NGAL、IL-6和Cys-C联合检测在2型糖尿病肾病早期诊断中的价值

黄 颖，钱 锦

（泰州市人民医院 检验科，江苏 泰州 225300）

随着2型糖尿病（T2DM）病情的进展，患者会出现各种并发症，包括肾病。约20%～40%的糖尿病患者会发展为肾病。其发病隐匿，早期症状较轻。一旦进入大量蛋白尿期，进展速度异常加快。因此早期诊断、早期预防或治疗对于延缓糖尿病肾病的发展速度有着非常重要的价值。微量白蛋白尿是糖尿病肾病的主要形式，其作为糖尿病肾病进展的预测因子已被认可[1]。然而糖尿病肾病早期可表现为尿白蛋白阴性，症状不明显，易被忽略，单纯作为糖尿病肾病早期预测因子并不完全适合，因此发现除微量白蛋白尿以外的早期标志物显得尤为重要。本研究通过对血清中NGAL、IL-6和Cys-C在2型糖尿病不同阶段含量的检测，探讨其联合检测DN早期诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年3月～2017年9月我院内分泌科确诊的2型糖尿病患者共136例作为研究对象。诊断标准参照2013年版中国2型糖尿病防治指南。根据24h尿微量白蛋白排泄率（UAER）将患者分为3组：单纯DM组（A组）48例，UAER＜30mg/24h，其中男27例，女21例；年龄29～82岁，平均55.4岁；早期DN组（B组）45例，30mg/24h≤UAER≤300mg/24h，其中男21例，女24例，年龄27～79岁，平均58.7岁；DN组（C组）43例，UAER＞300mg/24h，其中男23例，女20例，年龄36～82岁，平均61.3岁。以上各组均排除以下情况：其他内分泌疾病；心、肝、肺、脑疾病；恶性肿瘤、自身免疫性疾病或结缔组织疾病，感染及其他肾脏疾病。另选40例健康体检者作为对照组（CTL组），男21例，女19例；年龄32～79岁，平均51.8岁。四组性别、年龄等一般资料差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。所有入选人员均知情同意。

1.2 仪器与试剂 NGAL测定仪器为山东麦田生物技术有限公司生产的MTP-400定量免疫层析分析仪，试剂为其配套的胶体金法检测试剂盒。IL-6测定仪器为北京热景生物技术股份有限公司生产的UPT-3A上转发光免疫分析仪，试剂为其配套试剂。Cys-C测定仪器为Beckman Coulter AU5800全自动生化分析仪，试剂为重庆中元Cys-C测定试剂盒。所有检测操作均严格按照说明书进行。

1.3 方法 NGAL采用定量免疫层析法测定。IL-6采用上转发光法测定。Cys-C采用免疫透射比浊法测定。

1.4 统计学处理 应用SPSS 22.0统计软件。计量资料以s表示，多组间比较采用单因素方差分析，方差不齐时采用Kruskal-Wallis分析。NGAL、IL-6和Cys-C与糖尿病肾病的相关性，其敏感性和特异性比较应用ROC曲线。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各项检测结果比较A组UAER、UREA、Scr、Cys-C、IL-6和NGAL结果和CTL组比较无显著差异（P＞0.05）。B组UREA、Scr结果和CTL组及A组相比无显著差异（P＞0.05），但NGAL、IL-6和Cys-C结果高于A组（P＜0.05）。C组和A组、B组及CTL组相比均有显著差异（P＜0.05）。见表1。

表1 各组UREA、Scr、Cys-C、IL-6和NGAL比较

2.2 以Cys-C、IL-6、NGAL和联合预测因子作为检验变量，以UAER小于30作为状态变量绘制ROC曲线（图1）。由图1可知，NGAL曲线下面积为85.9% （95%Cl：0.778～0.940），Cys-C曲线下面积为80.1%（95%Cl：0.712～0.891），IL-6曲线下面积为78.4%（95%Cl：0.686～0.882）。Cys-C、IL-6、NGAL的Cut Off值和对应的灵敏性、特异性见表2。

图1 血清Cys-C、IL-6、NGAL和联合预测因子在2型糖尿病肾病早期诊断中的ROC曲线

表2 糖尿病肾病早期诊断中血清Cys-C、IL-6、NGAL和联合预测因子的诊断效能评价

3 讨论

糖尿病肾病是糖尿病患者发病率和死亡率最高的长期并发症之一[2]。在糖尿病肾病患者中，肾小球结构和功能变化的进展，导致炎性细胞特别是巨噬细胞和淋巴细胞的间质浸润。愈来愈多的炎性细胞被受伤的肾脏组织所释放的细胞因子和趋化因子所吸引，反过来加重了肾脏组织的炎症反应[3]。一般肾活检为糖尿病肾病的权威诊断方法。但因其有创，操作要求高，临床上未将其作为常规检查项目。因此糖尿病肾病的诊断往往为中晚期。中晚期糖尿病肾病存在复发率高，预后差的风险。由此可见，糖尿病肾病的早期诊断对糖尿病肾病患者具有重要的临床意义。

中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）是脂质运载蛋白家族中的一员，最初被认为是先天免疫的一个组成部分，在系统炎症过程中扮演着重要作用[4]。NGAL在许多病理状况下均会增加，如炎症、缺血、心脏手术和肾损伤等。近年来，NGAL作为一种新的肾脏病标志物得到很多研究支持。有报道称血清NGAL可作为T2DM诊断糖尿病肾病的新型生物标志物[5]。De Carvalho等人的研究进一步显示NGAL在尿微量白蛋白正常或轻度增加的时候依然会增加，表明即便在糖尿病肾病最早阶段，也有可能发生肾小管或肾小球损伤[6]。本研究发现，NGAL在糖尿病早期未产生微量白蛋白尿时便可增加，并随病程的发展而增加，因此佐证了De Carvalho等人的研究结论，提示糖尿病在诊断的早期就应该考虑肾损伤的发生，并应提早进行干预，防止肾病往终末期发展。

白细胞介素-6（IL-6）是一种多功能细胞因子，可以参与造血细胞的生长、分化以及免疫和炎症反应。肾小球和肾小管上皮细胞可以产生一些促炎症因子，如IL-6、IL-18等[7]。本研究发现，IL-6在A组中虽有增加，但和对照组相比无明显差异。随着糖尿病肾病的发展，B组的IL-6水平远高于A组和对照组，C组的IL-6水平又高于B组，并存在明显差异。这可能意味着IL-6与糖尿病肾病有关，并且与糖尿病肾病的严重度呈正相关。国外研究也证实了IL-6和肾脏肾小管成分（肾小管间质性纤维化）的沉积是糖尿病肾病进展的主要决定因素[8]。

胱抑素C是由所有有核细胞产生的低分子量（13kDa）蛋白酶抑制剂，其生理学变化小于肌酐，以恒定速率合成，不受肌肉质量的影响，被肾小球完全过滤并被近端肾小管细胞重吸收[9]。胱抑素C水平与肾小球滤过率（GFR）具有良好的相关性，不仅与肾病的进展相关，而且当肾小球滤过率（GFR）保持＞60mL/min时，胱抑素C水平同样发生变化[10]，这说明胱抑素C可以作为糖尿肾病早期极为敏感的标志物。有文献报道[11]显示胱抑素C对于2型糖尿病肾病的诊断具有很高的特异性。本研究通过ROC曲线计算出的胱抑素C诊断高特异性结果证实了这一点。

糖尿病肾病临床诊断最常用的是24小时尿微量白蛋白定量检测。但尿微量白蛋白对诊断2型糖尿病肾病的特异性不足，对预测病情的转归也存在局限性。所以尿微量白蛋白用于诊断依据时需进行长期随访、多次检测。Cys-C、IL-6、NGAL均可作为糖尿病肾病标志物，其灵敏度和特异性各有优势和不足。NGAL在肾损伤2小时左右便会升高，是一个极为灵敏的肾损伤标志物，但其特异性不高，许多组织器官均可释放NGAL。胱抑素C作为国内外公认的糖尿病肾病早期标志物，对于反映肾脏病变的特异性更好，但因其在人体内含量较低，因此检测的灵敏度并不高。糖尿病肾病已被证实是一种慢性炎症反应，白细胞介素-6作为一种炎症因子，其对于肾病的发展及预后具有很高的提示作用。通过对联合检测ROC曲线研究发现，联合预测因子ROC曲线下的面积最大，敏感度和特异度均高于单项指标独立检测。因此联合检测意义更大，对于早期预测糖尿病肾病的效果也更好。