高职院校“鸡新城疫抗体水平测定”技能大赛操作要点探索

2019-03-19张春霞

甘肃畜牧兽医 2019年5期

张春霞

(青海畜牧兽医职业技术学院，青海湟源 812100)

本赛项由学校、行业、企业共同设立。通过采取全国统一标准进行技能竞赛，有效促进全国高职院校畜牧兽医类专业之间的交流，引领专业建设与课程改革；能进一步深化学校与企业之间的合作交流，为专业建设和课程改革增添了新的思路，同时通过本赛项的资源转化，可以向社会展示畜牧兽医类专业的师生风采和建设成果，提高专业的教学水平，提升人才培养质量[1,2]。

1 比赛对照标准

鸡新城疫抗体水平测定技能大赛赛项是以教育部颁布的国家职业标准《动物疫病防治员》（高级）为基础，以国家标准GB/T16550-2008[3]《鸡新城疫诊断技术》为依据，严格按照大赛组委会赛项规定[4]，进行结果判定和评分。

1.1 实验仪器的准备

以2018年全国职业院校技能大赛赛项规程为例。实验器材的准备占实验总成绩的8%。主要要求参赛选手按照操作规程进行器材准备，要求器材选择正确、摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。由赛组委会提供的项目竞赛用仪器、设备与材料共计34项。但在实际操作过程中并不是所有的全部选用，选择仪器设备要以“使用合理的前提下够用”为原则。在仪器与材料准备时要检查清点，并要做好清晰合理的标识。使用的烧杯、离心管、离心管盖和血凝板都要进行标识。实验器材的摆放要严格遵守分区摆放的原则，明确污染区和洁净区各自物品的数量和用途。摆放完毕尽可能的不要去来回挪动器材，尽可能的做好各区域之间的互不干扰。该赛项中主要用到的仪器有不同规格的精准微量移液器及相应的配套材料、离心机、托盘天平、微型震荡器，用到的实验材料及动物有非免疫公鸡、禽用采血器、96孔微型反应板、烧杯等。对仪器的操作和使用要掌握其工作的原理，尤其要做好规范操作和合理使用。

1.2 1%鸡红细胞悬液配制

1%鸡红细胞悬液的配置情况直接影响到实验的进度和实验结果的准确性。而配置过程中采血是否成功是最为关键的。在配置1%鸡红细胞悬液时，首先采血前要做好相关准备工作，采血器的正确选择、鸡的正确保定、3.8%枸橼酸钠的量、采血时的手法、采血的量、采血部位的处理以及后期对使用器材的正确处理等都要严格按照相关规定。其次，要控制好倍比稀释液（生理盐水）的量，以及添加稀释液后的配平，第一次离心时转速和时间的选则、离心完成后是否完全吸取白细胞层和血小板层。最后，在离心管中红细胞吸取的位置、吸取的量，以及吸取后洗涤的次数等都按照参赛规程的评分标准进行操作。对参赛规定和国标要求不够明确的，多次的进行尝试性试验，并每次对比各种操作方法的实验结果选取最佳的操作方法，保证各项操作尽可能规范，提高配置的红细胞浓度的准确性。

1.3 血凝（HA）实验

取血凝反应板，先对其进行标注，尤其标明该反应板为血凝实验操作用，标明第10、11、12孔位置，以防加样时混淆。加样时要确保液体完全加入到v型板的底部，不能加到壁上甚至是溅出到孔外，加样过程中应尽可能的悬空加样，不能出现碰壁的情况，倍比稀释时要确保每一孔的吹吸次数是一样的，加红细胞时一定要边摇边加，尽量保证每一孔当中加入的红细胞的浓度是一样的，加样时应该从后往前加，减少相邻孔之间的交叉污染。抗原悬液的滴加也要从后往前加，加入前也要混匀，减少实验误差。反应板震荡的时间、感作时间和室温的要求严格按照国家标准。结果判定时在生理盐水对照孔呈现明显的纽扣状沉到孔底时判定实验结果。

1.4 配制四单位病毒

四单位病毒（4HAU）的配置要根据血凝实验的结果和待检血清的份数来进行计算。4HAU的配备是否准确会直接影响实验结果的准确性。在平时准备或训练阶段一定要做回滴实验[5]来进行校正配置的4HAU浓度是否准确。生理盐水和抗原的总配置量按照评分标准不能超过10～20 ml。稀释的倍数要反复计算正确，在加入抗原时一定要反复吹洗多次。

1.5 血凝抑制（HI）实验

首先要对反应板进行标记，每个反应板的第10、11和12孔、阴阳性对照组、待检血清都要进行仔细的标记。加入的待检血清的编号一定要跟反应板标记的编号一一对应。每个待检血清加入前都要充分摇匀，加入四单位抗原和红细胞悬液时也要充分混匀，要从后往前边摇边悬空加样，保证每一孔加进去的液体的浓度和数量是一致的。在倍比稀释的过程当中不但要保证每孔吹吸的次数是一样的还要保证倍比稀释不产生气泡。操作时间和结果的判定同样要严格依据国家标准GB/T16550-2008[1]《鸡新城疫诊断技术》的要求，在生理盐水对照孔和阴阳性对照成立的前提下进行结果的判定。