HPLC测定秋水仙碱片前处理的优化
2019-04-10叶丹怡
叶丹怡
(上海市金山食品药品检验所，上海 201505)
秋水仙碱是典型的细胞有丝分裂毒素，其结构中的C环与微管蛋白结合，阻止其聚合成纺锤丝，使细胞有丝分裂停止于中期，临床上主要作为抗痛风药。秋水仙碱片收载于中、美、英等国的药典。本实验按照中国药典2015年版二部，采用高效液相色谱法，并采用UV检测方法，对2批0.5 mg和2批1 mg的秋水仙碱含量进行测定。
1 材料与方法
1.1 仪器
高效液相色谱仪Agilent1260（美国安捷伦公司）。
1.2 试药与试剂
秋水仙碱共4个批次（1 mg的批号分别为A厂161R，17BN；0.5 mg的批号分别为B厂151120，170204）抽于市场；秋水仙碱对照品来源于中国食品药品检定研究院，批号为101176-201202，含量为93.6%；甲醇为色谱纯，水为纯化水（符合中国药典规定）。
1.3 色谱条件
色谱柱：C8柱：ZORBAX SB-C8 150 mm×4.6 mm，3.5 μm，流动相：甲醇-水（40∶60）；流速为1.0 mL/min。检出波长为254 nm。
1.4 供试品溶液的制备
①直接制备。取样品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于秋水仙碱1 mg），置于100 mL量瓶中，加水适量，振摇1 h使秋水仙碱溶解，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，取滤液作为供试品溶液。
②其他制备。取4批片剂各20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于秋水仙碱1 mg），每批称取平行的2份，即8份样品，分别置于100 mL量瓶中，分别加5%甲醇、10%甲醇、15%甲醇及20%甲醇适量，振摇1 h使秋水仙碱溶解，用上述溶剂分别稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液。
1.5 对照品溶液的制备
取秋水仙碱对照品10 mg，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1 mL中约含10 μg的溶液。
1.6 系统适用性试验
取上述对照品溶液20 μL注入液相色谱仪中，理论塔板数为10975，回校率为99.4%，符合规定。
1.7 测定法
取上述对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算秋水仙碱的含量。
2 结果与分析
2.1 HPLC-UV法测定不同规格碱片中秋水仙碱的含量
两种规格的碱片秋水仙碱含量见表1。
表1 两种规格的秋水仙碱含量
2.2 不同浓度甲醇溶液制成供试品的秋水仙碱含量
不同浓度甲醇溶液制成供试品的秋水仙碱含量见表2。
表2 不同浓度甲醇溶液制成的供试品的秋水仙碱含量
2.3 加标回收
取1.5步骤中0.1mg/mL的对照品溶液5 mL3份，分别置于不同的50 mL容量瓶中，分别精密加入0.1 mg/mL的对照品溶液2.0mL、3.0mL及4.0mL，计算得出的回收率分别为99.1%、99.4%及99.5%，平均回收率为99.3%，相对标准偏差为0.21%，说明所得的数据准确可靠。
3 讨论
（1）按中国药典2015年版的供试品提取方法，两种规格秋水仙碱片所测得的含量均大大低于标准规定，造成假阳性的检测结果；但如果使用适量甲醇破坏溶液的过饱和现象，就能避免这种假阳性。
（2）溶剂中甲醇含量的不同也使相同条件下秋水仙碱片的溶解度也有所区别，但是在15%甲醇溶液和20%甲醇溶液中，基本保持在一个稳定值，由此可见，这两个浓度的甲醇溶液已经成功破坏过饱和现象造成的假阳性，可以使用这两个浓度的甲醇溶液替代水溶液来作为秋水仙碱片含量测定处理时的溶剂。
