ARMS法检测肺腺癌EGFR基因突变分析

吴海乔

（厦门大学附属成功医院病理科 福建 厦门 361001）

一直以来，寻找早期筛查肺癌的方法是学者目前的热门研究问题。表皮生长因子（EGFR）是一种受体型酪氨酸激酶，在细胞的生长、生殖以及分化过程中发挥着重要的调节作用。经过诸多研究发现EGFR在多种肿瘤中会存在突变表达，对肿瘤的生长、侵袭以及转移发挥调节作用。尤其是在肺腺癌中具有较高的突变率[2]。临床实践研究中，分析肺腺癌患者的EGFR基因突变对于患者的靶向治疗疗效具有全面性评价，评价EGFR基因突变检测，对于选择合适的患者进行靶向治疗十分必要。本文则探讨采用ARMS法检测肺腺癌患者的EGFR基因突变并分析。

1.临床资料

收集我院病理科的148例肺腺癌患者标本作为研究对象，包括82例肺活检标本、24例手术切除标本以及42例胸腔积液细胞块标本。所选患者中男性86例，女性62例，年龄在34-78岁之间，所选患者均未进行放化疗及其他抗癌治疗。

2.研究方法

2.1 标本采集与DNA提取

根据经验切取不同类型的肿瘤标本，制作石蜡标本，采用厦门艾德公司的石蜡包埋组织样品 DNA 提取试剂盒，进行DNA提取。调整DNA质量浓度至2ng/μl。

2.2 EGFR检测

检测EGFR基因突变，具体为19del，L858R以及T790M突变。

采用ARMS法检测EGFR基因突变，仪器为ABI 7500荧光PCR仪，试剂盒购自厦门艾德生物公司的人类 EGFR 基因突变检测试剂盒。具体实验操作按照试剂盒说明书进行：取上述DNA标本23.5μl，加入1.5μlTaq酶，进行混匀后取出5μl加入8联管。然后进行程序扩增，95℃ 5min，95℃ 25s，64℃ 20s，72℃ 20s，15个循环；93℃ 25s，60℃ 35s，72℃ 20s，31 个循环。60℃时收集荧光信号。

2.3 统计学分析

采用SPSS19.0统计学软件进行数据分析，计数资料进行卡方检验，结果均以P＜0.05为差异有统计学意义。

3.结果

3.1 EGFR基因在肺腺癌标本中的突变

本文所选148例肺腺癌患者标本，共检测出EGFR基因突变60例（40.5%）。具体基因突变类型，包括19del突变23例(15.5%)，L858R突变34例(23.0%)，19del和L858R双突变2例(1.35%)。本文未检测到T790M突变。

3.2 EGFR 基因突变与肺腺癌临床病理特征的关系

根据是否存在EGFR基因突变，进行分组为EGFR基因突变阳性组和阴性组，比较不同临床资料患者间的差异，结果提示在性别、吸烟史上，EGFR基因突变情况存在差异（P＜0.05）；在年龄及肿瘤家族史上，EGFR基因突变情况不存在差异（P＞0.05）。提示EGFR基因突变与患者的性别及吸烟是存在显著关系。

表1 EGFR基因突变与肺腺癌患者相关因素分析 [n（%）]

4.讨论

在NCCN指南推荐中，对于晚期肺腺癌患者的一线治疗可根据是否存在EGFR等驱动基因事件进行指导，其中EGFR基因突变的类型不同，其靶向治疗效果亦存在一定的差异。因此，临床上准确检测肺腺癌患者的EGFR基因突变，对于指导患者的个体化靶向治疗具有重要意义。EGFR基因突变，与诸多因素有关，如患者因素、检测方法以及标本因素等。

本文在总结既往诸多文献基础上，采用以荧光定量PCR技术为基础的ARMS法，根据不同位点设计的特异性探针，特异性识别并扩增 EGFR 突变序列，尽量减少非肿瘤组织的干扰。通过ARMS检测法，最大限度地缩短扩增产物的目标长度，避免DNA提取出现片段化。结合RT-PCR平台在扩增时采用了一个闭管操作，简单，不需要产物的后处理，较大避免了扩增产物的污染，使得结果更为准确。

本文研究结果提示所选148例肺腺癌患者标本，共检测出EGFR基因突变60例（40.5%），检出率较高，与宿杰·阿克苏相关报道一致[1]。进一步研究EGFR基因突变的临床资料，提示不同性别、吸烟史患者其EGFR基因突变发生率存在差异，女性、不吸烟患者EGFT突变率更高为53.2%、50.5%，提示吸烟会影响患者的EGFR基因突变。而肿瘤家族史以及患者年龄方面因素，不会影响患者的EGFR发生突变。因此，临床上对于女性、不吸烟的肺腺癌患者建议进行 EGFR基因突变检测，进一步指导临床治疗。