特异性卵黄抗体应用研究概述

韩丽丽

摘 要：随着抗菌药物的大量使用，耐药性问题目前已经突显，并且对人类的生产生活带来潜在的隐患，寻求绿色的、有效的抗菌制剂是科学界急需解决的问题。卵黄抗体在这种大环境下特异性卵黄抗体凸显出它的优势，无毒害作用，本文综述了近年来特异性卵黄抗体在抗细菌、抗病毒、抗真菌方面的研究進展。

关键词：特异性卵黄抗体；抑菌；抗真菌；抗病毒

卵黄抗体即卵黄免疫球蛋白（Yolk Immunoglobulin，IgY），是从禽类的蛋卵黄中分离纯化的，可通过特定抗原免疫禽类后提取出针对特定抗原的抗体，类似于哺乳动物血液中的IgG，具有强大的免疫功能，因此又称之为卵黄抗体。其制备过程是选定抗原对产蛋母鸡进行多次免疫之后，抗体在蛋黄中聚集，收集蛋黄用盐析等方法沉淀，分离纯化冷冻干燥后就会得到纯度较高的特异性抗体[1] 。因此，通过分离纯化卵黄就可以得到纯度较高的针对某种特定抗原的卵黄抗体，该抗体可以与相应抗原特异性结合，阻止抗原生物学活性的发挥。美国食品药品监管局已将IgY认定为“一般公认安全物质”，并将其确定为抗菌素的首选替代品[2]。目前特异性卵黄抗体已经在食源性病原微生物的防治工作中取得了良好应用，有好多研究产品已经投入市场。随着研究的拓展，现在在功能食品和兽医学开发上也初见规模。近年来在抗真菌方面也出现了不少研究，并且有些取得了可喜的成果。

一、特异性卵黄抗体的性质

抗体是抗原刺激机体免疫系统后，能由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的，可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白，主要分布在血液中，少量分布于外分泌液及组织液中。其作用是可结合病毒抑制病毒的感染，结合毒素中和毒素，结合细菌抑制细菌的吸附，可通过Fc受体的结合激活补体途径、调理作用、细胞毒作用等杀伤靶细胞。外来抗原刺激鸡体后法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，浆细胞分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经鸡卵巢时，由于受体作用，特异性抗体在卵细胞中逐渐大量蓄积，由此形成卵黄抗体[3]。卵黄抗体的性质与哺乳动物的IgG相似。正常鸡卵黄抗体的等电点约为5.2，分子量约为180KDa，由两条重链（2H）和两条轻链（2L）组成，相比一般哺乳动物血液中含量最多的抗体IgG，卵黄抗体具有较高的耐酸性、热稳定性、抗离子作用以及一定的抗酶分解的能力[4]。当pH在4-11区间内，卵黄抗体性质比较稳定，功能可以正常发挥，当pH<3.5时其空间结构发生改变导致活性迅速下降，pH>11时其活性亦有所下降。卵黄抗体对胰蛋白酶十分敏感，但对胃蛋白酶有较高的抵抗力。将胃蛋白酶和卵黄抗体在pH4.0时1h后可保持91%的活性，甚至温育10h后仍有63%活性。但是在pH2.0温育1h后，几乎所有活性丧失；但卵黄抗体分别与胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶温育8h，依然具有活性。在低于75℃条件下，卵黄抗体具有良好的热稳定性。将卵黄抗体制剂溶解在含的1%NaN3的氯化钠溶液中4℃贮存5年，活性没有明显下降。在室温下放置个6个月，免疫扩散法进行检测，结果表明抗体活性没有下降。65℃时可保持24h以上，70℃时加热90min后其活性才明显下降。60℃，30min条件下巴氏消毒不影响卵黄抗体的活性，温度高于80℃，大部分卵黄抗体失去活性[5]。

二、特异性卵黄抗体抑菌应用

变形性链球菌免疫蛋鸡可产生高效价的卵黄抗体，周智[6]在对人牙菌斑中变形链球菌的研究中发现应用特异性卵黄抗体后，虽然无明显改变其菌斑指数，但是牙面菌斑的菌群微生态发生改变，卵黄抗体使用后明显降低了变形链球菌群在牙菌斑的口腔链球菌群中的比例，并且在停药5周后的时间内，菌斑中变形链球菌的水平依然保持在很低的水平，变形链球菌鸡卵黄抗体可以有效抑制变形链球茵利用糖产酸的能力。并且李兴玲[7]研究发现抗变形链球菌IgY作为被动免疫治疗剂可有效抑制龋齿的发展。迟钝爱德华氏菌是一种兼性厌氧菌，属于肠杆菌科，其宿主范围非常广泛， 可侵染人、两栖动物、爬行动物、鱼类等，是常见的人畜共患病病原，危害极大。顾叶华[8]制备的抗迟钝爱德华氏菌卵黄抗体体外相对抑菌率可以达到 86.6%；对克氏原螯虾的平均保护率为 66.7%，并且能促进细胞吞噬迟钝爱德华氏菌， 其相对吞噬率达到79.8%。豪猪是抗病能力很强的动物，很少发生疾病，但是仔豪猪腹泻是引起豪猪死亡的主要病因，而腹泻主要病原菌由大肠埃希菌引起，张保平[9]在体外抑菌性试验中发现，其制备的特异性卵黄抗体对大肠埃希菌具有明显抑制其生长的作用，但是对沙门氏菌的抑制作用比较小。姚羽菲[10]在抗铜绿假单胞菌卵黄抗体的抑菌实验中发现2.7mg的抗体能明显抑制铜绿假单胞菌生长，与对照组（蒸馏水）相比，卵黄抗体试验组菌落数减少了90%，并且明显抑制了细菌绿色色素的产生。曾波[11]发现抗幽门螺杆菌黏附素A卵黄抗体在5 mg/ml剂量时可显著抑制分离株的生长。对于妊娠期龈炎患者，在妊娠期期间通过正确的牙周治疗会缓解牙龈炎症，对于维护妊娠期妇女的健康，提高胎儿的出生率具有重要作用，王晓静[12]的研究发现抗中间普氏菌卵黄抗体能够减轻大鼠实验性妊娠期龈炎的炎症状态，可对大鼠实验性妊娠期龈炎有一定的预防作用。

三、卵黄抗体抗病毒的应用

病毒性腹泻是引起猪腹泻病的各种病因中危害最为严重的一种，病毒性腹泻具有发病急、发病率高、传播速度快、死亡率高等特点，给养殖业带来了严重危害和经济损失。杜季梅[13]经实验室和临床试验证明抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体对新生仔猪的预防保护率达 90%。鸭病毒性肝炎是由小 RNA 病毒科肠病毒属的鸭肝炎病毒引起雏鸭的一种急性、高度致死性、烈性传染病，危害巨大，李宇琴[14]将提取的卵黄抗体进行了易感鸭被动治疗试验，结果显示卵黄抗体对同居感染鸭具有良好保护效果。禽腺病毒属于双链DNA病毒，可引起包涵体肝炎和心包积液肝炎综合征等，一旦爆发对养殖业造成巨大的损失。杨晓伟[15]发现特异性卵黄抗体对禽腺病毒I群血清4型感染具有较好的预防与治疗作用。人类轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要原因，但是目前尚无特效药物，周玲[16]研究发现用轮状病毒免疫产蛋鸡，从鸡卵黄中获得抗体治疗婴幼儿的腹泻病取得了很好效果。Yang[17] 等制备了抗甲型流感的特异性卵黄抗体，对感染小鼠模型进行体内活性检测，发现其能中和病毒，使小鼠肺组织病毒载量和病毒滴度减小，降低了小鼠的死亡率。

四、卵黄抗体抗真菌的应用

须癣毛癣菌是引起皮肤癣疾病的主要病原真菌之一，随着市面上治疗皮肤癣类疾病的药物氟康唑、酮康唑等的应用，真菌药物耐药性日趋严重，并且治疗周期长，见效慢。胡青青[18]提取须癣毛癣菌的细胞壁蛋白作为免疫原制备特異性卵黄抗体，抗细胞壁蛋白的特异性 卵黄抗体低剂量组（5 mg/mL）、中剂量组（10 mg/mL）、高剂量组（20 mg/mL）、不同程度的缓解皮肤癣的病症，并随着剂量的增加，疗效增强。但是而抗胞浆蛋白的卵黄抗体对于皮肤癣菌的生长几乎没有影响。Kamikawa [19]等人通过对比抗光滑假丝酵母菌的卵黄抗体和抗白色念珠菌的卵黄抗体的生物活性，发现两者都能抑制对白色念珠菌和光滑假丝酵母菌对细胞的黏附作用，从而阻碍繁殖。但是在抗真菌研究中，低效价的抗体限制了治疗的效果，全菌抗原和细胞壁抗原对抗体产生的影响没有得到全面的阐述，因此如何得到高效价的抗真菌的卵黄抗体成为急需解决的问题。

特异性卵黄抗体在抑菌、抗病毒、抗真菌领域发挥着重要作用。特异性卵黄抗体不仅在鸡、猪等动物体相关疾病的防治中取得了显著的疗效，而且也在食品、牙膏等百货领域进行了商品化的应用。随着研究的深入，已有学者在人体相关病原菌的抗感染的研究中取得了很好的实验成效。但是特异性卵黄抗体抗真菌的研究依然处在瓶颈阶段，这跟真菌的生物学特性有很大的关系，并且应用的方式和成本也限制了特异性卵黄抗体的使用。如何在抗真菌感染的研究中取得高效价的抗体，采取何种有效途径应用高效价的抗体进行实验干预，尚未得到解决。

参考文献：

[1]张伦，抗禽传染性法氏囊病毒卵黄抗体的研制及应用，河北农业大学，2011.

[2]Kollberg H. Avian antibodies （IgY） to fight antibiotic resistance[J]. Clinical Microbiology，2015，4（2）：1-5.

[3]亓秀晔，宋翔，王业华，等.卵黄抗体在疾病防治中的应用[J].中国动物传染病学报，2017，25（5）：80-86.

[4]刘立国，抗白色念珠菌鸡卵黄抗体制备及其实验治疗作用的研究，吉林大学，2005.

[5]Horie K， Horie N， Abdou A M， et al . Suppressive effect of functional drinking yogurt containing specific egg yolk immunoglobulin on Helicobacter pylori in human[J]. J Dairy Sci，2004，87（12）：4073-4079.

[6]周智，周汝俊，文兵.抗变形链球菌鸡卵黄抗体抑制变形链球菌产酸能力研究[J].医学研究通讯，2002，31（11）：12-13.

[7]李兴玲，张智，李再新.致龋性变形链球菌的分离及其卵黄抗体的抑龋作用[J].中华口腔医学杂志，2017，52（4）：248-253.

[8]顾叶华，李登峰，周永强.抗迟钝爱德华氏菌卵黄抗体制备及其抑菌?吞噬调理活性分析[J].宁波大学学报（理工版），2018，31（5）：1-6.

[9]张保平，李娜，高惠林.抗豪猪大肠埃希菌卵黄抗体的制备及抑菌性研究[J].浙江农业科学，2017，58（3）：484-486.

[10]姚羽菲，龙敏，文荟淋.抗铜绿假单胞菌IgY 的制备优化及抑菌效果[J].检验医学与临床，2018，15（2）：202-208.

[11]曾波，张忠宝，张智.抗幽门螺杆菌黏附素A卵黄抗体的制备及评估[J].免疫学杂志，201733（12）：1076-1081.

[12]王晓静，徐燕，孟明理.抗中间普氏菌卵黄抗体的制备及其对实验性妊娠期龈炎的预防作用[J].安徽医科大学学报，2017，52（8）：1154-1160.

[13]杜季梅.仔猪病毒性腹泻流行病学调查及卵黄抗体在PEDV防止中的应用.河南农业大学，2013.

[14]李宇琴.鸭肝炎病毒分离株的鉴定及其卵黄抗体的制备.扬州大学，2010.

[15]杨晓伟，杨万秋，陆婧.禽腺病毒I群血清4型的分子鉴定及其卵黄抗体的防控效果.畜牧与兽医，2018，50（1）：113-17.

[16]周玲，潘家华.百倍宁治疗婴幼儿轮状病毒感染腹泻疗效观察[J].安徽医药，2011，15（1）：91-92.

[17]Yang Y.E.， Wen J.， Zhao S.， et al. Prophylaxis and therapy of pandemic H1N1 virus infection using egg yolk antibody[J]. Journal of Virological Methods，2014，206（7）：19-26.

[18]胡青青等，抗须癣毛癣菌细胞壁蛋白的卵黄抗体制备和鉴定.中国免医学杂志，2017，9（2）：55-57.

[19]Kamikawa Y.， Fujisaki J.， Nagayama T.， et al. Use of Candida-specific chicken egg yolk antibodies to inhibit the adhering of Candida to denture base materials： prevention of denture stomatitis[J]. Gerodontology，2014，33（3）：342-347.