遵义地区犬狂犬病毒血清抗体流行病学调查与大学生对该病的认知情况分析

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狂犬病是世界上影响人类健康最古老的疾病之一，最早的记载见于4300年前美索不达米亚(古王国，在今伊拉克境内)的埃什努纳(Eshnunna)法典[1]。该病是由狂犬病病毒(Rabies Virus， RV)引起的一种病毒性动物传染病，它发生在150多个国家和地区，病死率为100%，是全球不容忽视的公共卫生问题。据世界卫生组织(World Health Organization，WTO)统计，全球每年由狂犬病导致的死亡人数约59 000人(CI:25 000-159 200)，大约每15 min就有一人因狂犬病而失去生命，每1 h就有1 000人接受暴露后治疗，死亡病例中，36%位于非洲，60%位于亚洲，其中印度最多，占总数1/3，而中国则以每年约两千人死亡数字位居第二[2-3]。虽然一些食肉动物和蝙蝠种群是狂犬病毒的天然宿主，但全球95%的人狂犬病病例是由犬咬伤传播感染[4]。

近年来，欧美国家及包括中国在内的亚洲国家均开展过关于犬狂犬病病的血清流行病学调查，调查结果存在较大差异。目前，我国新疆[5]、四川[6]、呼和浩特[7]、南京[8]、厦门[9]等省市已有犬狂犬病血清学调查的文献报道，但遵义地区犬狂犬病的感染情况未见文献报道，因此，本试验开展有关犬狂犬病的流行病学调查，以了解本地区人群对狂犬病的认识程度，摸清遵义地区犬狂犬病的流行情况，为本地区犬狂犬病的综合防治及预警监测提供实验依据。

1 材料与方法

1.1主要试验盒 RV生物素双抗原夹心ELISA试剂盒(Canine RV-Ab ELISA KIT，10-77-138，201710)，购自上海酶联生物科技有限公司。

1.2问卷调查 采用网络问卷(问卷星)对遵义地区大学生开展有关狂犬病的社会问卷调查，共收集647份有效问卷，问题涉及性别、年级、专业、犬狂犬病基本知识、犬咬伤后伤口处理措施等。

1.3血清样品 采集及处理 2016年6月至2017年6月于遵义地区宠物医院采集422份犬血清样品，其中297份来自宠物犬，125份来自流浪犬，雄性占58.06%(245/422)，雌性占41.94%(177/422)。血液样品经3 000 r/min离心10 min后取血清于2 mL的EP管中，置于-20 ℃冰箱保存待用。并对犬的基本信息进行归纳统计，包括犬品种、性别、年龄、既往病史、疫苗注射情况等。

1.4RV血清抗体检测 血清样品采用ELISA试剂盒检测RV抗体，根据说明书要求操作。每板设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔。以空白对照调零，在450 nm波长依序测量各孔的吸光度(OD450值)。结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10，临界值计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15，阴性判定：样品OD450值<临界值者为犬RV阴性，阳性判定：样品OD450值≥临界值者为犬RV阳性。

1.5数据分析 运用SPSS24.0版比率分析不同变量置信区间，交叉表卡方检验分析宠物犬、流浪犬以及犬性别之间RV抗体阳性率是否存在差异，以P<0.05认为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1犬血清来源信息统计结果 422份犬血清来源信息详见表1、表2。调查发现，297例宠物犬中192例接种过狂犬疫苗、65例未接种狂犬疫苗、40例狂犬疫苗接种信息不详，125例流浪犬免疫信息不详。

2.2RV血清抗体检测结果 RV血清抗体检测结果显示，犬RV血清抗体的总阳性率为43.36%(183/536)，雄性阳性率为41.63%(95%CI0.35-0.48)，雌性阳性率为45.76%(95%CI0.38-0.53)，犬性别之间RV抗体阳性率无统计学差异(χ2=0.714,P>0.05)；宠物犬RV抗体阳性率为56.57%(95%CI0.51-0.62)，其中接种过狂犬疫苗的宠物犬其RV抗体阳性率为77.08%(148/192)，未接种狂犬疫苗或接种信息不详宠物犬RV抗体阳性率为19.06%(20/105)，流浪犬RV抗体阳性率为12%(95%CI0.06-0.18)，宠物犬RV抗体阳性率显著大于流浪犬(χ2=71.143,P<0.05)，详见表3、表4。

2.3问卷调查结果 本次调查共收集调查问卷647份，其中，男性占44.36%(287/647)，女性占55.64%(360/647)，医学类专业人数占61.67%(399/647)，非医学类专业人数占38.33%(248/647)，调查人数性别与年级分布情况详见图1。

调查人群中，45.75%(296/647)的人曾被犬咬伤或抓伤过，伤人动物犬中，自家宠物犬占34.12%(101/296)，他家宠物犬占57.43%(170/296)，流浪犬占5.07%(15/296)，不清楚者占3.38%(10/296)，详见图2。曾被犬咬伤或抓伤的调查者中，60.47%(179/296)的人认为处理伤口的最佳方式是用肥皂水或清水彻底冲洗伤口，39.19%(116/296)的人认为是采用酒精或碘伏消毒伤口，高达77.36%(229/296)的人认为应在24 h内接种狂犬疫苗。

被调查者中当被问及犬接种狂犬疫苗后，被其咬伤的人是否有必要接种人用狂犬疫苗时，90.11%(583/647)的调查者认为有必要、仅有4.95%(32/647)的认为没有必要、4.95%(32/647)不清楚。

表1 犬样本基本信息统计表Tab.1 Statistical table of basic information of dog samples

表2 犬品种信息统计表Tab.2 Statistics table of dog variety information

表3 不同性别犬RV抗体阳性率Tab.3 Positive rate of RV antibody in different sex dogs

表4 不同来源犬RV抗体阳性率Tab.4 Positive rate of RV antibody in dogs from different sources

图1 问卷调查人数信息统计Fig.1 Information statistics table of questionnaire survey

图2 被犬咬伤人数情况统计表Fig.2 Statistics on the number of bites by dogs

3 讨 论

3.1遵义地区RV血清学调查 本次调查共收集犬血清422份，422份血清来源犬中贵宾、雪纳瑞、博美分别占35.07%(148/422)、12.32%(52/422)、10.66%(45/422)，3种小型犬种共占58.06%(245/422)，由此可见，小型犬种深受遵义地区宠物主喜爱。犬血清RV抗体检测发现，RV抗体总阳性率为40%(12/536)，宠物犬、流浪犬、雄性犬、雌性犬的RV抗体阳性率分别为56.57%(168/297)、12%(15/125)、41.63%(102/245)、45.76%(81/177)，犬性别与RV抗体阳性差异无统计学差异(P=0.398)，宠物犬与流浪犬RV抗体阳性差异存在统计学意义(P=0.001)，调查结果与国内某些省市阳性率相比，高于广州(59.05%)[10]、广西(67.57%)[11]、雅安(77.68%)[12]，低于新疆(55.53%)[13]、长沙(65.4%)[14]，与国外调查结果相比存在差异，例如，Kartskhia[15]等调查发现，格鲁吉亚地区犬RV抗体阳性率高达98.3%(237/241)，其狂犬疫苗覆盖率达65%(373/572)；Peres等[16]检测发现巴西圣保罗州农村地区51只犬中，68%的犬RV抗体滴度处于保护水平(≥0.5 UI/mL)，32%的犬低于保护水平；Pimburage等[17]对斯里兰卡卡鲁塔拉区510例犬肌肉接种单价RV灭活疫苗，在接种后0 d，30 d，180 d，360 d采用RFFIT进行RV抗体检测，结果发现，单剂量的狂犬疫苗不能使40.42%的流浪狗与57.14%未接种过疫苗的幼年犬产生免疫保护水平的抗体滴度，犬只有在多次疫苗接种后才能使抗体滴度高于保护水平；Saeki等[18]对日本216只幼犬(<91 d)进行RV抗体检测，结果显示，216只幼犬中仅有34只超过中和抗体效价的8倍，如忽略母源抗体存在的可能，幼犬单剂量的疫苗免疫不能使抗体效价达到持续或足够的水平；我国蒋碧美等[19]研究发现，犬全年免疫一次狂犬疫苗的抗体合格率达不到WHO推荐的标准(全年维持在70%以上)，而实行春秋两季2次免疫，能有效提高犬RV的抗体保护水平。由此可知，犬进行狂犬疫苗接种后，部分犬不能产生免疫保护水平的抗体滴度，要使抗体效价达到足够水平必须连续接种狂犬疫苗。检测用犬的来源与检测结果密切相关，此次调查犬血清标本数仅为422例，检测结果只能反映本次调查情况。

根据贵州统计年鉴显示近两年贵州狂犬病死亡人数仅为112人(2015年62人， 2016年50人)[20]，而本地区犬RV的总阳性率高达43.36%(183/536)，如果高阳性率表明犬高的狂犬病病毒感染率，而死亡人数与犬RV高阳性率之间存在偏差，可能推测本地区犬RV抗体阳性率要明显低于43.36%，因为宠物犬中未接种狂犬疫苗或接种信息不详的犬(RV阳性率为19.06%)与流浪犬(RV阳性率为12%)的阳性率很可能是与RV疫苗免疫有关，宠物犬中疫苗接种信息不详不代表其实际未进行过RV疫苗免疫，且由于流浪犬RV免疫背景无法知晓，在成为流浪犬之前宠物主也可能已经对其进行过RV疫苗免疫。

3.2问卷调查分析 问卷调查发现，647人中曾被犬咬伤或抓伤的占45.75%(296/647)，其中，91.55%(271/296)的人是被宠物犬所伤，8.45%(25/296)的人被流浪犬或不明身份犬所伤，说明宠物犬是仍然是传播RV的一个严重威胁。647人中77.28%(500/647)的人认为实验过程中被犬咬伤或抓伤最有可能患狂犬病，56.41%(365/647)的人知道被犬咬伤或抓伤应立即使用肥皂水或清水彻底冲洗伤口，75.89%(491/647)的人知道RV主要入侵人体的神经系统，77.43%(501/647)的人认为被犬咬伤后应在24 h以内进行狂犬疫苗接种，说明在校大学生对狂犬病相关知识具有一个较高的认知水平。

调查发现，39.41%(255/647)的宠物主未对其宠物犬进行狂犬疫苗的免疫接种，这种情况对于人与犬狂犬病的预防是极为不利的，而在狂犬病多发的非洲国家，犬狂疫苗覆盖率低，也是其狂犬病多发的原因之一。例如，非洲马拉维每年因狂犬病发生死亡的人数接近500人，全国40万多只犬中，仅有0.5%的犬接种过狂犬疫苗[3, 21]；Garba[22]调查发现尼日利亚尼日尔州犬与人的比例为1∶5.4，该州732 476只犬中大约30.4%的犬从未接种过狂犬疫苗；坦桑尼亚东部农村社区人群中，以往的大规模疫苗接种运动只覆盖了狗群的24.4%[23]。

3.3狂犬病的流行与控制 虽然狂犬病对公共健康造成严重威胁，但在亚洲和非洲国家，狂犬病仍然是一种易被忽视的疾病。家养犬是狂犬病控制的主要目标，是RV传播给人类和其他家畜的主要宿主，但在犬狂犬病疫情控制较好的欧洲、北美、澳大利亚及部分拉丁美洲国家狂犬病的传染原为蝙蝠、狐、猫鼬、豺、狨猴和浣熊等野生动物，而被犬咬伤患狂犬病死亡的病例十分罕见[24]，在美国犬已不是RV的主要宿主。美国2003年至2014年7月间仅报告了33例人类狂犬病死亡的病例，绝大多数是因为接触了蝙蝠等野生动物而导致的，2015年10月，一名77岁的怀俄明州居民因蝙蝠咬伤感染狂犬病而死亡，这是自2012年以来美国第1例国内感染病例[25-26]。Klevar等[27]认为搜救犬的跨境运输也可能导致狂犬病在欧洲的传播，检测发现从东欧进口到挪威的搜救犬(已接种狂犬疫苗)53.33%(40/75)未能产生足够的抗体滴度(≤0.5 IU/mL)。

海地是西半球人类与动物狂犬病发病率最高的国家，由于兽医准入门槛较低、流浪犬较多、动物福利水平较低等原因加剧了狂犬病的发生，Medley等[28]对海地2013年至2015年间的1 409只疯狗进行了回顾性的评价，实验室检测发现1 409只疯狗中48只患有狂犬病，虽然对所有犬咬伤者进行狂犬疫苗接种是减少人类狂犬病死亡的一种非常有效的方法，然而，这可能给遭受低风险暴露的受害者造成不必要的经济负担，处方过量也会导致地区疫苗供应短缺，特别是对于海地这样一个资源短缺的国家。Schildecker等[29]对海地2005个宠物主人进行流行病学调查，调查发现，超过50%的犬处于放养状态，超过80%的犬主人在为他们的犬咨询狂犬疫苗接种时遇到困难，32%的犬在调查前一年发生死亡，死亡的犬中18%的犬与狂犬病的症状一致，人被犬咬伤十分常见，超过3%的受访者在调查前一年被犬咬伤过。

世界动物卫生组织(OIE)将狂犬病列为法定报告的B类动物疫病，目前控制该病的方法主要是向动物咬伤者提供有效的暴露后预防(PEP)，而全球每年因狂犬病而造成的经济损失高达86亿美元，其中大量资金用于狂犬病暴露人群狂犬病疫苗与免疫球蛋白的注射[30]。2015年12月，WTO、OIE、FAO等组织在瑞士日内瓦招开了支持全球狂犬病控制联盟(GARC)的重要国际会议，制定了消除犬介导的人类狂犬病的框架性协议，以确保2030年实现消除狂犬病的目标[31]。孟加拉政府已贯彻实施4种积极策略以保证消除狂犬病：宣传、沟通和社会动员、狗咬伤后的现代治疗、犬大规模疫苗接种和犬的种群管理[32]；2010年，在比尔盖茨和梅琳达基金会的支持下，菲律宾维沙扬群岛开始了狂犬病的清除项目，研究表明对犬进行大规模的疫苗接种比对在人身上进行治疗更具成本效益[33]。

控制和消灭狂犬病不单是一个纯粹的医学问题，也是一个社会经济、政治、动物福利问题，世界范围内消灭狂犬病需要各个国家的共同努力，2030年才能实现消灭狂犬病的目标。

利益冲突：无