血清异常凝血酶原、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、甲胎蛋白联合检测对HBV相关HCC的诊断价值分析

田江川

(四川大学华西广安医院检验科，四川 广安 638000)

肝细胞癌(HCC)为消化系统常见恶性肿瘤，其早期诊断与治疗难度大，疾病进展快，死亡率高，而乙型肝炎病毒(HBV)感染是我国HCC发病的最常见原因[1]。甲胎蛋白(AFP)为诊断肝癌常用肿瘤标志物，但其灵敏度与特异度有待提高，而异常凝血酶原(DCP)为维生素K缺乏或拮抗剂Ⅱ诱导的蛋白质，是伴随HCC特异产生的异常凝血酶原，磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)则是蛋白聚糖家族成员，在细胞生长、分化及迁移方面发挥重要作用，其蛋白水平在大多数HCC组织中呈高表达[2，3]。然而单项血清标志物检测极易出现假阳性及假阴性，使灵敏度、特异度偏低，因此常联合检测多项血清标志物提高疾病检出率[4，5]。本文分析血清DCP、GPC3、AFP联合检测在诊断HBV相关HCV中的临床价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料2017年1月至2018年6月我院收治的80例HBV相关HCC患者(HBV+HCC组)，另选择同期无HBV感染或携带史的HCC患者40例(HCC组)及30例健康体检者(对照组)，纳入标准：①所有肝癌患者均符合2017年版《原发性肝癌诊疗规范》[6]中HBV相关HCC诊断标准，有明确的HBV感染病史，抗丙型肝炎病毒(HCV)阴性，肝硬化患者也经临床诊断及影像学确诊；②健康体检者心、肺、肝、肾功能正常，无肿瘤或肿瘤家族史；③所有患者均在告知本研究后签署知情同意书，自愿配合参与本研究。排除标准：①肝癌患者发生全身转移或伴恶液质；②肝癌患者或肝硬化患者抗HCV阳性，临床资料记录不完整；③有重要脏器功能异常、肿瘤家族史的健康体检者。HBV+HCC组男52例，女28例；年龄28～63岁[(45.18±4.63)岁]；Child肝功能分级：A级43例，B级37例，HCC组男27例，女13例；年龄29～62岁[(45.14±4.68)岁]；Child肝功能分级：A级21例，B级19例，对照组男16例，女14例；年龄27～63岁[(45.06±4.71)岁]，三组性别、年龄等基线资料比较差异无统计学意义(P> 0.05)，HBV+HCC组、HCC组的Child肝功能分级比较差异也无统计学意义(P> 0.05)，有可比性。

1.2方法均在入院后清晨取空腹静脉血4 ml，于4 ℃、3000 r/min速率下离心10 min，分离得血清，保存于-20 ℃冰箱待检。以酶联免疫吸附试验测定血清DCP、GPC3水平，试剂盒分别由上海通蔚试剂公司、武汉优尔生科技股份有限公司提供，检验方法：准备试剂、样品及标准品，加入准备好的样品与标准品，在37 ℃反应30 min，后洗板5次，加入酶标试剂，37 ℃反应30 min，再次洗板5次，加入显色液A、B，37 ℃反应30 min，加入终止液，15 min内读取OD值，计算出DCP、GPC3含量。采用罗氏E601电化学发光检测系统与配套试剂测定AFP水平，具体检验方法参照试剂盒说明书进行，试剂盒内有质控血清及质控标准品，所有操作严格依据说明书进行。正常参考值：GPC3≤0.3 μg/L，DCP≤40 mAU/ml，AFP≤7 ng/ml，超出相应范围均记为阳性。

1.3观察指标三组血清DCP、GPC3、AFP水平及阳性率；以病理结果为准，应用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清DCP、GPC3、AFP联合检测诊断HBV相关HCC的价值，计算约登指数(约登指数=灵敏度+特异度-1)；依据6个月后预后情况分为存活组、死亡组，比较其入院时的血清DCP、GPC3、AFP水平。

1.4统计学方法采用SPSS 19.0软件处理数据。计数资料比较采用χ2检验，计量资料比较采用方差分析及LSD-t检验，应用ROC曲线、kappa一致性检验分析血清DCP、GPC3、AFP联合检测诊断HBV相关HCC的价值。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1三组血清DCP、GPC3、AFP水平比较HBV+HCC组血清DCP、GPC3、AFP水平高于HCC组和对照组，HCC组高于对照组(P< 0.05)。见表1。

表1 三组血清DCP、GPC3、AFP水平比较

*与对照组比较，P< 0.05；#与HCC组比较，P< 0.05

2.2三组血清DCP、GPC3、AFP阳性率比较HBV+HCC组血清DCP、GPC3、AFP阳性率高于HCC组和对照组，HCC组血清DCP、GPC3阳性率高于对照组(P< 0.05)，两组血清AFP阳性率比较差异无统计学意义(P> 0.05)。见表2。

表2 三组血清DCP、GPC3、AFP阳性率比较 [n(%)]

*与对照组比较，P< 0.05；#与HCC组比较，P< 0.05

2.3血清DCP、GPC3、AFP单项、两项及三项联合检测的诊断价值血清DCP、GPC3、AFP单独诊断HBV相关HCC时，以GPC3诊断灵敏度、特异度、准确度最高。三项联合检测诊断灵敏度高于AFP、DCP+AFP诊断，特异度高于DCP、AFP诊断，准确度高于DCP、AFP、DCP+AFP诊断(P< 0.05)，三项联合诊断时kappa值、约登指数、曲线下面积(AUC)分别为0.675、0.700、0.843。见表3、表4、图1。

表3 血清DCP、GPC3、AFP单项、两项及三项联合检测诊断结果

图1 血清DCP、GPC3、AFP单项、两项及三项联合检测的ROC曲线

2.4血清DCP、GPC3、AFP对HBV相关HCC预后的评估价值HBV相关HCC患者中6个月后死亡20例，存活60例，死亡组入院时的血清DCP、GPC3、AFP水平高于存活组(P< 0.05)。见表5。

表4 诊断效能分析

*与DCP+GPC3+AFP比较，P< 0.05

表5 血清DCP、GPC3、AFP对HBV相关HCC预后的评估价值

3 讨论

HCC发病率位居所有肿瘤第五位，其癌症相关死亡率居于第三位，而研究表明，80%原发性肝癌患者有HBV感染或肝硬化疾病基础，HCC恶性程度高，病程进展快，早发现及治疗对延长患者生命与改善生活质量有重要意义，肝硬化患者的定期筛查有利于原发性肝癌的早期诊断[7]。对于HCC高危人群，最常用的监测方法是定期检测血清AFP水平及影像学手段如腹部彩超等，但敏感性与特异性不佳，近年来随蛋白组学技术发展，筛选新的肿瘤标志物成为可能，各种有希望的肿瘤标志物相继发现[8]，其中DCP已失去正常凝血酶原功能，可产生与肝脏恶性癌变相关的生物学效应，而GPC3是在胎盘及胎肝等组织高表达的蛋白聚糖，而在正常成人肝组织中基本无表达[9]，因此考虑DCP、GPC3、AFP联合检测在HBV相关HCC中有较一定诊断价值。

本研究结果显示，HBV+HCC组的血清DCP、GPC3、AFP水平明显高于HCC组、对照组，且HCC组、对照组血清DCP、GPC3、AFP水平也存在统计学差异，这与费乐学等[10]的研究结果相近，表明DCP、GPC3、AFP参与HBV相关HCC的发生发展，DCP为近年来研究较热的肝癌肿瘤标志物，其表达水平主要与肝细胞缺氧及低维生素K浓度引起凝血酶原合成异常有关，与正常凝血酶原相比，DCP结构特点为谷氨酸区中一个或多个谷氨酸残基无法被羧化为γ羧基谷氨酸，继而失去凝血功能，可促进血管内皮细胞异常增殖及迁移[11]，因此在HBV相关HCC中患者中DCP出现异常升高，GPC3则是1996年Pilia等在研究过度生长综合征中发现的膜性硫酸乙酰肝素糖蛋白，可结合多种生长因子并调节其活性，影响多种生物效应分子，在细胞生长发育与癌变过程中起着关键作用[12]。AFP虽然是检测HCC常用肿瘤标志物，但在分化程度好或退行发育的HCC中可能仅有轻度或没有AFP升高，对于肿瘤直径小的微小病灶检出率仍不高，而良性或特殊疾病等情况下AFP也可为阳性，本研究中发现，HBV+HCC组血清DCP、GPC3、AFP阳性率明显高于HCC组、对照组，HCC组血清DCP、GPC3阳性率也较对照组高，而HCC组、对照组的AFP阳性率对比差异无统计学意义，因此在常规AFP基础上，联合DCP及GPC3可能有助于提高HBV相关HCC检出率，陈妙等[13]的研究也发现，血清DCP、GPC3检测可提高对AFP阴性的原发性肝癌检出率。卢凌鹏等[14]的研究显示，AFP、GPC3、DCP及血管内皮生长因子(VEGF)四项联合诊断原发性肝癌的灵敏度、特异度、AUC分别为0.852、0.800、0.818，均高于任何一种标志物单独检测。本研究中kappa一致性检验及ROC曲线分析结果显示，血清DCP、GPC3、AFP联合检测诊断HBV相关HCC的灵敏度、特异度、准确度均较三项指标单项诊断或两两联合诊断更高，其中三项联合检测诊断灵敏度高于AFP、DCP+AFP诊断，特异度高于DCP、AFP单独诊断，准确度高于DCP、AFP、DCP+AFP诊断，差异有统计学意义，而三项联合诊断时kappa、约登指数、AUC最高，分别为0.675、0.700、0.843，这与上述研究结果相近，提示DCP、GPC3、AFP具有广谱性，单一检测时诊断效能低，如AFP作为常见HCC肿瘤标志物，诊断灵敏度、特异度、准确度均在60%以下，而AFP联合DCP、GPC3后可互为补充、互为印证，有助于提高诊断效能，使诊断HBV相关HCC的灵敏度、特异度、准确度提高至80%以上，有一定应用价值[15]。同时本研究也发现死亡组入院时的血清DCP、GPC3、AFP水平高于存活组，表明入院时血清DCP、GPC3、AFP对HBV相关HCC患者预后也有一定评估价值。

综上所述，血清DCP、GPC3、AFP联合检测诊断HBV相关HCC的效能较好，有助于提高诊断灵敏度、特异度、准确度，且对患者预后有一定评估价值，值得在临床推广实践。