的相关性分析

杨秀燕 刘海芳

浙江省义乌市中心医院病理科，义乌 322000

【提要】 采用免疫组织化学法检测102例胰腺癌及其匹配的癌旁组织、100例胰腺良性肿瘤组织的神经前体细胞表达下调蛋白9(NEDD9)的表达。结果表明胰腺癌组织NEDD9的阳性表达率显著高于癌旁组织及良性肿瘤组织，且该表达与肿瘤TMN分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移相关，NEDD9阳性表达患者3、5年生存率显著低于NEDD9阴性患者，提示NEDD9有可能成为胰腺癌诊断、治疗及预后评估的新靶点。

神经前体细胞表达下调蛋白9(neural precursor cell-expressed developmentally down-regulated 9, NEDD9)属于骨架蛋白分子之一，有研究报道其在多种恶性肿瘤中表达异常，在细胞迁移、凋亡过程中发挥重要作用[1]。然而对于NEDD9在胰腺癌中表达的相关研究尚不多见。本研究检测胰腺癌组织NEDD9表达，分析其与临床病理的相关性,旨在为临床胰腺癌诊断、治疗及预后评估提供新的靶点和思路。

一、资料与方法

1．一般资料：选取2010年2月至2012年5月间浙江省义乌市中心医院诊治的胰腺癌患者102例。纳入标准：(1)所有患者均经影像学检查以及术后病理检查确诊为胰腺癌；(2)入院前均未接受过放、化疗；(3)临床病历资料完整。排除标准：(1)存在凝血功能障碍者；(2)合并其他恶性肿瘤疾病者；(3)临床病历资料不完整者。102例患者中男性66例，女性36例，年龄≤50岁25例，>50岁77例；病变部位：胰头部72例，胰体尾部30例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期50例，Ⅲ～Ⅳ期52例；病理分化程度：低分化47例，中高分化55例；淋巴结转移41例，无淋巴结转移61例；肝转移25例，无肝转移77例。同期选取义乌市中心医院100例病理证实的胰腺良性肿瘤组织标本作为对照。本研究经医院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

2．研究方法：收集患者的癌组织和匹配的癌旁组织及胰腺良性肿瘤组织标本，应用免疫组织化学法检测NEDD9表达，试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，严格按照说明书操作。NEDD9多抗的稀释度为1∶300，二抗为过氧化物酶标记，采用DAB显色。以PBS代替一抗作为阴性对照组。由病理科医师随机选择10个高倍视野盲法进行阅片，并按照细胞着色程度以及阳性细胞占比进行评分[2]。细胞染色强度：黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞占比：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。两分相乘，0分为阴性，1～4分为弱阳性，5～8分为阳性，9分为强阳性。

3．观察指标：分析比较胰腺癌、癌旁组织、良性肿瘤组织NEDD9表达情况及与其临床病理参数的关系。根据NEDD9表达不同将胰腺癌患者分为NEDD9阴性组与NEDD9阳性组，术后通过电话或门诊复查进行随访，记录患者3、5年的生存情况，随访截止至2017年5月31日。

二、结果

1．胰腺癌、癌旁组织、胰腺良性肿瘤NEDD9的表达：胰腺癌、癌旁组织、胰腺良性肿瘤NEDD9阳性表达率分别为69.6%(71/102)、31.4%(32/102)、29.0%(29/100)，胰腺癌的阳性率显著高于癌旁组织及良性肿瘤组织，差异有统计学意义(χ2=29.826，P=0.000，图1)。

2．胰腺癌组织NEDD9表达与肿瘤临床病理参数的相关性：TMNⅠ～Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移者的NEDD9表达阳性率显著低于TMN Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移者，差异均有统计学意义(表1)。

图1 胰腺癌(1A)和癌旁组织(1B)NEDD9的表达(免疫组化 ×400)

表1胰腺癌组织NEDD9表达情况与肿瘤临床病理参数的关系[例(%)]

病理参数总例数NEDD9阳性表达χ2值P值年龄(岁) ≤502517(68.00)0.0400.841 >507754(70.13)性别 男6645(68.18)0.1800.672 女3626(72.22)病变部位 胰头部7251(70.83)0.1740.677 胰体尾部3020(66.67)TNM分期 Ⅰ～Ⅱ期5024(48.00)21.6460.000 Ⅲ～Ⅳ期5247(90.38)病理分化程度 低分化4743(91.49)19.7270.000 中高分化5528(50.91)淋巴结转移 有4139(95.12)21.0960.000 无6132(52.46)肝转移 有2516(64.00)0.4920.482 无7755(71.43)

3．胰腺癌组织NEDD9表达强度与患者生存率的关系：NEDD9阳性组患者3、5年生存率分别为52.1%(37/71)、28.2%(20/71)，显著低于NEDD9阴性组患者的87.1%(27/31)、61.3%(19/31)，差异均有统计学意义(χ2=11.296，P=0.001；χ2=10.024，P=0.002)。

讨论胰腺癌是消化系统恶性程度较高的肿瘤之一，该病在发病早期具有较高的隐匿性，缺乏典型的临床表现，且病情发展迅速，通常伴有早期广泛转移，预后不良[3-5]。由于胰腺具有独特的解剖学结构以及生物学特征，目前临床上尚无简便、可靠的诊断手段[6]。随着近年来分子生物学在肿瘤方面的研究不断深入，有不少学者发现NEDD9在多种恶性肿瘤中均有明显高表达[7]。

NEDD9属于CAS家族成员，是一种骨架蛋白，由834个氨基酸组成，具体包括基质结构域(SD)、丝氨酸(SR)区域、SH3结构域及焦点黏附目标(FAT)域。研究发现其参与细胞的生长、侵袭迁移、致癌性转化等，并在不同肿瘤组织中表达上调，是一种在多种癌症类型中公认的转移标志物。王娜等[8]研究显示，NEDD9阳性表达率在正常胃黏膜、早期胃癌和进展期胃癌组织中依次升高，且在早期胃癌中表达率已显著升高。韦林等[9]报道，NEDD9在食管癌组织中特异高表达，参与食管癌的侵袭及转移。努尔麦麦提·叶尔逊等[10]研究结果显示，胰腺癌组织中NEDD9水平显著高于癌旁组织，并与胰腺癌的恶性程度等相关。由此可以证实，NEDD9的表达与胰腺癌的表达、侵袭以及转移存在一定关联。

本研究结果显示，胰腺癌组织中NEDD9表达阳性率为69.6%，明显高于癌旁组织及胰腺良性肿瘤组织，组间差异有统计学意义，与吴铁龙等[11]的研究报道相一致，表明了NEDD9在胰腺癌组织中存在明显高表达。此外，胰腺癌NEDD9表达与肿瘤TMN分期、分化程度、淋巴结转移相关，提示了NEDD9参与胰腺癌的侵袭转移过程，其机制可能是NEDD9被FAK以及Src磷酸化，并和Crk分子相互作用，刺激Src-FAK-Crk迁移开关，从而加快钙粘蛋白的降解，同时抑制黏着斑的分解，进一步促进整合素受体激活以及上皮-间质转化，最终达到促进迁移、侵袭的作用。另外，胰腺癌组织中NEDD9阳性组患者3、5年生存率显著低于NEDD9阴性组患者，提示NEDD9可能与胰腺癌患者预后相关。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突