食养复方黄山精对小鼠的抗疲劳作用

唐华伟 朱雪萍 刘文瑞 毛信心 蒋启月 肖志凯 杨联河

(河南中医药大学，河南 郑州 450008)

随着生活方式的改变，疲劳现象越发普遍。老年人机体功能下降，更易感到疲劳。中医认为过度劳累，强行调动人体的阳气，会消耗人体的阴精，若不加以制止，最终会导致阴精竭绝。目前抗疲劳方案多采用单一成分保健品或单味中药〔1〕，抗疲劳效果受到一定限制。复方制剂虽弥补了单组分的不足，但存在价格昂贵、取材困难、制作工艺繁杂、有一定的副作用等弊端〔2～4〕。本实验运用中医阴阳互根理论，选取国家卫生和计划生育委员会(下简称：卫计委)公布的“既是食品又是药品的物品名单”〔5〕中的5味原料：黄精、山药、枸杞、桑葚、肉桂进行组方，既具有药物的疗效性，又具备食物的安全性，且取材方便。研究表明，复方黄山精的君药黄精和山药具有抗菌、解毒、抗疲劳、抗衰老等多重疗效〔6,7〕，近年来，枸杞、桑葚、肉桂的保健作用也备受关注〔8,9〕。本实验通过负重游泳实验及与疲劳相关指标评估复方黄山精的抗疲劳作用。

1 材料与方法

1.1材料与主要仪器 尿素氮(BUN)测试盒、肝糖原测试盒、血清乳酸脱氢酶(LDH)测试盒、超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、丙二醛(MDA)测试盒均购于南京建成生物工程研究所。Multiskan GO型全波长酶标仪：赛默飞世尔科技公司；TB-215D型电子天平：美国丹佛；KG-AP32L型高压灭菌锅：日本ALP公司；自制游泳箱50 cm×50 cm×40 cm。

1.2复方黄山精的制备 将黄精、山药、枸杞、桑葚、肉桂浸泡后的中药饮片，放入砂锅内加入适量水，武火煮开后，用文火煎煮1 h，滤出药液，向药渣中加入适量的热水再次煎煮30 min。将两次煎煮的药液混合均匀后，浓缩至所需浓度，4℃保存。

1.3实验动物及分组 昆明种清洁级雄性小鼠200只，18～22 g，购于济南朋悦实验动物繁育有限公司，许可证号：SCXK(鲁)2014007。先进行游泳筛选实验，将不会游泳或游泳姿势不协调的小鼠剔除。将筛选后的144只小鼠随机分为3批，每批48只，每批动物随机分为4组：生理盐水组和复方黄山精高、中、低浓度组。

1.4分组及给药 生理盐水组给予生理盐水(3 ml/kg)。复方黄山精高、中、低组分别给予3.705 g/ml、2.470 g/ml和1.235 g/ml复方黄山精药液，分别相当于正常人体用量的3倍、2倍和1倍。灌胃量为0.01 ml·g-1·d-1，每3 d称重1次，根据体重改变灌胃量，连续灌胃14 d。

1.5实验方法 参照《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)〔10〕，实验分3批进行：①小鼠负重游泳力竭时间及SOD、MDA水平测定；②小鼠LDH水平测定；③小鼠血清BUN和肝糖原水平测定。

1.5.1小鼠负重游泳力竭时间及SOD、MDA水平测定 末次给予受试物40 min后，在小鼠尾部负荷相当于体重10%的铅块，置于水深30 cm、水温(25±1)℃的自制游泳箱中负重游泳，游泳期间如有弓腰停止、悬浮休息者，用玻璃棒刺激游动以防偷懒。以小鼠头部沉入水中5 s不再浮起为力竭，记录小鼠负重游泳力竭时间。力竭后立即捞出，电吹风吹干后放回原笼饲养。休息24 h后摘眼球采血，3 500 r/min离心15 min，分离血清备用，严格按照试剂盒说明书测定SOD活性和MDA含量。

1.5.2小鼠血清乳酸脱氢酶水平测定 末次给予受试物40 min后，将各组小鼠置于水温30℃的自制游泳箱，不负重游泳10 min捞出，休息20 min后立即摘眼球采血，3 500 r/min离心15 min，分离血清备用，严格按照说明书测LDH活性。

1.5.3小鼠血清BUN和肝糖原水平测定 末次给予受试物40 min后，将各组小鼠置于水温30℃的自制游泳箱，不负重游泳90 min捞出，休息60 min后立即摘眼球采血，3 500 r/min离心15 min，分离血清备用；采血后立即处死小鼠，摘取肝脏备用，严格按照说明书测定BUN和肝糖原含量。

1.6统计学方法 采用SPSS20.0软件进行单因素方差分析检验：若方差齐，采用LSD法；若方差不齐，采用Tamhane法。

2 结 果

2.1复方黄山精对负重游泳力竭时间的影响 与生理盐水组相比，复方黄山精各浓度组小鼠负重游泳力竭时间增加，且负重游泳力竭时间随给药浓度的增加而延长，但只有高浓度组差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

2.2复方黄山精对血清LDH活性的影响 与生理盐水组比较，复方黄山精各浓度组LDH活性提高，但只有高浓度组差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组力竭时间及血清LDH活性比较

与生理盐水组比较：1)P<0.05，2)P<0.01；下表同

2.3复方黄山精对BUN含量的影响 与生理盐水组相比，复方黄山精各浓度组血清BUN含量显著降低(P<0.01)，且具有浓度依赖性。见表2。

2.4复方黄山精对肝糖原含量的影响 与生理盐水组相比，复方黄山精各浓度组肝糖原储存量明显增加，但只有高、中浓度组差异有统计学意义(P<0.05；P<0.01)。见表2。

2.5复方黄山精对血清SOD活性的影响 与生理盐水组相比，复方黄山精各浓度组SOD活性显著升高(P<0.01)。见表3。

2.6复方黄山精对血清MDA含量的影响 与生理盐水组相比，复方黄山精各浓度组MDA含量均降低，但只有高、低浓度组差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表2 各组血清BUN及肝糖原比较

表3 各组血清SOD活性及血清MDA含量比较

3 讨 论

复方黄山精以黄精、山药为君药，黄精具有补气养阴、健脾润肺益肾之用；山药具有益气涩精、平补肺脾肾之功，两药共奏补肾健脾益肺之效。臣药以枸杞、桑葚，酸甘化阴，助君药补精益气养阴。少佐肉桂，补火助阳，温化阴精，以防厚味碍胃之弊。全方共奏滋补阴精，少火生气之效，从而提高机体耐力，缓解疲劳。运动耐力的提高是抗疲劳能力加强最直接的表现〔11〕。本实验结果显示，复方黄山精均可延长小鼠负重游泳力竭时间，有明显的抗运动耐力下降的作用。

机体在剧烈运动时，缺氧使大量葡萄糖通过无氧酵解途径提供能量，造成糖酵解产物乳酸大量堆积，引发一系列生化反应，进而造成运动性疲劳。LDH在乳酸的代谢过程中起催化作用，LDH活性的升高，可以加速乳酸的清除代谢从而起到抗疲劳作用〔12〕。本实验结果显示复方黄山精可显著提高小鼠LDH活性，减少乳酸堆积而产生抗疲劳的作用。

BUN与机体功能、疲劳程度及负荷量的大小呈正相关〔12〕。剧烈运动时，糖或脂肪分解产生的能量不能满足机体需要，此时蛋白质分解以补充能量，进而造成蛋白质的代谢产物BUN含量的增加。本研究中复方黄山精可显著降低小鼠BUN含量，提示剧烈运动时复方黄山精可降低蛋白质分解，提高机体运动负荷量。肝糖原是一个反应疲劳状态较敏感的指标〔11〕。剧烈运动时，肌糖原消耗不断增加，肝糖原储备减少以维持血糖水平。实验结果显示，复方黄山精可通过增加肝糖原储备和(或)减少运动时肝糖原的消耗，从而为机体提供更多的能量来增强小鼠的抗疲劳能力。

长时间运动后体内会产生大量的自由基和活性氧，过量的自由基和活性氧是使人体功能下降和产生疲劳的重要因素〔13〕。SOD是清除自由基的重要酶，直接反映机体抗氧化水平。MDA是自由基引起的脂质过氧化的主要产物之一。本实验结果显示，复方黄山精可以有效提高SOD活性，降低MDA含量，清除自由基和活化氧从而产生抗疲劳作用。综上，本实验表明食养复方黄山精具有缓解体力疲劳的作用。