砒霜提取物（三氧化二砷）溶液腹腔热灌注化疗毒性实验研究

耿 岩 封 静 曾妃发 陆光生 任宝军 罗振涛

（1南方医科大学顺德医院＜佛山市顺德区第一人民医院＞胃肠外科 广东 佛山 528308)

（2徐闻县第二人民医院普外科 广东 湛江 524100）

近年来，腹腔内脏器的恶性肿瘤频发。手术治疗联合辅助放、化疗或内分泌治疗是当前主要治疗方案。但一些患者治疗后不久即出现腹腔内复发转移。腹腔热灌注化疗(hyperthermic intraperitoneal chemotherapy，HIPEC)是新兴的腹腔恶性肿瘤的辅助治疗手段。目前临床上常用的HIPEC药物有顺铂、卡铂、5-Fu等，但存在肾、耳、神经、胃肠道等不良反应显著及耐药等问题。近来三氧化二砷（As2O3）在血液疾病及实体瘤治疗取得了满意疗效，并用于腹腔灌注化疗，但因其为剧毒药物，安全性有待研究。因此，本实验旨在探讨As2O3在腹腔热灌注治疗中的安全有效性。

1.材料与方法

1.1 实验动物

选取SPF级健康成年SD大鼠，由南方医科大学医学实验动物中心提供。实验前均在实验室内适应性饲养1周。

1.2 实验动物模型建立

将冻存的Walker-256肿瘤细胞复苏后加入含10%新生小牛血清的RMPI-1640细胞培养液培养,将处于对数生长期的Walker-256肿瘤细胞用含0.25%tyrosine和0.02%EDTA的磷酸缓冲液收获,台盼蓝染色进行活细胞计数,活细胞数＞95%,制成细胞浓度为1×105个/ml的细胞悬液。注射器吸取1ml癌细胞悬液穿刺接种于SD大鼠腹腔内，培养1周后，制成荷瘤大鼠。1周后B超检查腹腔内癌肿情况及是否产生癌性腹水。

1.3 动物分组

将60只荷瘤大鼠随机分为6组，每组10只：对照组，As2O3浓度为4.0μmol/L、5.6μmol/L、7.8μmol/L、10.9μmol/L、15.4μmol/L五组。

1.4 三氧化二砷溶液配置

As2O3溶液,即亚砷酸注射液(哈尔滨伊达药业公司产品,批号20001102)。将As2O3加入RPMll640培养液，配制成4.0、5.6、7.8、10.9、15.4μmol/L五个浓度备用，-20℃保存。

1.5 腹腔转移癌术后大鼠模型建立

将喂养1周的荷瘤大鼠统一于全麻下行剖腹探查，检查腹腔内转移癌灶的生长及分布情况，再将不同浓度As2O3溶液加温至43℃后用注射器分别抽取约20ml行单次腹腔热灌注治疗，时间为10min，随后吸除处理液，冲洗净腹腔后关腹。对照组热灌注同温度同体积的生理盐水。对术后大鼠进行7天重点监测。观察术后大鼠生长情况及伤口变化并予以积极对症处理。

1.6 数据采集

观察术后反应如：急性胃肠炎症状（恶心、呕吐、腹泻，粪便呈血性或米汤样），神经精神症状、休克等不良反应情况,记录死亡情况。

1.7 数据统计

数据采用SPSS22.0统计软件进行统计分析，计数资料采用率（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（±s）表示，进行t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1 不良反应发生情况

术后7天内大鼠不良反应发生情况如下（表1），10.9和15.4μmol/L浓度组与4.0、5.6、7.8μmol/L浓度组相比不良反应发生率显著增高，差异具有统计学意义 (P＜0.05)。15.4μmol/L浓度组较10.9μmol/L浓度组不良反应发生率亦显著增高，差异具有统计学意义 (P＜0.05)。

表1 不良反应记录表[n(%)]

2.2 死亡情况

各组大鼠死亡情况如下（表2），15.4μmol/L浓度组大鼠共死亡9例，死亡率较其它组显著增高，差异具有统计学意义 (P＜0.05)。

表 2 死亡结果记录表

3.讨论

腹膜存在“血浆—腹膜屏障”，常规静脉给药难以达到有效的腹腔治疗药物浓度。大部分药物进入其他重要器官产生副作用[1]。随着腹腔肿瘤治疗研究的深入，在腹腔化疗的基础上结合温热疗法提出了HIPEC。保证化疗药物在腹腔内持续高浓度聚集，并直接且高效的作用于腹膜癌结节及腹腔内脱落的癌细胞[2]，效果得到医学界的广泛认可。但化疗药物的选择却是个难题，有研究显示As2O3对肿瘤生长的抑制作用强于常用的HIPEC药物，而不良反应弱[3]。

As2O3是砒霜的主要成份，近年来As2O3在血液系统尤其是急性早幼粒细胞性白血病的治疗取得了满意疗效，并且对胃癌、肝癌、结肠癌等亦具有良好的抗癌效果。不少体外研究表明As2O3对治疗实体肿瘤效果与剂量正相关。提高药物治疗浓度可以显著提高对肿瘤的杀伤作用，但同时亦会产生毒副作用。例如心脏毒效应、肝脏毒性、体液潴留、消化道症状、皮疹等，虽然停药可恢复，但仍严重影响患者缓解率[4-6]。此外，部分患者会出现高白细胞血症、弥漫性血管内凝血、室性心动过速、心源性猝死等重度不良反应[7-8]。

目前针对As2O3经HIPEC方式给药，对全身或局部组织的毒副作用及As2O3热灌注的最大安全剂量国内外未见明确报道。本研究分别用4.0、5.6、7.8、10.9、15.4μmol/L五个浓度As2O3腹腔热灌注治疗，观察了大鼠的毒副反应及死亡情况，发现As2O3浓度在7.8μmol/L时未有明显的不良反应，As2O3浓度在10.9μmol/L时不良反应显著增高，提示最大安全剂量可能在7.8～10.9μmol/L之间，但由于研究样本量太少，不足以得出确切结论，仍需大样本进一步佐证，药物浓度也需进一步细化。