结肠癌中骨桥蛋白与环氧化酶-2的表达及临床意义

姜晓倩，赵岭岭，李景光，刘艳彩，吴春平

结肠癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤疾病，随着人类生活方式和运动方式的改变，结肠癌发病率呈逐渐升高趋势，成为威胁人类健康的又一非传染性疾病[1]。目前临床主要以手术切除治疗为主，但需尽早发现和诊断，以及早采取手术切除治疗。然结肠癌早期临床症状无特异性，缺乏特异性特征，易被掩饰，从而致早期诊断十分困难[2]。有调查发现[3-4]，长期大量使用阿司匹林等非甾体类抗炎药物者，其发生结肠癌率可降低40%～50%，但其具体作用机制尚不完全清楚，因此致该药物推广及应用受限。以往有研究发现[5-6]，非甾体类抗炎药物可通过抑制环氧化酶途径来抑制肿瘤生长与转移。环氧化酶主要是催化花生四烯酸代谢产生前列腺素的限制速酶，其与人类多种肿瘤相关，并参与肿瘤发生、发展过程。有研究发现[7]，诱导型COX-2过度表达致人体PGs水平升高在人类多种肿瘤发生、发展中起着十分重要的作用，同时其还可有效抑制肿瘤细胞凋亡等，对促进肿瘤复发及转移有一定作用，因此研究COX-2表达水平具有重要价值。骨桥蛋白可通过与受体整合素等结合来加速细胞迁移等，与多种肿瘤发生和转移等有关，此外，其还可抑制肿瘤细胞凋亡，加速细胞外基质降解等[8]。本文研究为探讨COX-2、OPN在结肠癌组织中的表达状况，特收集相关样本进行研究，以提高对结肠癌的诊断，更好的改善患者预后。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院病理科2015年1月～2018年12月期间存档的100例结肠癌手术标本作为观察组，肿瘤直径<5 cm者48例、≥5 cm者52例；浸润浆膜者69例、浸润浆膜及肌层者31例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期22例、Ⅲ～Ⅳ期78例；淋巴结转移情况：转移者54例、无转移者46例；中高分化者40例、低分化者60例；年龄25～75岁，平均(55.6±2.6)岁；男70例、女30例。另选取100例癌旁正常组织作为研究对照组。两组患者一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

分别应用免疫组化法检测两组OPN与COX-2表达情况，试剂：兔抗人COX-2单克隆抗体、鼠抗人OPN单克隆抗体、封闭用正常山羊血清工作液和兔血清封闭液及生物素标记二抗工作液、DAB显色液。过氧化物酶标链霉卵白素工作液，均购置于北京中山生物技术公司。4 μm连续石蜡切片，然后贴附于洁净的载玻片上，并放置于60 ℃烤箱中烘烤，时间180 min；石蜡切片，并脱蜡至水；采用3%过氧化氢进行孵育，时间为5 min，采用蒸馏水冲洗，应用PBS溶液浸泡5 min，于pH6.0的10 mm枸缘酸钠缓冲液中加热，共10 min，再采用10%兔、山羊血清进行封闭，10 min；将血清倒去，加入COX-2/OPN一抗，并采用PBS作阴性对照，于4℃环境下孵育过夜。采用PBS溶液冲洗5 min，共3次；然后再滴加二抗，于37 ℃环境下孵育30 min；采用PBS溶液冲洗5 min，共3次，滴加采用过氧化物酶标记的链霉卵白素，于37 ℃环境下孵育30 min；采用PBS溶液冲洗5 min，共3次，再次滴加新鲜配制的DAB显色剂，用水冲洗，并采用苏木素复染，应用梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

1.3 观察指标

分析两者表达水平与临床病理特征间的相关性。阳性：细胞质中出现棕黄色颗粒；选取阳性细胞较为集中的区域10个(400倍)，然后计算阳性细胞百分比，如阳性细胞≥10%则判断为阳性，否则为阴性。由我院2名经验丰富的病理医生在不知病理资料情况进行独立计数。

1.4 统计学方法

采用19.0统计学软件处理，计数资料以%表示，采用卡方检验；相关性分析采用Pearson相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 OPN、COX-2在结肠癌组织与癌旁正常组织中的阳性表达情况

观察组中OPN表达阳性率为84.0%，明显高于对照组17.0%，2=89.789，P=0.000；观察组中COX-2阳性表达率78.0%，明显高于对照组32.0%，2=42.747，P=0.000。见表1。

表1 OPN、COX-2在结肠癌组织与癌旁正常组织中的阳性表达情况

2.2 OPN在结肠癌组织中阳性表达情况

OPN在结肠癌组织中阳性表达与肿瘤TNM分期和分化程度及淋巴结转移有关，P<0.05；见表2。

表2 OPN在结肠癌组织中阳性表达情况

2.3 COX-2在结肠癌组织中阳性表达情况

COX-2阳性表达与肿瘤TNM分期及淋巴结转移有关，P<0.05；见表3。

2.4 PN阳性表达与COX-2阳性表达相关性

经分析发现，100例结肠癌组织中，OPN阳性表达与COX-2阳性表达呈正相关性(r=0.412，P=0.002)。

3 讨论

结肠癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤疾病，目前尚未完全清楚其发病机制，随着人们生活饮食习惯和结构的变化，结肠癌发病率逐渐升高，给人们生命健康造成极大威胁[9-10]。肿瘤发生和生长及浸润、转移是一个较为复杂的变化过程，与较多因素有关，因此了解肿瘤发生和转移等诱发因子具有重要价值[11]。骨和软组织肿瘤的病理诊断应该从仅由形态学判读转变为多种检测手段和检测指标相结合的诊断方式，免疫组化和分子分型是主要的诊断方法。近年来随着分子生物学技术以及基因重组等相关技术的发展，对结肠肿瘤病理过程中的相关分子事件及其相关临床意义的了解也日益深入，为人类结肠癌的早期诊断、治疗以及预测预后提供了更多渠道与手段。结肠癌的进展、转移与癌症的浸润深度、组织学分型、分级等有关，但国内外研究对这些病理指标的相关性、哪些是预后的独立危险因素仍存在争议。骨桥蛋白最先是从恶性转化的上皮细胞株中所提取的，其主要是一种与肿瘤有关的蛋白质，可通过与受体整合素、CD44结合来加速肿瘤细胞粘附和细胞外基质降解来达到抑制肿瘤细胞凋亡的目的，此外，其还可促进新生血管形成，抑制人体免疫功能，最终致肿瘤浸润、转移[12]。较多研究发现[13]，OPN在临床实体肿瘤与动物实验及细胞等研究中，人们发现OPN与肿瘤转移存在紧密联系。OPN可增强肾上腺癌细胞株NCI-H295侵袭能力，同时还可通过转染整合素avβ3来增强OPN侵袭力，此外，OPN过度表达还可胃癌及乳腺癌等肿瘤细胞转移和恶性程度等存在紧密联系，OPN表达阳性者预后偏差[14]。本次研究发现，结肠癌组织标本中OPN阳性表达率明显高于癌旁正常组织，P<0.05；由此说明OPN在结肠癌发生、发展过程中起着重要作用，此外，OPN阳性表达与肿瘤分期和分化程度及淋巴结转移存在紧密联系，但与患者年龄和性别及肿瘤大小无明显关联，这与当前各文献报道结果相似[15]。

表3 COX-2在结肠癌组织中阳性表达情况

环氧化酶主要是人体前列腺素(PGs)合成过程中的限速酶，环氧化酶可将花生四烯酸代谢为各种前列腺素产物，而前列腺素产物可参与到人体生理、病理过程中。COX-2在多数肿瘤中呈现为过度表达，而COX-2过度表达与肺癌和前列腺癌及胃癌等淋巴结转移、浸润及预后不良存在紧密联系[16-17]。本次研究发现，结肠癌组织标本中COX-2阳性表达率明显高于癌旁正常组织，这是因COX-2过度表达可通过合成致癌物质和促进肿瘤血管新生及促进肿瘤粘附等环节来加速肿瘤生成、发展。由此说明COX-2过度表达与结肠癌发生、发展存在紧密联系[1]。本文研究发现，COX-2与结肠癌淋巴结转移、肿瘤分期有关，但与患者性别和年龄及肿瘤大小、分化程度无明显关联，这与当前各学者研究报道结果一致[19-20]；说明COX-2在结肠癌发生、发展中具有重要作用，临床可通过检测COX-2表达水平来判断结肠癌是否出现淋巴结转移，对评估患者预后具有重要价值。此外，本次研究还发现，100例结肠癌组织中，OPN阳性表达与COX-2阳性表达呈正相关性(r=0.412，P=0.002)。由此说明联合检测两者阳性表达状况可为肿瘤复发预测及早期转移等提供重要依据。

综上所述，检测骨桥蛋白与环氧化酶-2表达水平可有利于临床判断结肠癌患者预后，尤其是联合检测，对了解结肠癌组织浸润及转移具有重要价值。尽管本次研究取得明显成效，但对于OPN、COX-2的具体作用机制还有待深入研究与探讨。