GLP屏障环境动物实验室SD大鼠标准生物学指标的建立

王丽芳 代宝强 谭余庆 刘 婷 王 洋

(中国中医科学院中药研究所，北京 100029)

大鼠是实验室广泛使用的模型动物，在毒理学，药物，行为学，营养学和代谢疾病等多个研究中都有较为广泛的应用[1-2]，大鼠可作为许多疾病模型，如自发性高血压、抑郁症、子宫内膜炎、过敏性哮喘、神经性疼痛、糖尿病、大鼠高脂血症和房颤等[3-10]，马秀兰等[11]探讨了成年大鼠脏器系数，陈长勋等[12]测定了正常SD大鼠的部分生物数据，孙于兰等[13]探讨了喂养SD大鼠30 d的食物利用率及脏器系数的正常值，由于样本数较小，环境不一，且统计数据较少，因此具有局限性，但是由于试验过程中大鼠的遗传、周龄、性别、个体差异、喂养环境、设施、测量仪器、来源等多项因素的差异，对一些应激产生的反映也各不相同，大鼠的组织、脏器等的生长发育、运行状态也不尽相同，对大鼠的血液及生理生化指标也会产生影响[14-18]，目前GLP屏障环境动物实验室正常SD大鼠的标准生物学指标尚未十分明确。本文统计分析GLP屏障环境动物实验室10批次长期毒性试验的正常对照组SD大鼠饲喂过程中的日常摄食量、体质量增长、脏器指数、血液指标及生化指标，建立正常SD大鼠的标准生物学指标数据，为以后SD大鼠长期毒性试验提供全面、可靠的正常值数据参照标准，和以后GLP屏障环境动物实验室的大鼠试验提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物及饲养管理

实验在中国中医科学院中药安全评价中心屏障环境动物实验室进行，选取SPF级，体质量120～140 g健康SD大鼠，饲养在中国中医科学院中药研究所屏障环境动物实验室，使用许可证SYXK(京)2013-0035，各组均正常给予饲料及饮水，饲料经60Co照射、饮水经反渗透净化处理、垫料均采用125 ℃高压灭菌。雌2 000只，雄2 000只，分成10批次，每批次雌雄各200只，每组10只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK(京)2012-0001，饲料为大鼠维持饲料，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。分笼饲养，每5只一笼，雌雄分开，室温20 ℃左右，雄性大鼠体质量达到200 g时再次分笼。

1.2 大鼠一般情况与行为学观察及摄食量、体质量检测

10批次作为长期毒性试验的正常对照组SD大鼠适应性饲喂一周后，再饲养7个月，包括6个月测试时期和1个月恢复期，每天观察大鼠的一般情况与行为学，包括精神状态，皮毛色泽，运动，对外界的反应是否灵敏，有无多饮多食，有无腹泻、便秘交替。每周精确称取一次大鼠的体质量与摄食量，并做好记录。

1.3 大鼠脏器指数、血液指标及血清生化指标检测

分别饲喂大鼠3、6个月后按照48 mg/kg体质量注射0.8%戊巴比妥钠麻醉各组大鼠，解剖检查及计算大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑、睾丸/卵巢、附睾/子宫系数等脏器系数。相对脏器系数计算公式为：脏器系数=脏器质量(g)/体质量(g)×100%。

分别于3、6、7个月后采用腹主动脉采血，使用全自动生化分析仪(东芝，40FR)分析各组大鼠中血液指标，包括RBC、HCT、MCV、RDW、HGB、MCH、MCHC、PLT、PCT、MPV、PDW、WBC、LYM%、NEUT%、EOS%、BASO%、MONO%、RET、PT、APTT。另取静脉血，3 000 g离心15 min分离血清，测量血生化指标，包括：TP(g/L)、ALB(g/L)、TBIL(μmol/L)、AST(U/L)、ALT(U/L)、ALP(U/L)、GGT(U/L)、CK(U/L)、CRE(μmol/L)、UREA(mmol/L)、GLU(mmol/L)、CHO(mmol/L)、TG(mmol/L)、A/G(mmol/L)、GLB(mmol/L)和O/P(mmol/L)。

1.4 统计方法

2 结果

2.1 一般行为学观察、体质量及摄食量观察

通过观察各组大鼠的一般行为学状态正常：精神状态良好，皮毛色泽洁白，有光泽，运动状态良好，对外界的反应灵敏，无多饮多食，无腹泻、便秘交替现象。同性别大鼠摄食量无显著差异，体质量呈增长迅速，雄性比雌性增长速度快，摄食量也多，说明雄性SD大鼠比雌性生长发育速度快(表1～4)。

表1 10批正常SD大鼠(♂)7个月中的摄食量变化Table 1 Dietary change of ten batches of normal SD rats(♂)during 7

表2 10批正常SD大鼠(♀)7个月中摄食量变化Table 2 Dietary change of ten batches of normal SD rats(♀)during 7

表3 10批正常SD大鼠(♂)7个月中体质量增长Table 3 Weight gain of ten batches of normal SD rats(♂) during 7

表4 10批正常大鼠(♀)7个月中体质量增长Table 4 Weight gain of ten batches of normal SD rats(♀) during 7

2.2 大鼠脏器指数、血液指标及血清生化指标检测

第3个月、6个月和7个月试验周期结束检测脏器指数、生化指标、血液指标(表5～13)。数据表明雄性大鼠的脏器指数逐渐下降，雌性脏器指数无明显变化，表明大鼠的脏器质量随着体质量逐渐增加，各个时间段大鼠的血液和血清生化指标无明显差异。

表5 10批正常大鼠6个月中第3个月脏器系数Table 5 Organ coefficients at 3 months of ten batches of normal SD rats during 6

表6 10批正常大鼠6个月验中第6个月脏器系数Table 6 Organ coefficients at 6 months of ten batches of normal SD rats during 6

表7 10批正常大鼠(♂)恢复期脏器系数Table 7 Organ coefficients at recovery phase of ten batches of normal SD

表8 10批正常SD大鼠6个月中第3个月的血液指标Table 8 Blood indicators at 3 months of ten batches of normal SD rats during 6

表9 10批正常SD大鼠6个月中第6个月的血液指标Table 9 Blood indicators at 6 months of ten batches of normal SD rats during 6

表10 10批正常SD大鼠6个月中恢复期的血液指标Table 10 Blood indicators at recovery phase of ten batches of normal SD rats during 6

表11 10批正常SD大鼠6个月中第3个月的生化指标Table 11 Biochemical indices at 3 month of ten batches of normal SD rats during 6

表12 10批正常SD大鼠6个月中第6个月的生化指标Table 12 Biochemical indices at 6 month of ten batches of normal SD rats during 6

表13 10批正常SD大鼠6个月中恢复期的生化指标Table 13 Biochemical indices at recovery phase of ten batches of normal SD rats during 6

3 讨论

本次试验统计结果的特点为：样本量大，误差小；实验地点固定：全部在中国中医科学院GLP中心屏障动物实验室进行；饲喂条件固定：SPF级，给予充足饲料及饮水；品系、来源相同：同为SD大鼠，且雌雄分开；周龄固定；初始体质量接近；各项指标均标准化；具有一定的代表性，能够为以后在中国中医科学院GLP中心屏障动物实验室进行的SD大鼠长期毒性试验提供良好的数据支持，结果表明SD大鼠的雄性生长发育较快，饲料利用率较高，脏器质量随着体质量的增长而逐渐增加，血液指标和生化指标在各个时期无明显变化。能够作为大鼠长期毒性试验的标准生物学指标，为以后中国中医科学院GLP中心屏障动物实验室SD大鼠的长期毒性试验及饲养提供参考标准。