CA199、TMPRSS4在早期非小细胞肺癌组织的表达及在肿瘤血管形成中的作用

黄汉琮 陈乾华 杨晓蕊

(航空总医院，北京 100012)

肺癌是目前临床常见的恶性肿瘤之一，对人类健康危害极其严重〔1〕。相关报道显示〔2〕，近年来各个国家的肺癌发病率平均增长了15%～65%。肺癌患者中大部分是非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后通常较差，很大一部分原因是诊断出肺癌病变时已经是肺癌中晚期，错过了最佳治疗时间。穿膜丝氨酸蛋白酶(TMPRSS)4是穿膜丝氨酸蛋白酶中的主要成员，具有胰蛋白活性〔3〕。本研究探讨TMPRSS4、糖链抗原(CA)199在早期NSCLC组织及癌旁组织的表达及与肿瘤血管形成中的作用。

1 资料和方法

1.1一般资料 选取2014年1～12月在中国医科大学航空总医院胸外科接受治疗的原发性早期NSCLC患者85例，男56例，女29例，年龄40～73〔平均(61.52±10.93)〕岁，平均体重指数(21.7±2.1)kg/m2。所有患者经病理诊断证实为早期NSCLC。腺癌64例，鳞癌21例；高分化33例，中分化与低分化各26例。排除标准：①入院前已接受化疗、放疗以及其他抗癌治疗；②合并糖尿病、高血压等疾病；③有颅脑、肝脏等远处转移。

1.2研究方法

1.2.1采用免疫组化法检测NSCLC患者体内癌组织及癌旁组织CA199、TMPRSS4及CD34的表达 手术取患者癌组织及癌旁组织制成切片并染色。将切片置于60℃的环境中保存1 h，采用二甲苯溶液脱蜡、酒精退水。分成3份分别加入TMPRSS4、CA199及CD34抗体进行单抗，培育后自来水冲洗，复染、氨水反蓝、脱水干燥等操作，最后封片进行镜检。记录CA199及TMPRSS4阳性检出率。

1.2.2采用Real-time PCR检测癌组织与癌旁组织中TMPRSS4 mRNA的表达量 提取14对NSCLC患者癌组织及癌旁组织的总RNA，根据D260/D280的比值来测定RNA的浓度。反应条件为95℃下预变性2 min，94℃下变性20 s，60℃退火20 s，72℃下延伸30 s，总共40个循环。

1.3结果判断 在镜下观察免疫组织化学的结果，若细胞质与细胞核呈现棕黄色的细颗粒则为阳性表达，TMPRSS4蛋白的阳性表达为细胞膜阳性。根据阳性细胞所占的百分比分为阳性及阴性：阳性细胞率<25%为阴性，≥25%为阳性。根据肿瘤血管形成的定量评价方法对微血管密度(MVD)进行计数。

1.4统计学方法 采用SPSS13.0软件进行χ2及t检验，相关性分析选用Spearman法。

2 结 果

2.1NSCLC患者CA199的表达与临床病理类型、癌旁组织的关系 CA199在癌组织中阳性率为91.76%，明显高于癌旁组织中的阳性率(16.47%)；TNM分期中Ⅰ期的阳性率为82.35%，明显低于Ⅱ期的阳性率(98.04%)，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表1。

表1 NSCLC患者CA199的表达与病理类型、癌旁组织的关系〔n(%)〕

2.2NSCLC患者TMPRSS4 mRNA表达量、蛋白阳性检出率与癌旁组织的关系 TMPRSS4 mRNA在癌组织中的表达量为1.827±0.451，显著高于癌旁组织(0.915±0.316)；TMPRSS4蛋白在癌组织中的检出率为82.35%，显著大于癌旁组织(16.47%)，差异均有统计学意义(t=15.269,P=0.000;χ2=73.798,P=0.000)。

2.3NSCLC组织内 MVD 与临床病理特征的关系 TNM分期Ⅱ期的患者高MVD的比例显著高于Ⅰ期，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 NSCLC组织内 MVD 与临床病理特征的关系(n)

3 讨 论

CA199是细胞膜上的糖脂质，分子量较大，是目前临床上对胰腺癌敏感度最高的肿瘤标志物〔4〕。有相关报道表明，TMPRSS4在人体正常组织中很难检测到，但在胰腺癌及各种癌症组织中通常呈现高表达〔5〕。CD34蛋白是一种人体血管内皮细胞的特殊标志物，临床上能够通过对CD34蛋白的表达检测肿瘤患者肿瘤组织中的肿瘤血管密度，从而判断肿瘤血管的形成〔6〕。本研究结果提示CA199在NSCLC患者癌组织中的表达明显多于癌旁组织，对肺癌的早期诊断具有重要意义。李培超等〔7，8〕的研究中发现，CA199可作为肺癌的一个检测指标，而对肿瘤病理分型诊断意义不大。在本研究中，CA199在肺癌组织中的表达远高于癌旁组织同样能证明此结论。原因可能在于TMPRSS4表达在某些器官和肿瘤组织的细胞表面，具有可以降解细胞膜及其细胞外基质的潜在功能，因此可以促进肿瘤的扩散和转移。本研究结果提示NSCLC的发生、加重与TMPRSS4的高表达关系密切。有报道亦证实，TMPRSS4基因的表达若较高能够导致NSCLC患者肿瘤血管形成〔9〕。本研究中TNM分期Ⅱ期的患者高MVD的比例显著高于Ⅰ期。这与郭延林等〔10〕报道的NSCLC肿瘤的发展程度与TMPRSS4表达水平、MVD水平密切相关相符。综上，TMPRSS4及CA199在NSCLC组织中为高表达，CA199对早期诊断NSCLC的具有重要意义，TMPRSS4促进了肿瘤的发展与肿瘤血管的形成。