CD38、RANTES 及CAFs 标志物在食管癌中的表达及临床意义

孙玉荣，杨帆，赵春兰，于秀文，王显艳，胡南，叶榕

（齐齐哈尔医学院病理学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006）

0 引言

食管癌是临床较为常见的一种消化道肿瘤。目前，已有大量的研究证实[1]，食管癌肿瘤细胞生长迅速，向邻近组织浸润蔓延较快，因此，充分认识食管癌的浸润和蔓延机制对于早期防治食管癌具有重要的意义。有文献报道[2]，肿瘤的微环境与患者的机体免疫反应参与了肿瘤的浸润生长。本研究为进一步明确食管癌的浸润和蔓延机制，将免疫细胞与微环境结合起来研究，主要就CD38、RANTES 及CAFs 标志物在食管癌中的表达情况以及其临床意义展开探讨。

1 资料和方法

1.1 一般资料

将2016 年9 月至2018 年3 月我院的54 例食管癌患者纳入到本次研究中，有男31 例，女23 例，年龄49～82 岁，平均年龄（64.59±5.10）岁；病理类型：低级别上皮内瘤变12 例、高级别上皮内瘤变24 例、早期癌9 例、进展期癌9 例。所有标本均来源于手术切除标本，患者术前均未进行放化疗或其他方法治疗，其中将食管癌组织标本设为实验组，另将食管癌癌旁组织标本设为对照组。

1.2 方法

采用免疫组化（SP 法）检测CD38、RANTES 与CAFs 标志物α-SMA、FAPα 的表达情况，具体操作如下：①脱蜡脱水：将实验的标本玻片烘烤30min，并采用二甲苯脱蜡再进行梯度酒精脱水；②抗原修复：用PBS 缓冲液洗涤玻片后加入抗原热修复液进行10min 的加热修复，室温冷却；③血清封闭：每张玻片分别滴加50µL 的山羊血清工作液封闭处理，同时添加内源性生物素以作封闭；④在玻片上分别滴加一抗工作液(CD38 单克隆抗体、RANTES 单克隆抗体、α-SMA 单克隆抗体、FAPα 单克隆抗体)，放置在4℃冰箱中过夜。24h 后取出将其置于常温环境中，用PBS 液冲洗3 次；⑤滴加二抗：每张玻片分别滴加50µL 二抗工作液，置于37℃中孵育30min，并用PBS 冲洗；⑥滴加三抗：每张玻片滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，置于37℃中孵育30min；⑦显色：每张玻片滴入适量的DAB 显色剂，并在显微镜下对其显色状况作适当的调整，随后在蒸馏水中冲洗3min 以终止显色反应；⑧苏木素复染；⑨封片：取适量二甲苯作脱蜡透明处理，且使用中性树胶作封片。与此同时，取适量PBS 缓冲液代替一抗进行上述操作以作阴性对照。

1.3 阳性表达的评定标准

待观察到棕黄色颗粒后，需在显微镜下仔细察看其细胞中的表达部位，并随机挑选5 个视野观察，若阳性细胞百分比≥75%评4 分，51%～75%评3 分，26%～50%评2 分，6%～25%评1 分，≤6%评0 分，其中，将2～4 分评为阳性表达。

1.4 统计学方法

选用SPSS 20.0 软件，计数资料经χ2检验，以%表示，差异有统计学意义为P＜0.05。

2 结果

实 验 组CD38、RANTES 以 及α-SMA、FAPα 的阳性表达率显著高于对照组（P＜0.05），见表1。且实验组中食管上皮从瘤变到癌变过程的CD38、RANTES、α-SMA、FAPα 的阳性表达率逐渐升高，差异均具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 两组CD38、RANTES、α-SMA、FAPα 阳性表达比较

表2 不同病理类型食管癌CD38、RANTES、α-SMA、FAPα 阳性表达比较

3 讨论

目前临床中，已有大量的研究发现[4-5]，免疫系统具有免疫抑制效应，在肿瘤的发生发展中起着一定的作用。免疫因子CD38 属于一种单链型的跨膜糖蛋白，其作用主要是参与细胞的黏附与细胞信号的传导[6]。王运刚[7]的研究显示，CD38 可通过分泌各种免疫抑制性分子，并向体内传递免疫抑制信号，进而发挥阻止免疫反应、促癌细胞生长的作用。受激活调节正常T 细胞表达的分泌因子（RANTES）作为一种趋化因子，具有调节免疫细胞功能，介导T 淋巴细胞迁徙转移的功能。相关研究报道[8-9]，RANTES 利用趋化作用可直接诱导癌细胞发生迁徙，促使癌细胞向淋巴结转移，与此同时，RANTES 还可通过转变癌灶的免疫状态，使癌细胞发生免疫逃逸，促进其浸润生长。于鸿[10]对食管鳞状细胞癌的肿瘤转移相关标志物进行检测发现，癌相关成纤维细胞（CAFs）的标志物α-SMA、FAPα 能够释放多种作用于癌细胞的细胞因子和生长因子，使其起到促癌灶血管形成的作用，这可在一定程度利于肿瘤侵袭、转移。本研究结果也显示，实验组CD38、RANTES 以及α-SMA、FAPα 的阳性表达率显著高于对照组，且食管癌患者中食管上皮从瘤变到癌变过程的CD38、RANTES、α-SMA、FAPα 的阳性表达率逐渐升高，提示，食管癌组织中的CD38、RANTES 及CAFs 标志物呈高表达，且与癌变发展进程呈正相关。

综上，CD38、RANTES 及CAFs 标志物在食管癌生长、浸润和蔓延中发挥着一定的作用，有望成为临床预测食管癌患者预后的可靠指标。