Mer受体酪氨酸激酶蛋白在胃癌组织中的表达及意义

董娟娟,胡显桥

(1.成都市龙泉驿区第一人民医院 病理科，四川 成都 610100;2.成都市龙泉驿区第一人民医院 普外科，四川 成都 610100)

全球范围内胃癌位居恶性肿瘤的第4位，2013年我国胃癌死亡人数约为30.1万，病死率为22.13/10万[1-2]。目前，寻找癌症标志物是基础研究和临床研究中广泛关注的话题。Mer受体酪氨酸激酶(MerTK)是TAM(Tyro3/Axl/Mer)受体酪氨酸激酶家族成员之一，表达于巨噬细胞、神经细胞和NK细胞。与生长阻抑特异性蛋白6和蛋白S结合后，可识别凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸。另外，MerTK可以通过自身磷酸化参与吞噬凋亡细胞的过程[3-4]。既往研究发现，MerTK在肺癌、结肠癌等癌组织中高表达[5]，但是关于胃癌的报道较少。体外研究发现，MerTK可以促进胃癌细胞株sgc-7901增殖、抑制凋亡的发生[6]。本文采用免疫组化法检测胃癌组织中MerTK蛋白的表达，旨在评估MerTK在胃癌组织和正常胃黏膜组织中表达的差异，并分析MerTK激活与胃癌患者病理特征和预后的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料 收集2014年1月至2017年4月在我院诊治的胃癌患者121例，所有肿瘤均经过病理组织活检，术前均未接受任何形式的治疗。术中共获得121例胃癌组织标本和67例癌旁组织标本。癌旁组织标本定义为距癌症病灶5 cm的组织[7]。所有标本均用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片。121例患者中男性95例，女性26例；年龄35～80岁，平均(60.2±6.4)岁；肿瘤最大直径0.5～13 cm，平均(4.7±1.0) cm；贲门癌35例，非贲门癌86例；TNM分期：T115例，T228例，T329例，T449例，N051例，N116例，N226例，N328例；胃癌分期：Ⅰ期30例，Ⅱ期33例，Ⅲ期58例。

1.2 试剂 兔抗人MerTK抗体购于上海生物工程有限公司(货号AP7662a)；SP免疫组化检测试剂盒购于上海麦约尔生物有限公司(目录编号:YM-BM1948)。

1.3 方法 采用免疫组化SP法检测胃癌组织和癌旁组织MerTK蛋白的表达[6]。显微镜下观察，以细胞核和胞浆出现棕黄色颗粒为阳性。阳性细胞百分比评分：无阳性细胞记为0分，阳性细胞百分率≤50%记1分，51%～75%记2分，≥75%记3分；细胞核和胞浆染色评分：胞浆或胞核不着色0分、色淡1分、色适中2分、色深3分。每张切片的阳性细胞百分率得分和染色程度得分两项相加作为最后得分。总分为0～1分记为阴性(-)，2～3分记为弱阳性(+)，4～5分记为阳性(++)，6分以上记为强阳性(+++)，以阴性至弱阳性为低表达，阳性至强阳性为高表达[8]。

2 结果

2.1 MerTK蛋白表达 121例胃癌组织中MerTK蛋白高表达49(40.5%)例，低表达72(59.5%)例，MerTK蛋白主要表达于细胞质。而在癌旁组织中，MerTK蛋白为低表达(100.0%，见表1，图1)。

A:癌旁组织表达阴性；B：胃癌组织表达强阳性，SP法×100。图1 MerTK蛋白的表达强度

表1 MerTK蛋白的表达强度[例(%)]

项目例数MerTK-++++++胃癌组织12112(9.9)60(49.6)39(32.2)10(8.3)癌旁组织6720(29.9)47(70.1)0(0) 0(0)

2.2 MerTK蛋白表达与胃癌患者病理指标的关系 MerTK蛋白表达与胃癌患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤Lauren分型、远处转移和TNM分期有关(P<0.05，见表2)。多因素分析结果显示，年龄(>60岁)、肿瘤Lauren分型(弥漫型)、远处转移和TNM分期(Ⅲ期)是MerTK蛋白高表达的独立影响因素(P<0.05，见表3)。

表2 MerTK蛋白表达与胃癌患者病理指标的单因素分析[例(%)]

病理参数例数低表达(n=72)高表达(n=49)χ2 P 年龄(岁) ≤605139(54.2)12(24.5)10.5310.001 >607033(45.8)37(75.5)性别 男9555(76.4)40(81.6)0.4750.491 女2617(23.6)9(18.4)肿瘤部位 胃近端2011(15.3)9(18.4)0.8300.660 胃中端6638(52.8)28(57.1) 胃远端3523(31.9)12(24.5)肿瘤直径(cm) ≤55340(55.6)13(26.5)9.9790.002 >56832(44.4)36(73.5)肿瘤Lauren分型 肠型5040(55.6)10(20.4)14.885<0.001 弥漫型7132(44.4)39(79.6)组织类型 乳头状腺癌104(5.6)6(12.2)0.2450.970 管状腺癌6045(62.5)15(30.6) 黏液腺癌219(12.5)12(24.5) 印戒细胞癌3014(19.4)16(32.7)分化程度 高1710(13.9)7(14.3) 中3521(29.2)14(28.6)1.3250.357 低6840(55.6)28(57.1) 其他11(1.4)0(0)浸润深度 T1+T24325(34.7)18(36.7)1.8400.606 T3+T47847(65.3)31(63.3)淋巴结转移 是6322(29.7)41(83.7) 否5850(70.3)8(16.3)远处转移23.963<0.001 是5340(55.6)13(26.5) 否6832(44.4)36(73.5)TNM分期9.9790.002 Ⅰ+Ⅱ6345(62.5)18(36.7) Ⅲ5827(37.5)31(63.3)

表3 MerTK蛋白表达与胃癌患者病理指标的多因素分析

参数BSEWaldP OR95%CI年龄(>60岁)5.2642.3542.0120.0372.1571.578～3.012Lauren分型(弥漫型)3.2482.0583.0110.0251.8941.987～2.341远处转移6.0143.1464.0210.0132.3481.024～4.357TNM分期(Ⅲ期)6.0842.7042.0080.0341.1691.444～3.647

B：截距；SE：标准误；Wald：卡方值；OR：比值比；CI:可信区间。

2.3 随访情况 所有患者均随访至2018年4月，随访时间为9～39个月，中位随访时间为36.5个月。随访期间有11例胃癌患者死亡，均是由于肿瘤复发。

2.4 MerTK蛋白与生存预后的关系 以整组中位数作为中值进行分组， 胃癌患者的预后和MerTK蛋白表达强度及MerTK蛋白染色积分有关(P<0.05)。多因素分析发现，MerTK蛋白的表达强度是胃癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05，见表4)。

MerTK蛋白低表达患者的2年生存率为63.6%，明显高于高表达患者，差异有统计学意义(χ2=8.574，P=0.003)。进一步Kaplan-Meier分析发现，MerTK蛋白低表达的Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期胃癌患者的生存率分别为86.5%、61.3%和40.1%，均高于高表达患者的55.4%、31.7%和9.0%，差异有统计学意义(χ2=32.547，P<0.001；χ2=20.647，P<0.001；χ2=29.147，P<0.001)。

表4 MerTK蛋白与生存预后的关系[n(%)]

项目例数2年生存期死亡(n=11)生存(n=110)χ2PMerTK蛋白表达强度 低表达722(18.2)70(63.6)8.5740.003 高表达499(81.8)40(36.4)MerTK蛋白染色阳性率 ≤中值603(27.3)57(51.8)2.410.121 >中值618(72.7)53(48.2)MerTK蛋白染色积分 ≤中值703(27.3)67(60.9)4.640.031 >中值518(72.7)43(39.1)

3 讨论

Bang等[9]发现化疗联合赫赛汀治疗HER2阳性的胃癌可延长患者的生存时间，这显示了分子靶向治疗的优势。因此寻找胃癌的生物标志物和治疗靶点已成为胃癌诊治的热点话题。MerTK是TAM受体酪氨酸激酶家族成员之一，参与了细胞凋亡等生理过程[10]。既往研究发现，MerTK在白血病、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌、垂体腺瘤和横纹肌肉瘤等癌组织中高表达[5,11-12]，但是关于胃癌的报道较少。本研究发现，胃癌组织中MerTK蛋白表达水平明显升高，且MerTK蛋白的高表达与胃癌的不良预后有关。

本研究检测了121例胃癌组织样本，发现MerTK蛋白高表达占40.5%，这说明MerTK作为胃癌生物标志物的价值可能并不是很大。Yi等[6]回顾性分析了192例胃癌患者，其中有16例患者表现出MerTK蛋白强阳性表达。本研究发现，年龄(>60岁)、肿瘤Lauren分型(弥漫型)、远处转移和TNM分期是MerTK蛋白高表达的独立影响因素。另外，MerTK高表达患者的死亡率较MerTK低表达患者高。这就提示高龄、弥漫型胃癌、有远处转移和TNM分期为Ⅲ期的患者预后较差，而MerTK蛋白可能为中介因素。既往研究发现，弥漫型胃癌、有远处转移、TNM分期为Ⅲ期是影响胃癌患者5年生存率的高危因素[13-15]，因此这类患者是临床上重点关注的对象。

MerTK影响胃癌患者预后的机制目前尚未明了，Kim等[16]对10个胃癌细胞系进行研究，发现MerTK过表达可以激活下游ERK和AKT的磷酸化，RXDX-106作为MerTK抑制剂或可作为治疗胃癌的新药物。既往一项综述表明，MerTK可通过激活MAPK、JAK/STAT、FAK/RhoA/MLC2等通路调控癌症的表达和侵袭等[5]。

MerTK蛋白的表达与肿瘤放化疗的疗效有关，Xie等发现，MerTK表达水平的升高与埃罗替尼的抗药性有关[17]。另外，还有学者发现，接受放疗患者的癌组织中单核细胞MerTK蛋白表达量升高，MerTK可能是一个特异性放疗靶点[18-19]。

本研究的局限性为：①本研究为回顾性研究，未来需要开展前瞻性研究，以明确MerTK在胃癌预后中的作用；②本研究随访时间相对较短，未来需要探讨MerTK的表达对胃癌患者5年生存率的影响；③未对MerTK对胃癌影响的机制进行研究，这也是本研究以后研究的方向。

综上，年龄(>60岁)、肿瘤Lauren分型(弥漫型)、远处转移和TNM分期(Ⅲ期)是MerTK蛋白高表达的独立影响因素。胃癌组织MerTK蛋白的高表达与患者预后有关。