复方菠菜提取物、VB12合剂对猪血红蛋白和猪瘟抗体的影响

刘平祥， 梁鹏帅， 程龙梅， 刘金萍*， 陈嫦青， 莫宇丽， 陆应诚

（1.广东驱动力生物科技股份有限公司，广东广州 510560；2.华南农业大学，广东广州 510642）

猪瘟俗称“烂肠瘟”，是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒（CSFV）引起的一种急性、发热、接触性传染病，具有高度传染性和致死性。目前已经有多种猪瘟病毒疫苗被研制出来，而且在实际应用中也取得了比较理想的效果，但在很多猪场部分猪群也出现了免疫失败的情况，说明增进猪群猪瘟抗性的研究仍需持续开展。近年来，血红蛋白直接抑制病毒的分子机制被揭示，血红蛋白β亚基与细胞RIG-I相互作用可激活RIG-I信号通路，从而上调IFN-β的表达，进而抑制猪瘟病毒的增殖（如图 1）（Dan 等，2013）。

图1 HB抑制CSFV增殖和复制的分子机制

研究表明，复方菠菜提取物、VB12合剂可以提升动物造血功能，提高动物的血红蛋白浓度。本文通过研究血红蛋白与猪瘟抗体水平关系及复方菠菜提取物、VB12合剂对猪瘟抗体水平的影响，以期为实际生产中对猪瘟的抑制提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 复方菠菜提取物、VB12合剂由广州三行生物科技有限公司提供，其主要成分为1%菠菜提取物，100 mg/kg VB12等。

1.2 试验一：猪瘟病毒抗体水平与血红蛋白浓度的关系

1.2.1 试验设计 试验于广东省选取了3个猪场（HY猪场、SF猪场、SJ农庄），分别随机挑选不同阶段的猪（表1）进行猪瘟抗体水平及相应血红蛋白浓度的检测。

1.2.2 猪瘟病毒抗体检测 采用IEDXX猪瘟ELISA抗体试剂盒，按照试剂盒推荐标准进行检测及数据计算。

a．计算公式：

对照：

式中：NCx为阴性对照抗体滴度值；NC1A（450）为第一个阴性对照在450 nm波长吸光度值；NC2A（450）为第二个阴性对照在450 nm波长吸光度值。

表1 3个猪场猪群选取情况

b．判定标准：

阴性：阻断率≤30%，可疑：30%＜阻断率＜40%，阳性：阻断率≥40%。

1.3 试验二：复方菠菜提取物、VB12合剂对不同阶段猪血红蛋白浓度的影响

1.3.1 复方菠菜提取物、VB12合剂对母猪及所产仔猪血红蛋白浓度的影响

1.3.1.1 试验设计与饲养管理 试验于海南某大型猪场进行，试验期为母猪产前30 d至分娩。试验选取体况、胎次相近的母猪600头，随机分为两组，对照组和试验组，每组各300头母猪，对照组饲喂基础日粮，试验组在基础日粮中添加500 g/t的复方菠菜提取物、VB12合剂。试验基础日粮参照NRC（1998）妊娠母猪营养推荐需要量配制，具体见表2。试验期间母猪饲养管理按照猪场正常程序进行，每日两餐，自由饮水。

式中：PCx为阳性对照抗体滴度值；PC1A（450）为第一个阳性对照在450 nm波长吸光度值；PC2A（450）为第二个阳性对照在450 nm波长吸光度值。

试验有效性判定：

NCx>0.005 PCx阻断率>50%。

样品：

表2 母猪的基础日粮组成及营养水平

1.3.1.2 血红蛋白浓度测定 采用优利特URIT-15血红蛋白分析仪进行检测。母猪血红蛋白浓度测定：每组各随机挑选80头母猪，于产前3 d检测每头母猪耳缘静脉血红蛋白浓度。初生仔猪血红蛋白浓度测定：每组各随机挑选80头母猪检测其初生仔猪1日龄（打铁针前）耳缘静脉血红蛋白浓度，每窝随机挑选2头仔猪。

1.3.2 复方菠菜提取物、VB12合剂对保育猪血红蛋白浓度的影响

1.3.2.1 试验设计与饲养管理 试验于福建XH猪场进行，试验期36 d。选取健康、体重相近的30日龄仔猪160头，随机分成两组，对照组和试验组，每组4个重复，每个重复20头保育猪。对照组饲喂基础日粮，试验组在基础日粮中添加400 g/t的复方菠菜提取物、VB12合剂。试验基础日粮组成及营养水平见表3。试验期间保育猪饲养管理按照猪场正常程序进行，每天定时喂料，自由饮水。

1.3.2.2 保育猪血红蛋白浓度测定 采用优利特URIT-15血红蛋白分析仪进行检测。于试验结束当天，每个重复随机挑选10头保育猪，检测其耳缘静脉血红蛋白浓度。

1.4 试验三：复方菠菜提取物、VB12合剂对猪瘟抗体水平的影响

1.4.1 试验设计与饲养管理 试验地点为浙江某猪场，试验期39 d。试验选取健康、体重相近的30日龄保育猪320头，随机分为两组，对照组与试验组，每组各8个重复，每个重复20头保育猪。试验组在基础日粮中添加500 g/t复方菠菜提取物、VB12合剂，一直饲喂至检测猪瘟抗体水平结束；对照组饲喂基础日粮。基础日粮组成及营养水平见表4。猪群于试验结束前24 d进行猪瘟疫苗免疫，并于试验结束时进行猪瘟抗体滴度检测。试验期间保育猪饲养管理按照猪场正常程序进行，每天定时喂料，饮水自由。

表3 保育猪基础日粮组成及营养水平

表4 保育猪基础日粮组成及营养水平

1.4.2 猪瘟病毒抗体检测 采用北京金诺百特科技有限公司猪瘟病毒抗体检测试剂盒，按照试剂盒推荐标准进行检测及数据计算。

a．试验有效性判定：阴性对照 OD值＞0.5；阳性对照OD值＜0.5。

b．计算方法：

计算待检样品猪瘟病毒抗体的阳性对照抗体滴度值（PC）：

c．判定标准：

样品PC＜40%，判为阴性；样品PC≥40%，判为阳性；如果结果可疑，检查样品有无污染或者重检；如果重检结果依然可疑，应结合猪场流行病学情况，重新采样并检测。

1.5 数据统计 采用SPSS 17.0进行数据分析，数据表示为“平均值±标准误”，采用邓肯法进行差异显著性分析。

2 试验结果

2.1 试验一：猪瘟病毒抗体水平与血红蛋白浓度的关系 由图2、3、4可知，猪瘟抗体水平与血红蛋白浓度均有正相关趋势。

2.2 试验二：复方菠菜提取物、VB12合剂对母猪及所产仔猪血红蛋白浓度的影响 由表5可知，通过给母猪饲喂一个月复方菠菜提取物、VB12合剂，试验组母猪血红蛋白浓度相对对照组提高26.27%，且差异显著（P＜0.05）。试验组仔猪血红蛋白浓度相对对照组提高18.84%，且差异显著（P＜0.05）。说明通过给母猪饲喂复方菠菜提取物、VB12合剂可以提高母猪及所产仔猪血红蛋白浓度。

表5 复方菠菜提取物、VB12合剂对母猪及所产仔猪血红蛋白浓度影响g/L

由表6可知，通过给保育猪饲喂一个月复方菠菜提取物、VB12合剂，试验组保育猪血红蛋白浓度相对对照组提高9.60%，且差异显著 （P＜0.05）。说明通过给保育猪饲喂复方菠菜提取物、VB12合剂可以提高其血红蛋白浓度。

表6 复方菠菜提取物、VB12合剂对保育猪血红蛋白浓度的影响g/L

2.3 试验三：复方菠菜提取物、VB12合剂对猪瘟抗体水平的影响 如表7所示，试验组猪瘟抗体水平高于对照组，是对照组的1.5倍（P＜0.05），且标准误比对照组小，说明复方菠菜提取物、VB12合剂可以提高猪瘟抗体水平，且均匀度较好。

表7 复方菠菜提取物、VB12合剂对猪瘟抗体水平的影响

3 讨论

血红蛋白是最重要的酸碱缓冲物质，红细胞中的血红蛋白及其钾盐是重要的维持机体体液平衡的缓冲物质，对维持机体健康有重要作用 （刘佳，2010），其可增强动物抗应激及疾病抵抗力；红细胞也是免疫细胞，是机体抗病的重要力量。红细胞具有“免疫黏附作用”，细菌、病毒遇到红细胞比遇到白细胞的机会多500~1000倍，红细胞可以吸附病菌，然后将其递呈给白细胞，将白细胞的吞噬能力提高4~5倍，另外，红细胞表面的溶酶体酶可直接吞噬病菌 （郭峰，1995）；血红蛋白浓度低，即贫血，会影响到机体的免疫反应，特别是对细胞免疫功能的影响尤为显著（P＜0.01）（姚金水等，2013）。这可能是因为贫血会影响抗体制造及抗原抗体反应，因为二者皆需要适宜的温度及pH，而贫血对二者皆有影响（刘佳，2010；王黎生，2004；徐令和廖清奎，1990）。本研究结果表明，猪瘟抗体水平与血红蛋白浓度呈正相关，与以上理论相一致。

菠菜提取物中的卟啉为血红素的重要结构，其也被用作生产补血造血的产品，而维生素B12的主要生理功能是参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血（周晋等，2004）。本试验结果中复方菠菜提取物、VB12合剂可以提高猪血红蛋白浓度，与以上结论一致。同时该试验结果也表明复方菠菜提取物、VB12合剂可以提高猪的猪瘟抗体滴度。

血红蛋白能通过抑制猪瘟病毒的增殖（Dan等，2013），提高机体抵抗力并增加猪瘟抗体滴度，从而增加猪群对猪瘟的抵御力。提高血红蛋白浓度将有利于对猪瘟的抵抗作用，据调查表明，20%的仔猪血红蛋白浓度低于90 g/L，严重贫血；75%的猪场血红蛋白浓度低于110 g/L，处于贫血状态（Anne，2014）。对国内猪场进行大量的检测，发现贫血现象更为普遍，有96%的母猪血红蛋白浓度低于110 g/L，29.5%的母猪血红蛋白浓度低于90 g/L（数据待发表）。因此，提高猪群的抗猪瘟能力，必须先减少猪群的贫血现状。

4 结论

本试验结果表明，猪瘟抗体水平与血红蛋白浓度呈正相关趋势，而复方菠菜提取物、VB12合剂可以提高猪血红蛋白水平，从而提高猪瘟抗体水平。