人参灵芝胶囊缓解体力疲劳小鼠的试验

苏婧婧，李庆林

(安徽中医药大学科研实验中心，新安医学教育部重点实验室，安徽合肥 230038)

卫生部《保健食品检验与评价技术规范》对疲劳的定义是机体过用而引起的功能降低并出现机体不适的状态[1]，主要表现为四肢无力、腰酸腿软、气力不足[2]。疲劳的产生主要生理本质是由于代谢产物蓄积，包括乳酸、肝糖原、氮的代谢产物、自由基等[3-4]。中医认为，疲劳现象的出现与五脏的失调有密切的关系，四肢无力多与脾胃有关，腰酸腿软多与肾脏有关，气力不足多与肺脏有关，头脑不清多与心脏有关[5-6]。人参味甘、微苦，性微温，为多年生草本植物，具有滋阴补肾、扶正固本的作用，含多种皂苷和多糖类成分，适用于调整血压、恢复心脏功能、神经衰弱及身体虚脱等症[7]。灵芝味甘，性平，具有补气安神、止咳平喘、滋补强身的功效，含氨基酸、多肽、蛋白质、三萜类、多糖类等，常组方用于神经衰弱、利尿益肾、虚劳咳喘、改善免疫等症状[7]。该研究旨在探讨人参、灵芝2种原料配伍制成胶囊剂缓解体力疲劳的作用。

1 材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验样品。人参灵芝胶囊(自制)，由人参、灵芝水提、浓缩、干燥后加辅料制备而成，0.45 g/粒，每日食用4粒，相当于人体每日食用人参2 g、灵芝2 g。

1.1.2动物分组。 SPF级昆明小鼠，雄性，体重(20±2)g，由安徽医科大学实验动物中心提供，动物质量合格证：No.34000200000691，许可证号：SCXK(皖)2011-002。试验选用健康小鼠160只，分为4个试验组，各试验组动物再分为4组(高、中、低3个剂量组及阴性对照组)，每组10只。经适应性喂养后进行后续试验。

1.1.3主要仪器。ML303电子分析天平、DS-671电子秤、恒温游泳箱、3K15冷冻离心机、TU-1901紫外可见分光光度计、AU400全自动生化仪、BHW2恒温水浴锅。

1.1.4主要试剂。尿素(UREA)测定试剂盒(紫外-谷氨酸脱氢酶法)，购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；肝糖原测试盒、全血乳酸测试盒，购自南京建成生物工程研究所。

1.2试验方法

1.2.1剂量选择、受试样品给予方式和时间。以人体推荐量的20倍换算为小鼠中剂量组，另设高、低剂量组。受试样品连续灌胃30 d，每天1次，每次灌胃体积以20 mL/kg。高剂量组0.9 g/kg(人用剂量30倍)、中剂量组0.6 g/kg(人用剂量20倍)、低剂量组0.3 g/kg(人用剂量10倍)。每周根据小鼠体重调整灌胃剂量。

1.2.2负重游泳试验。最后一次灌胃给药30 min后，用手术线和胶布在小鼠尾部固定5%体重的铅皮，各给药组随机抽取一只置于水深40 cm、水温(25±2)℃的恒温游泳箱中游泳，分别记录各组小鼠自游泳开始至完全没入水中10 s的时间。

1.2.3运动后血清尿素含量测定。最后一次灌胃给药30 min后，将小鼠置于30 ℃的恒温游泳箱中，进行90 min不负重游泳，休息60 min后摘眼球采全血约0.5 mL，分离血清2 000 r/min离心15 min，按照试剂盒的操作步骤，全自动生化仪测定血清中尿素含量。

1.2.4肝糖原含量测定。最后一次灌胃给药30 min后，小鼠颈椎脱臼处死后，解剖取出肝脏，剪碎后称取肝脏(90～100 mg)，按试剂盒的操作步骤，加入碱液沸水浴20 min，取一定量的检测液加入显色剂，沸水浴5 min，620 nm波长，1 cm光径，比色测定各管吸光度，计算肝糖原含量。

1.2.5血乳酸含量测定。最后一次给药30 min后，从小鼠内眦取血50 μL，将小鼠置于30 ℃的恒温游泳箱中，游泳10 min，游泳结束后休息0、20 min后各取血50 μL，按照试剂盒操作说明，530 nm波长，1 cm光径，比色测定各管吸光度，计算血乳酸含量及曲线下面积。

2 结果与分析

2.1人参灵芝胶囊对小鼠负重游泳时间的影响由表1可见，与阴性对照组比较，人参灵芝胶囊高、中剂量组小鼠的负重游泳时间明显延长(P<0.01)，并呈一定的剂量依赖性。

表1 人参灵芝胶囊对小鼠负重游泳时间、运动后血清尿素含量和肝糖原含量的影响

注：与阴性对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

Note：Compared with the negative control group，*P<0.05，**P<0.01

2.2人参灵芝胶囊对小鼠运动后血清尿素含量的影响由表1可见，与阴性对照组比较，人参灵芝胶囊各剂量组均可降低小鼠游泳后的血清尿素含量(P<0.05)，以中剂量组作用最为明显。表明人参灵芝胶囊可减少或抑制疲劳小鼠血清尿素的产生。

2.3人参灵芝胶囊对小鼠肝糖原含量的影响由表1可见，与阴性对照组比较，人参灵芝胶囊高、中、低各剂量组小鼠的肝糖原含量显著升高(P<0.01)。表明人参灵芝胶囊具有促进小鼠肝糖原储备的作用。

2.4人参灵芝胶囊对小鼠血乳酸曲线下面积的影响由表2可见，与阴性对照组比较，人参灵芝胶囊各剂量组小鼠游泳前血乳酸值、游泳后0 min血乳酸值均无显著性影响(P>0.05)；中剂量组可明显降低小鼠游泳后20 min血乳酸值(P<0.05)；中剂量组小鼠血乳酸曲线下面积显著降低(P<0.01)。表明人参灵芝胶囊具有减少小鼠运动后乳酸生成的作用。

表2 人参灵芝胶囊对小鼠血乳酸值及曲线下面积的影响

注：与阴性对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

Note：Compared with the negative control group，*P<0.05，**P<0.01

3 结论与讨论

体力疲劳又称运动性疲劳，是由于机体进行重体力劳动、大运动量活动，由于时间过长，肌肉过度紧张，生物能源消耗过多。疲劳直接的表现主要是运动耐力下降，力竭游泳时间是反映运动耐力的重要指标[8]。负重游泳试验结果表明，与阴性对照组比较，人参灵芝胶囊高剂量组小鼠负重游泳时间显著延长(P<0.01)，人参灵芝胶囊能够提高小鼠的运动耐力，提高机体抗疲劳的功能，延长运动时间。

尿素是哺乳动物蛋白质分解代谢的终产物，随着运动的进行，氨基酸分解代谢增强，血清尿素含量反映的是机体对运动后代谢产物的分解能力，人参灵芝胶囊高、中、低3个剂量组均能降低运动后小鼠血清尿素的含量(P<0.05)，表明人参灵芝胶囊能够加速机体代谢产物的清除，加速疲劳的消解。在长时间游泳后，蛋白质和含氮化学物的分解代谢，体内尿素含量增加，机体对运动负荷能力降低。

在剧烈运动消耗大量血糖时，肌糖原分解供能，为维持血糖水平，机体启用肝糖原，肝糖原的储备量是反映抗疲劳程度的敏感指标[9]。试验结果表明，人参灵芝胶囊高剂量组能显著提高小鼠肝糖原含量(P<0.01)，为机体提供较好的能量储备，延缓疲劳的产生，增强运动能力。

人参是传统的珍贵滋补中药，灵芝更具“仙草”的美誉，具有很高的药用价值。该研究从现代药理研究角度阐释人参灵芝抗疲劳的作用。人参发挥抗疲劳作用的主要活性物质是人参皂苷[10]、人参多糖和人参蛋白。灵芝活性成分复杂，灵芝多糖是其发挥抗疲劳作用的主要活性物质。由于人参和灵芝几乎无毒副作用，且临床效果显著，已开发成多种保健食品。

综上所述，人参灵芝胶囊能明显延长小鼠负重游泳时间，降低运动后血清中尿素和乳酸含量，增加肝糖原的储备，具有缓解体力疲劳的作用。