老年COPD患者CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平变化及其临床意义

贾博 张少华 刘建军

(1北京市垂杨柳医院心内科，北京 100022；2河北省老年病医院内科)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)主要表现为气流受限，发病机制以炎症反应为病理基础〔1，2〕。白细胞介素(IL)-18、IL-6和高敏C反应蛋白(hs-CRP)参与COPD的炎症过程，肺表面活性蛋白(SP-D)可直接反映气道及肺的损伤程度〔3〕。IL-6是联系T淋巴细胞与炎症因子的桥梁〔4〕。CD83可反映肺组织免疫调节状态，进而推断肺部的稳态平衡程度，组蛋白乙酰化酶(HAT)/去乙酰化酶(HDAC)2失衡是COPD炎症反应的重要因素〔5〕。本文拟进一步探究COPD的抗炎机制。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年3月至2017年4月在北京市垂杨柳医院接受治疗的老年COPD患者90例，男50例，女40例，年龄65～82〔平均(73.52±3.41)〕岁，病程5～10〔平均(7.32±1.01)〕年。纳入标准：(1)符合COPD的相关诊断标准；(2)无其他呼吸系统疾病。排除标准：(1)临床资料不全者；(2)合并免疫功能障碍者。对照组90人为体检正常的健康老年人，男45人，女45人，年龄65～85〔平均(73.55±3.63)〕岁。两组年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会评审通过，且研究对象均知情同意。

1.2方法 外周单个核细胞(PBMC)分离得外周血沉淀物加入等量生理盐水混匀，滴加适量淋巴细胞分离液3 000 r/min离心15 min，离心后分3层，用毛细管吸取上中层交界处的白色云雾层即单核细胞层，置于离心管中，加入5倍生理盐水，10 000 r/min离心1 min洗涤2次。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定PBMC中HDAC2的含量，所需仪器购自Abnova公司，批号为KA2744，操作步骤严格按照说明书进行。采用Jaegar公司生产的呼气冷凝液收集器，患者用口平静呼气15 min呼出气体，遇冷凝结成液体收集，保存于-80℃采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定CRP、IL-17、IL-6、IL-18、SP-D、CD83肺功能测定，采用Maste Screen PFT型肺功能仪购自德国Jaeger公司测定肺功能相关指标：1 s用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC、呼气峰流速值(PEF)、最大呼气中期流量(MMEF)。

1.3评价指标 观察两组CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平及细胞因子和肺功能的差异，分析老年COPD患者CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平与肺功能和细胞因子的相关性。

1.4统计学处理 采用SPSS11.5软件进行t检验及Pearson相关分析。

2 结 果

2.1两组CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平比较 COPD组CD83和HDAC2 mRNA水平明显低于对照组，IL-17和SP-D水平明显高于对照组(均P<0.001)，见表1。

2.2两组细胞因子水平比较 COPD组IL-18、IL-6和hs-CRP水平均明显高于对照组(均P<0.001)。见表2。

2.3两组肺功能水平比较 COPD组FVC、FEV1/FVC、MMEF和PEF水平均明显低于对照组(均P<0.001)。见表3。

表1 两组CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平比较

表2 两组细胞因子水平比较

表3 两组肺功能水平比较

2.4COPD患者CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA与肺功能和细胞因子的相关性 COPD组CD83 和HDAC2 mRNA水平与IL-18(r=-0.613、-0.618，P=0.041、0.005)、IL-6(r=-0.605、-0.603，P=0.035、0.023)、hs-CRP(r=-0.598、-0.615，P=0.021、0.029)水平呈负相关，与FVC(r=0.621、0.624，P=0.017、0.032)、FEV1/FVC(r=0.615、0.633，P=0.011，0.041)、MMEF(r=0.603、0.608，P=0.008、0.001)和PEF(r=0.587、0.599，P=0.002、0.014)呈正相关；COPD患者IL-17和SP-D水平与IL-18(r=0.632、0.615，P=0.003、0.011)、IL-6(r=0.615、0.623，P=0.015、0.008)、hs-CRP(r=0.627、0.617，P=0.027、0.042)水平呈正相关，与FVC(r=-0.608、-0.624，P=0.033、0.037)、FEV1/FVC(r=-0.617、-0.631，P=0.002、0.022)、MMEF(r=-0.624、-0.622，P=0.012、0.016)和PEF(r=-0.595、-0.608，P=0.027、0.001)呈负相关。

3 讨 论

COPD发病机制多种，长期吸烟、其他有害颗粒吸入致肺部慢性炎症反应是其主要原因。多种炎症细胞、细胞因子介质参与的炎症反应，不仅破坏肺实质、肺血管，造成气管重塑，还对肺损伤修复防御机制造成一定程度破损〔6，7〕。肺部蛋白酶-抗蛋白酶失衡，凋亡、抗凋亡及氧化、抗氧化系统的失衡仍是重要原因。

本研究结果显示，COPD患者血浆中IL-17、IL-18浓度升高。其原因可能是中性粒是COPD炎症反应过程中的主要炎症细胞，其数量决定病情的严重程度。IL-17、IL-18可调控中性粒在呼吸道中的募集、激活能力，是联系T淋巴细胞和中性粒细胞的重要介质，通过募集中性粒细胞实现炎症反应的持续性进行〔8〕。

COPD诱发因素如长期吸烟、有害颗粒、细菌病毒的反复侵入等，可刺激上述细胞分泌IL-6。增多的IL-6不仅能提高募集、激活中性粒细胞的能力，还可抑制中性粒细胞凋亡，延长其寿命。局部蓄积造成持续效应-放大炎症反应。IL-6与中性粒细胞结合，可以使细胞变形，通过脱颗粒、呼吸爆发反应，释放大量超氧化物，促进炎症反应的进行，诱导中性粒细胞释放弹性蛋白酶是蛋白酶-抗蛋白酶失衡的主要原因。肺组织、肺泡壁损伤诱发肺气肿。袁玉亮〔9〕发现IL-16水平与FVC、FEV1/FVC、MMEF、PEF水平下降程度呈负相关，与本研究结果一致，说明IL-16降低小气道功能，且能反映其下降程度。

hs-CRP是一种急性时相反应蛋白，可由感染、炎症状态下产生的IL-6等细胞因子刺激肝脏细胞合成，以调节控制炎症反应〔10〕。作为炎症状态组织损伤标准，本研究结果显示COPD患者中血清hs-CRP浓度升高。SP-D由肺泡Ⅱ型上皮细胞合成并分泌，可降低吸气阻力，维持肺泡容积相对稳定，COPD患者肺损伤，肺血管壁通透性增加，SP-D与连接不紧密的肺表面磷脂分离，通过肺气-血屏障进入血液，使血液中SP-D水平升高〔11〕。

HDAC2 mRNA转录表达HDAC2为糖皮质激素介导的具有抗炎作用的组蛋白去乙酰化酶〔12〕。COPD诱发因素香烟烟雾通过激活肺部氧化应激，释放过氧化物可使HDAC2活性降低，甚至是失去活性〔13〕。本研究结果显示，COPD患者通过下调HDAC2 mRNA抑制HDAC2的释放及其活性的发挥。尚东等〔14〕实验证明，长期使用香烟提取物使CD83表达水平下降。姚伦凯等〔5〕报道老年COPD组CD83和HDAC2 mRNA水平与IL-18、IL-6、hs-CRP水平呈负相关，与FVC、FEV1/FVC、MMEF和PEF呈正相关，与本研究结果一致。综上，老年COPD患者CD83、HDAC2 mRNA水平较低，IL-17、SP-D较高，可作为临床监测的重要指标。