新生儿呼吸窘迫综合征血清IL-6、TNF-α及Th1/Th2水平变化及其临床意义

万 娟，曾洪琳，钟晓梅

(四川省资阳市第一人民医院，a儿科；b新生儿科，四川 资阳 641300)

新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)是新生儿时期常见、多发病，又称肺透明膜病，同时也是导致新生儿死亡的重要原因[1]，多发于早产儿，大部分NRSD患儿在出生数小时后可能出现进行性呼吸困难、呼吸衰竭等表现，面色青灰或灰白，青紫明显，病理见肺泡壁至终末细支气管壁附着嗜伊红透明膜[2]。目前尚未完全明确NRDS发病的确切机制，早期多认为肺组织及全身炎症反应在NRDS发病中有重要作用[3]。近年来有学者表示，免疫调节紊乱及辅助性T细胞(Th)功能失衡参与NRDS发病过程[4]。Th1/Th2细胞是反映机体免疫状态的重要指标，两者免疫调节平衡是维持细胞免疫及体液免疫的基础，其可分泌促炎细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)及抗炎细胞因子白介素-4(IL-4)，反映Th1、Th2免疫应答状况[5]。但目前对NRDS患儿血清炎症因子及Th1/Th2的变化情况及临床价值尚少见报道。为探讨NRDS患儿血清白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及Th1/Th2水平的变化特点及其临床意义，现对医院收治的90例NRDS患儿展开相关研究，报道如下。

1 对象与方法

1.1研究对象2013年2月至2017年5月我院新生儿重症监护室(NICU)收治的90例NRDS患儿。纳入标准：均符合NRDS诊断标准[6]；为早产儿，出生6 h内出现进行性呼吸困难，胸片见双侧肺透明膜肺野透亮度降低，内部见网状阴影及颗粒，支气管见充气征；血气分析伴低氧血症和(或)高碳酸血症；家属均知情且自愿签署研究同意书；经医院伦理委员会批准。排除标准：吸入性肺炎、湿肺者；B族溶血性链球菌宫内感染者；合并心血管系统疾病者；合并神经系统畸形者；合并呼吸系统疾病者；合并器质性甲状腺疾病者；新生儿败血症、高胆红素血症者；已接受治疗者；家属不同意参与研究者。其中男51例，女39例；体质量(2045.7±540.6)g；分娩方式：自然分娩39例，剖宫产51例；出生时间(6.5±1.2)h；其中Ⅰ级10例，Ⅱ级24例，Ⅲ级45例，Ⅳ级11例。

1.2NRDS病情严重程度评定通过观察NRDS患儿肺部X射线的变化进行病情严重程度分级，参照文献[7]。Ⅰ级：双肺野透亮度降低，充气减少，见均匀散在细小颗粒与网状阴影，心缘、膈缘清晰；Ⅱ级：较Ⅰ级加重，且可见支气管充气征，延伸至肺野中外带；Ⅲ级：肺部病变加重，肺野透亮度明显降低，见磨玻璃样影，见心缘、膈缘模糊；Ⅳ级：双侧肺野呈白色，支气管充气征显著，胸廓扩张好，横膈位置正常。

1.3方法

1.3.1治疗方法 参考《欧洲新生儿呼吸窘迫综合征防治共识》[6]对所有NRDS患儿给予NICU护理及相关治疗，包括基础治疗、机械通气、肺表面活性物质(牛肺表面活性剂)治疗等。

1.3.2血清指标检测方法 所有对象于治疗前、治疗后采集空腹肘静脉血3 ml，4000 r/min离心后留取血清，低温保存待测。采用酶联免疫吸附法测定血清IL-6、TNF-α、IL-4、IFN-γ水平，IL-6、TNF-α试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，IL-4、IFN-γ试剂盒购自上海森雄科技实业有限公司，酶标仪购自美国Bio-Rad公司，严格参照试剂使用说明进行操作，试剂批内变异率<6.0%，并计算IFN-γ/IL-4比值。正常参考值：IL-6：0.11～ 0.27 pg/ml；TNF-α：1.20～3.20 pg/ml；IFN-γ：1.21～5.51 μg/L。

1.4统计学方法采用SPSS 20.0软件分析数据。计数资料比较采用χ2检验；计量资料以均数±标准差表示，行正态性和方差齐性检验，不符合正态分布数据进行自然对数转化呈正态或近似正态分布，多组比较采用单因素方差分析，组内采用LSD-t检验；采用Pearson相关系数评价NRDS患儿治疗前严重程度分级与血清IL-6、TNF-α及Th1/Th2水平的关系。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1不同严重程度分级NRDS患儿血清IL-6、TNF-α水平比较治疗前，不同严重程度分级NRDS患儿血清IL-6、TNF-α比较差异均有统计学意义(P< 0.05)，Ⅱ级患儿IL-6、TNF-α水平高于Ⅰ级，Ⅲ级患儿高于Ⅱ级，Ⅳ级患儿高于Ⅲ级(P< 0.05)，见表1。

表1 不同严重程度分级NRDS患儿血清IL-6、TNF-α水平比较 (pg/ml)

*与Ⅰ级比较，P< 0.05；#与Ⅱ级比较，P< 0.05；△与Ⅲ级比较，P< 0.05

2.2不同严重程度分级NRDS患儿血清Th1、Th2相关细胞因子水平比较治疗前，不同严重程度分级NRDS患儿IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4比值比较差异均有统计学意义(P< 0.05)，Ⅱ级患儿IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4比值高于Ⅰ级，IL-4水平低于Ⅰ级，Ⅲ级患儿IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4比值高于Ⅱ级，IL-4水平低于Ⅱ级，Ⅳ级患儿FN-γ水平、IFN-γ/IL-4比值高于Ⅲ级，IL-4水平低于Ⅲ级(P< 0.05)，见表2。

表2 不同严重程度分级NRDS患儿血清Th1、Th2相关细胞因子水平比较

*与Ⅰ级比较，P< 0.05；#与Ⅱ级比较，P< 0.05；△与Ⅲ级比较，P< 0.05

2.3相关性分析NRDS患儿严重程度分级与治疗前血清IL-6、TNF-α水平及IFN-γ/IL-4比值呈正相关(r=0.365，0.412，0.343，P< 0.05)。

2.4NRDS患儿治疗前后血清IL-6、TNF-α水平比较NRDS患儿治疗后血清IL-6、TNF-α水平均较治疗前明显降低(P< 0.05)，见表3。

表3 NRDS患儿治疗前后血清IL-6、TNF-α水平比较(pg/ml)

*与治疗后比较，P< 0.05

2.5NRDS患儿治疗前后血清Th1、Th2相关细胞因子水平比较NRDS患儿治疗后血清IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比值均较治疗前明显降低，IL-4水平较治疗前明显升高(P< 0.05)，见表4。

表4 NRDS患儿治疗前后血清Th1、Th2相关细胞因子水平比较

*与治疗后比较，P< 0.05

3 讨论

NRDS系由肺表面活性物质缺乏所引起的新生儿危重症，大部分患儿预后较差，其病理改变表现为肺泡渗出液透明膜及富含蛋白质水肿形成，伴肺间质纤维化，主要由肺内巨噬细胞、嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润所致肺内炎性反应失调所致肺泡血管损伤所致，导致肺部毛细胞血管通透性提升，引起肺水肿，最终可能进展为呼吸衰竭，增加患儿死亡风险，早期确诊NRDS，明确患儿病情严重程度则可为其诊治提供依据。

目前较多临床证据均表明促炎因子及抗炎因子在NRDS发病中有其关键作用[8]。TNF-α、IL-6均典型促炎细胞因子，又称前炎性因子，其中TNF-α为炎症早期最主要前炎性因子，被认为是导致NRDS发病的关键因子，主要由单核细胞及巨噬细胞产生，可启动、放大全身及局部炎症反应。NRDS患儿肺部损伤后肺泡巨噬细胞释放大量TNF-α，并快速激活损伤粒细胞、内皮细胞等效应细胞，促进脂质代谢产物、氧自由基及溶酶体酶等释放，进一步加重组织细胞受损程度，加重NRDS病情。此外，TNF-α可动员、强化、粘附及激活多形核白细胞，进一步诱导白介素-1(IL-1)、IL-6等分泌，增加机体炎症反应。王娜等[9]调查发现，NRDS患儿血清TNF-α处于较高水平。本研究发现，NRDS患儿血清TNF-α水平明显随NRDS病情严重程度的提升而增加，表明TNF-α可能参与NRDS炎症反应过程，且与患儿病情进展存在密切关联。IL-6又称作B细胞刺激因子，生物活性较强，且具备明显免疫调节作用，主要由内皮细胞、T细胞及单核细胞产生，在感染、休克、创伤等刺激下，IL-6表达异常上调，可激活C反应蛋白及补体表达，导致细胞功能受损，同时可上调粘附因子表达，激活血管内皮细胞、星形胶质细胞，造成淋巴细胞活化，加剧机体炎症反应。且O’Leary等[10]发现，IL-6可激活中性粒细胞，促进超氧化合物及巨噬细胞分化及浸润，加强炎症反应。本研究发现，NRDS患儿血清IL-6水平随病情进展而逐渐上升，与Terragni等[11]结论一致，提示IL-6在NRDS发病及病情进展中有重要作用。

近年来也有研究者指出，Th细胞功能的变化在新生儿肺部疾病中有重要作用。Th细胞所分泌细胞因子包括Th1、Th2两个细胞亚群，其中Th1细胞主要分泌IFN-γ、TNF-β、白介素-2(IL-2)等促炎因子，可强化杀伤炎性细胞细胞毒性。而Th2细胞则主要分泌IL-4、白介素-10(IL-10)等抗炎症介质，介导体液免疫应答。一般将IFN-γ、IL-4作为衡量Th1、Th2细胞功能的关键指标，两者以负反馈机制相互调节，维持机体免疫平衡。而在病理条件下，Th1/Th2比例失衡，产生免疫漂移，造成机体免疫调节紊乱，介导多类疾病病理过程。Schmidt等[12]表示，Th细胞所分泌的IFN-γ、IL-4等因子在NRDS病理过程中有关键作用。也有学者发现，急性肺损伤小鼠Th1类细胞因子IFN-γ细胞因子明显上升，而Th2类细胞因子IL-4降低[13]。本研究表明NRDS患儿机体存在明显炎性反应失控表现，存在不同程度的免疫调节紊乱现象，且随NRDS患儿病情的提升，免疫失调更为明显。

本研究进一步分析发现，NRDS患儿严重程度分级与治疗前血清IL-6、TNF-α水平及IFN-γ/IL-4比值呈正相关，证实上述因子的变化与患儿病情进展密切相关。且NRDS患儿治疗后血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比值均较治疗前明显降低，IL-4水平较治疗前明显升高，提示上述因子的变化可作为评价NRDS患儿治疗效果的重要指标，但其与临床疗效的关系仍有待进一步证实。因此，在NRDS患儿的临床治疗中，必须重视炎症/抗炎反应的平衡调节，促进Th1/Th2平衡向Th2优势倾斜，调节机体免疫，减轻患儿机体炎症反应。

综上所述，NRDS患儿血清TNF-α、IL-6及Th1相关细胞因子IFN-γ均处于较高水平，而Th2相关细胞因子IL-4水平较低，IFN-γ/IL-4比值较高，且上述因子的变化与患儿病情进展密切相关，提示炎症反应及免疫调节失衡在NRDS发病及病情进展中有重要作用，因此必须重视NRDS患儿的抗炎治疗及免疫调节。