血液感染非O1群和非O139群霍乱弧菌1例的报告

单劲红 张雨超 高 艳 尹美玲 黄 颖

2018年6月27日我院感染科收入1例上消化道出血且有2年肝硬化病史，并发败血症患者，从患者血液中分离出1株霍乱弧菌疑似菌株，通过细菌鉴定，质谱分析及血清学鉴定，最后被确定为非O1群和非O139群霍乱弧菌（NOVC)。这在目前国内肝硬化患者中较少报道，国外有文献是从血液中分离出非O1群和非O139群霍乱弧菌[1]。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 患者，男，55岁，有肝硬化病史2年，长期口服中药。黑便5天，每日1～2次，无特殊处理，因入院前5 h无明显诱因发热体温达40℃，伴恶心呕吐呕血，门诊拟诊：上消化道出血肝硬化失代偿，收住感染科。①体征：慢肝面容，肝区压痛（+），中度黄染，无蜘蛛痣无肝掌无包块无反跳痛。腹部平软，肝肋下未及，脾肋下约2 cm，双肺呼吸清晰无干湿性啰音，无水肿。②入院后实验室检查：血常规：白细胞3.95×109/L，血小板10×109/L，谷丙转氨酶:100 U/L，谷草转氨酶:196 U/L，γ-谷氨酰转肽酶:90 U/L，白球比0.74.总胆红素108.44 µmol/L，直接胆红素63.90 µmol/L，二氧化碳17 mmol/L，总钙1.76 mmol/L，乙肝表面抗原定量38.73 IU/mL，乙肝e抗原定量9.84 PEIU/mL，乙肝核心抗体定量112.16 PEIU/mL，凝血项目PT：25.90 S；APTT：72S；FIB:0.97 g/L；D-二聚体：＞4 µg/mL。

1.2 仪器及试剂 O1群和O139群霍乱弧菌诊断血清由郑州万泰生物科技有限公司提供，细菌鉴定由法国生物梅里埃ATB-NEW细菌鉴定仪及梅里埃生产的生化反应板条，质谱仪由梅里埃VITEK®MS提供，质控菌株大肠埃希菌（ATCC25922);铜绿假单胞菌（ATCC27853）购自杭州天和微生物试剂公司，K-B法药敏实验纸片由英国OXID提供。

1.3 方法 ①细菌分离:患者入院时体温为40℃，取成人血培养瓶静脉单瓶双侧各取血5 mL，在患者使用抗生素前，抽取患者双侧单瓶静脉血注入血培养瓶内将血培养瓶置于梅里埃BacT/ALert120中培养，3 h后双瓶报阳，取出培养瓶涂片镜检，镜下见G-杆菌并给临床医生发布血培养一级报告，并转种血平板，巧克力平板及麦康凯平板，各放入35℃需氧温箱和CO2培养箱中，16 h后取单个菌落做鉴定试验。②质谱分析：用梅里埃VITEK-MS质谱仪检测该菌株，取单个菌落，用1 µL校准接种环涂靶板，加基质液CHCA1µL干燥形成结晶体，自动获取质谱。③药物敏感试验：根据《临床微生物实验室操作规程》所示K-B纸片法进行药敏试验，结果判断依据2015年美国临床实验室标准化委员会药敏试验标准执行。

2 结 果

2.1 细菌菌落形态及不染色标本检查 血平板菌落较大湿润，有β溶血环，且有绿色光泽。转种4号琼脂平板长出黑色光滑整齐的菌落，染色镜下见革兰阴性细小，微弯，直的杆菌，取单个菌落制成悬滴液镜下见细菌呈穿梭样运动，符合霍乱弧菌镜下形态特点。

2.2 细菌生化和鉴定 取单个菌落配置0.5麦氏浊度的混悬液，使用梅里埃ATB-NEW半自动细菌鉴定分析仪，GN卡鉴定为霍乱弧菌，鉴定编码为016052鉴定率为97.9% ID值1.0，手工生化实验该菌株靛基质阴性，氧化酶试验阳性，该菌株不分解乳糖，发酵葡萄糖蔗糖麦芽糖，动力阳性，在碱性蛋白胨水中生长。符合霍乱弧菌生化特征。梅里埃VITEK-MS质谱仪检测完整蛋白电离并用TOF检测，与数据库比较计算结果并获得鉴定结果在Myla显示鉴定结果：Vibrio cholerae 置信度99.9，该菌株质谱峰结果见图1。

图1 该菌株的质谱峰

2.3 血清凝集试验 取该菌株单个菌落，与O1群及O139群霍乱弧菌标准血清做玻片凝集试验，用生理盐水做阴性对照，结果均不凝集，确证为非O1群和非O139群霍乱弧菌。

2.4 药敏结果分析 该菌株对临床常用抗生素均敏感，见表1。

表1 菌株对临床常用抗生素的药敏结果

2.5 治疗 根据该患者血培养的药敏报告，临床医生及时调整抗菌药物，使用头孢他啶和左氧氟沙星抗感染治疗，患者退热2 d后再做血培养，7 d血培养阴性并报告临床医生。该患者是以高热及上消化道出血和肝硬化失代偿入院，没有取粪便培养，血培养检出非O1群和非O139群霍乱弧菌后，因临床医生用药及时，后来的粪便培养一直阴性，应是抗感染治疗有效的原因。

3 讨 论

霍乱弧菌是人类在自然情况下唯一易感者，主要通过污染的水源或食物经口感染，也可以通过肠道外感染如伤口和血流感染，霍乱弧菌包括O1群霍乱弧菌和O139群霍乱弧菌，引起强烈肠道传染病霍乱，为我国的甲类法定传染病，不与O1群和O139群霍乱弧菌诊断学清凝集的但生化反应符合霍乱弧菌特性的称为非O1群和非O139群霍乱弧菌（NOVC），据国内外有关文献显示NOVC多引起的败血症而非肠道感染，病死率为20%～62%，多见于肝癌,肝硬化患者及其他多种疾病引起的机体免疫力低下者[2～5]，易伴发各种机会性感染。非O1群和非O139群霍乱弧菌多存在于海鲜及海水中，接触或未经煮熟的海产品容易导致感染，但多数感染者轻度症状也有部分患者引起败血症,胆囊炎等，这与宿主抵抗力有密切关系。

本次我院检出的非O1群和非O139群霍乱弧菌菌株引起的菌血症也应与此有关。该患者患有肝硬化病史2年，且上消化道出血。肝硬化患者肝脏的过滤功能减退肠道菌群失调导致细菌容易进入血流引起感染。非O1群和非O139群霍乱弧菌引起的败血症多发生于免疫力低下的患者中（尤其是肝病患者），病死率较高。因此病原菌的及时检出和给予患者精准的治疗显得极为重要，我们在此将本案做详细报道，希望引起同道们的关注。