某部队女性HPV感染情况及流行病学分析*

欧红玲，马盈盈，李晓宁，白 静，张巧云，王 岩，王欣茹

(火箭军特色医学中心医学检验科，北京 100088)

人乳头瘤病毒(HPV)是感染人表皮和黏膜鳞状上皮细胞的常见DNA病毒。在已发现的HPV 200多种不同亚型中，超过40种可以感染人类的生殖器官，约30种与肿瘤有关[1]。HPV 可以通过多种途径感染生殖道而导致尖锐湿疣及宫颈病变，甚至引起宫颈癌的发生[2]。本研究应用荧光PCR方法对2012年1月至2018年4月期间660例某部队患者的生殖道脱落细胞进行基因分型，旨在探讨 HPV基因分型检测在部队女性宫颈癌防治方面的临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 标本来源于2012年1月至2018年4月期间来本院筛查的某部队660例女性患者的宫颈脱落细胞。年龄19～65岁，平均37.2岁。

1.2仪器与试剂 上海之江SLAN 96P PCR扩增仪(上海之江生物科技股份有限公司)，高危型HPV分型核酸测定试剂盒(上海之江生物科技股份有限公司)，低危型HPV分型核酸测定试剂盒(上海之江生物科技股份有限公司)。

1.3方法

1.3.1标本采集 使用专用配套的HPV 采样管。采样前拭去宫颈口过多的分泌物，再用宫颈刷于子宫颈外口处，轻压并依顺时针方向旋转3～4周。采样宫颈刷浸入盛有1 mL无菌生理盐水的专用HPV样本管中，充分漂洗贴壁挤干后丢弃，立即送检。未即时检测样本置于2～8 ℃医用冰箱保存，所有样本均于当天或次日检测完毕。

1.3.2标本处理 从专用HPV 采样管中吸取混匀后液体1～1.5 mL离心管中(如分泌物较多，只取0.2 mL)13 000 r/min离心5 min。小心吸弃上清，沉淀加无菌生理盐水1 mL混匀，13 000 r/min离心5 min，再次小心吸弃上清。沉淀直接加100 μL核酸提取液充分混匀，沸水浴10 min，然后13 000 r/mim离心5 min，取上清作为PCR反应模板。吸弃的上清液、核酸提取后的剩余上清液及相关废弃物均按医疗废弃物处理。每次检测均设置阴阳对照：取阴阳对照品各100 μL置于1.5 mL离心管中(冻存试剂融解后震荡混匀10 s)，分别加入核酸提取液50 μL充分混匀，沸水浴10 min，然后13 000 r/min离心5 min，取上清作为PCR反应模板。

1.3.3PCR扩增 取4种HPV核酸荧光PCR检测混合液n×36 μL分别与4份n×0.4 μL Taq酶，振荡混匀数秒，3 000 r/min离心数秒。加入已提取好的待测样本DNA 4 μL配置PCR反应体系，然后，低速离心数秒后，按下述参数进行PCR反应：94 ℃×2 min；再按93 ℃×10 s →62 ℃×31 s，循环40次；单点荧光检测在62 ℃。反应体系为40 μL。仪器自动读取实验结果。4种HPV核酸荧光PCR检测混合液分别用于检测16、56、31和内部参照；18、52、58、68；45、82、33、35；39、51、59、66基因型。当阳性对照品扩增曲线为典型的S型，且FAM和VIC通道ct值 35，阴性对照为阴性时，判断结果有效。

1.4统计学处理 采用SPSS22.0软件对实验数据进行统计学分析，各年龄段的阳性率统计分析用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HPV总体感染和各亚型分布情况 对570例女性患者的宫颈脱落细胞进行 13种高危型HPV基因分型，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型。570例女性患者中，后期入组的294例女性患者的宫颈脱落细胞增加了 2种高危型HPV基因分型，包括66和82型。对90例女性患者的宫颈脱落细胞进行2种低危型HPV(6+11)检测。HPV阳性者共203例，其中156例为高危型感染，47例为低危型感染。HPV高危亚型感染率前五位依次是：HPV 58(4.9%)、HPV 39(4.04%)、HPV 16(3.68%)、HPV 52(3.5%)、HPV 66(2.72%)，低危型HPV(6+11)阳性率52.2%。见表1。

2.2HPV混合感染情况 156例高危HPV感染者中，以单一感染为主，其次为双重感染，三重感染次之。单一高危HPV感染111例，占总感染者71.15%，双重HPV感染29例，占总感染者18.59%，三重及以上感染(同时存在3种或以上HPV亚型感染)共16例，占10.26%，见表2。

表1 检测标本HPV 17种基因亚型分布情况

表2 570例标本中HPV混合感染情况[%(n/n)]

2.3各年龄段高危HPV感染情况 3个年龄段高危HPV感染检测数、例数百分比、阳性率、检出率和占阳性数百分比最高的年龄段均是>30～50岁，其次是≤30岁年龄段。对3个年龄段的阳性率进行χ2检验，表明感染者的年龄差异有统计学意义(χ2=9.96，P<0.05)。见表3。

表3 不同年龄段HPV感染情况

3 讨 论

在全球妇科肿瘤中，宫颈癌的发病率位居第二，仅次于乳腺癌，严重威胁女性健康。据统计全球每年约有46.6万宫颈癌新发病例，中国约占世界新发病例总数的1/5[3]。近年来，大量研究表明HPV感染是引起宫颈癌变的主要因素之一，宫颈癌患者约有99.7%能检测出HPV DNA[4]。HPV属于乳头瘤病毒科，目前已发现200多种基因亚型[5]。根据HPV亚型致病力大小或致癌危险性大小不同，HPV可分为高危型和低危型。低危型致病力相对较弱，不整合于细胞基因组中，主要导致皮肤疣类感染、生殖道及肛门周围皮肤等湿疣样良性疾病(如尖锐湿疣和性传播疾病)，而高危型致病力强，整合于细胞基因组中，主要导致宫颈癌和非典型增生。有学者认为HPV病毒载量与宫颈癌及宫颈癌前病变呈正相关[6]，HPV DNA病毒载量越高，整合到宿主细胞的机会越多，患者宫颈病变越严重[7]。特别在免疫机能较弱的女性，因无法消灭进入体内的HPV，导致高危HPV持续感染，从而增加了罹患宫颈癌的风险，因此将HPV检测列入宫颈癌筛查方案，用于指导宫颈癌的预防[8]。

本研究中，某部队女性人群高危 HPV 感染率为23.64%，在156例高危HPV感染者中，HPV单一型别的感染率为71.15%，双重感染率次之，为18.59%，多重感染率(>3)最低，为3.85%。与李欣荣等[9]报道的湖南HPV阳性率为26.57%，单一感染占72.52%，双重感染率为19.74%的结果相似。另外，从本研究基因亚型分布情况可见，HPV高危亚型感染以58(4.9%)、39(4.04%)、16(3.68%)、52(3.5%)、66(2.72%)最为常见，而16和18亚型在单一感染中出现颇多，在混合感染中也较常出现，可见16和18亚型与宫颈病变之间有密切联系。低危型(6+11)感染在临床有症状病人中检出率很高，达到了52.2%，表明其对尖锐湿疣等疾病的发生发展发挥了重要的作用。再者，本研究中HPV感染前七位亚型分别是58、39、16、52、66、18和31，与DE SANJOSÉ等[10]报道的东南亚地区不一致，与赵芹等[11]报道的东莞地区常见亚型不一致，也与龙馨等[12]报道的重庆地区亚型分布有差异。结果表明，在HPV基因亚型分布上，存在明显的地区差异。本研究中，进行HPV检测数最多的年龄段是>30～50岁，这个年龄段的检出率较高，可能与HPV传播途径有关，凡有性生活的女性，都有可能通过性接触将HPV带入生殖道内，因此加强此年龄段女性筛查的力度及宣传教育，对宫颈癌的早预防具有积极作用。另外，≤30岁年龄段的检出率也不低，为19.15%，说明高危HPV感染具有年轻化的趋势，这可能与年龄相对小的女性对HPV抵抗力弱或过早性交有关，因此应加大部队中青年女性HPV的普查力度。

4 结 论

综上所述，持续的高危型HPV感染是宫颈癌发生的危险因素。利用实时荧光PCR技术对HPV进行基因分型检测，灵敏度高，重复性好，操作简单，适合大批量样本检测。通过HPV筛查，可进一步了解HPV感染及各亚型的分布情况，有助于指导部队进行女性宫颈癌的预防筛查及宫颈癌的早期诊断、早期治疗，从而降低宫颈癌的发生率和病死率。