系统性红斑狼疮患者外周血B细胞中PD-L1的表达及临床意义

陆 燕，覃小升

(来宾市兴宾区人民医院检验科,广西来宾 546100)

系统性红斑狼疮(SLE)是我国最常见的自身免疫系统疾病，也是一种累及机体多系统、多脏器的疾病[1]。SLE可导致机体多种脏器功能障碍，SLE患者病情活动度不同，预后不同[2]。狼疮性肾炎(LN)是我国最常见继发性的肾小球疾病，是由于自身抗体产生导致肾脏免疫复合物形成和沉积，免疫复合物通过经典和旁路途径激活补体系统造成肾脏损伤[3-4]。血清中程序性死亡分子1(PD-1)与其配体(PD-L1)组成的信号途径是对T细胞激活的调节和T细胞耐受的维持有重要的临床意义[5]。积极评价SLE患者病情严重程度和肾脏损伤情况具有重要的临床意义，本研究探讨了SLE患者外周血B细胞中PD-L1水平与患者肾脏损伤及病情的关系，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2015年5月至2017年5月在本院诊断为SLE的50例患者为研究对象，SLE的诊断参照中华医学会指定的相关诊断标准。纳入标准：(1)确诊为SLE；(2)依从性好，同意进行本研究的，能完成随访。排除标准：(1)既往合并高血压、糖尿病、冠心病、甲状腺疾病、肝脏疾病等其他慢性疾病的患者；(2)精神异常或合并其他认知功能障碍的患者；(3)合并其他自身免疫系统疾病或其他可能导致患者肾脏功能损伤疾病的患者；(4)合并妊娠、哺乳或其他认知功能障碍的患者；(5)近期使用了激素或免疫抑制剂治疗或其他可能影响病情评价药物的患者。纳入研究的50例SLE患者中，男6例，女44例；平均(34.2±6.5)岁；体质量指数(BMI)为(22.5±3.5)kg/m2。根据SLE疾病活动指数分级(SLEDAI)将SLE患者分为SLE活动期组(25例)和SLE非活动期组(25例)，SLE活动期组SLEDAI评分≥10分，SLE非活动组SLEDAI评分<10分。SLE活动期患者中，男2例，女23；平均(35.6±6.7)岁，SLE非活动期组中，男4例，女21例，平均(33.8±6.3)岁。另选择同期20例健康成人作为对照组，其中男3例，女17例；平均(34.8±6.2)岁；BMI(22.7±3.2)kg/m2；两组性别、年龄、BMI等比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2观察指标 (1)肾脏损伤评价：本研究中所有LN患者均经皮肾穿刺进行肾脏病理活检，根据肾穿刺活检结果分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型狼疮；(2)外周血B细胞PD-L1表达水平检测：采用收集患者和健康人外周血单个核细胞制备单核细胞悬液加入2支试管中，分别加入FITC标记的抗人PD-L1抗体(anti-HPD-L1-FITC)和PE标记的抗人CD19抗体(anti-HCD19-PE)(均购自ATCC公司),1 000 r/min 离心5 min，弃上清液，4%多聚甲醛固定后加入300 μL PBS 上机采用流式细胞仪进行分析，以双色点图分析B淋巴细胞PD-L1的表达。

2 结 果

2.1不同病情的SLE患者B细胞中CD19+、CD19+/PD-L1水平比较 SLE活动期组患者CD19+水平均高于SLE非活动期组和对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；SLE活动期患者CD19+/PD-L1水平均高于非活动期患者和对照组患者，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 不同组B细胞中CD19+水平和CD19+/PD-L1水平比较

2.2不同CD19+和CD19+/PD-L1水平的患者肾脏损伤程度的关系 根据CD19+和CD19+/PD-L1水平分为低水平和高水平组(以CD19+或CD19+/PD-L1水平的中位数为参考点，低于其中位数水平为低水平组，高于其中位数水平为低水平组)，CD19+高水平和CD19+/PD-L1高水平的患者肾损伤的发生率更高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 不同CD19+和CD19+/PD-L1水平的

表3 LN患者肾功能不全发生的风险因素分析

2.3SLE患者发生肾功能不全发生的风险因素分析 以性别、年龄、BMI、尿蛋白定量、肾脏病理分级、血清中CD19+、CD19+/PD-L1，以肾功能不全为终点事件，采用logistic回归分析探讨结果提示，CD19+/PD-L1、LN Ⅳ期是LN患者肾功能不全发生的独立危险因素，见表3。

3 讨 论

SLE的发生、发展与T细胞异常活化和共同刺激免疫表达有关，研究提示PD-1/PD-L1在外周血免疫耐受和自身免疫疾病过程中有重要的临床意义，研究证实PD-1基因过表达的小鼠可以诱发自身免疫性扩大性心肌病[6]。PD-1影响T细胞的生物学行为，进而影响多种细胞因子的表达，导致患者T细胞功能下降[7]，进而参与自身免疫系统疾病的发生、发展。

SLE是多系统受累的自身免疫系统疾病，临床表现多种多样。SLE根据病情轻重不一，病情稳定者可不出现任何脏器损伤情况，病情严重者可累及患者多种脏器，导致患者脏器功能障碍，甚至危及患者生命[8-10]。 狼疮病情活动评分是评价SLE病情的重要指标之一，当患者病情活动时可出现肾脏损伤、血液系统疾病，甚至狼疮性脑病。本研究采用SLEDAI对患者病情进行评分，发现病情活动的患者CD19+细胞表达和PD-1水平明显更高，这就意味着B细胞表面PD-L1表达水平可能参与B细胞的生物学行为，促进免疫损伤的进展，进而调控SLE的病情发展。

LN是导致继发性肾损伤的主要疾病，LN是多种免疫复合物导致肾脏损伤，LN发病过程中大量细胞外基质大量沉积、诱发肾脏病理生理改变[11-13]。LN病情及预后不一，轻者对患者关肾功能无明显影响，病情严重者可导致患者肾功能衰竭进入尿毒症甚至导致死亡[14-15]。找到一种无创评价患者肾脏病变程度的评价指标具有重要的临床意义。相关性分析结果也证实了外周血中B细胞含量及PD-L1表达水平与患者肾脏损情程度密切相关，PD-L1水平不仅可以用于评价SLE病情也可以运用于评价患者肾脏损伤程度。

4 结 论

不少SLE患者肾功能损伤最终可能发展为肾功能不全，本研究探讨了SLE患者肾功能不全的危险因素，结果发现B细胞表达的PD-L1水平、LN Ⅳ是患者进展为肾功能不全的独立危险因素，提示外周血B细胞的PD-L1水平与患者病情损伤密切相关，可能成为SLE患者疾病进展和预后的指标。