1976年中国唐山地震生存截瘫患者淋巴细胞亚群水平检测研究*

王菊惠，袁宝军，李 超，裴 斐，李佳强，杨宏秀

(1.开滦总医院a.检验科；b.神经外科，河北唐山 063000；2.唐山市截瘫疗养院检验科，河北唐山 063003)

1976年中国唐山地震幸存截瘫患者，经受身体残疾、心理疾患及反复发作的多种并发症(如褥疮、泌尿系感染、肺部并发症、便秘、深静脉血栓、神经痛等)折磨，机体的免疫功能势必会受到不同程度的影响。以前的研究[1，2]多着重于体液免疫水平，分析免疫球蛋白和补体的变化，对截瘫患者外周血淋巴细胞亚群水平的研究罕有报道。本次实验主要检测唐山地震截瘫患者的细胞免疫水平，即淋巴细胞亚群水平，包括CD3+总T细胞，CD4+T细胞，CD8+T细胞，CD4+/CD8+，CD19+B细胞和CD16+CD56+自然杀伤细胞(natural killer cells，NK细胞)，为临床提供唐山地震40多年后截瘫患者的细胞免疫水平的数据，辅助临床治疗。

1 材料与方法

1.1 研究对象 截瘫组：从2016年7月～2017年6月，陆续采集110例唐山市截瘫疗养院、康复村及散居截瘫患者的清晨空腹静脉血2 ml于EDTA-K2抗凝管中，6 h内完成处理分析。其中，男性38例，平均年龄64.7±7.7岁，女性72例，平均年龄66.1±7.8岁。对照组为健康体检者，共130例，其中男性41例，女性89例，平均年龄68.7±8.9岁，无肝脏、肾脏及免疫功能疾病病史。

1.2 试剂和仪器 流式荧光标记抗体试剂CD3 FITC，CD4 PE，CD8 PE，CD19 PE和CD16+CD56+PE CD4均购自美国BD Biosciences公司。仪器为美国BD公司的FACSCalibur流式细胞仪。

1.3 方法 严格按照说明书操作。具体操作步骤见李超等[3，4]T淋巴细胞亚群，B淋巴细胞及NK细胞测定的操作方法。用cellquest软件分析结果。

2 结果

2.1 截瘫患者和对照组外周血中CD3+，CD4+，CD8+T细胞，CD4+/CD8+，CD19+B细胞和CD16+CD56+NK细胞水平 见表1。截瘫组与健康对照组比较，CD8+T细胞，CD4+/CD8+和CD16+CD56+NK细胞水平差异均有统计学意义(F=1.375，1.052，0.674，均P<0.05)，CD3+，CD4+T细胞，CD19+B细胞差异无统计学意义(F=0.800，1.490，0.223，均P>0.05)。

表1 截瘫组与健康对照组CD3+，CD4+，CD8+T细胞，CD4+/CD8+，CD19+B细胞和CD16+CD56+NK细胞水平

2.2 不同性别截瘫患者外周血中CD3+，CD4+，CD8+T细胞，CD4+/CD8+，CD19+B细胞和CD16+CD56+NK细胞比较 见表2。男女两组外周血中CD19+B细胞差异具有统计学意义(F=0.038，P<0.05)，CD3+，CD4+，CD8+T细胞，CD4+/CD8+和CD16+CD56+NK细胞无明显改变，差异无统计学意义(F=0.002～1.808，均P>0.05)。

表2 男女截瘫患者外周血CD3+，CD4+，CD8+T细胞，CD4+/CD8+，CD19+B细胞和CD16+CD56+NK细胞的比较

2.3 截瘫患者外周血中CD4+，CD8+T细胞，CD4+/CD8+，CD19+B细胞和CD16+CD56+NK细胞的相关性 见表3。CD4+与CD8+(r=-0.333，P=0.008)，CD4+与CD4+/CD8+(r=0.728，P=0.000)，CD4+与CD16+CD56+(r=-0.429，P=0.000)，CD8+与CD4+/CD8+(r=-0.783，P=0.000)，CD8+与CD16+CD56+(r=-0.424，P=0.000)，CD19+与CD16+CD56+(r=-0.346，P=0.001)差异均有统计学意义。

3 讨论

刘满合[5]调查与分析唐山地震25年截瘫病人死亡原因显示，威胁截瘫患者生命安全的是不同程度的各种并发症。由于反复发病和用药，截瘫患者的免疫功能可能会产生不同程度的变化。本研究主要研究截瘫40年后患者的淋巴细胞亚群水平。

表3 截瘫患者外周血CD4+，CD8+T细胞，CD4+/CD8+，CD19+B细胞和CD16+CD56+NK细胞的相关性分析

注：**在0.01水平(双侧)上显著相关。

T淋巴细胞在骨髓中形成，于胸腺中发育成熟，再定居淋巴结、脾及其他淋巴组织等周围免疫器官。CD3+是所有T淋巴细胞表面的特征性抗原标志，T淋巴细胞分为辅助性T淋巴细胞(其表面标志是CD4+)、抑制性T淋巴细胞(表面标志是CD8+)、调剂/抑制T淋巴细胞和记忆T细胞等。各种T细胞作用不同，辅助性T淋巴细胞释放细胞活性因子，抑制性T淋巴细胞释放抑制因子，从而对B淋巴细胞及效应T淋巴细胞产生活化及抑制效应。淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的比值是评价细胞免疫平衡的重要指标之一[6]，比值升高说明免疫功能增强，反之为免疫功能低下。本研究截瘫组与正常对照相比，辅助性T淋巴细胞有降低趋势，抑制性T淋巴细胞明显升高，提示截瘫患者免疫抑制增强，同时发现截瘫患者CD4+/CD8+比值降低，说明截瘫患者免疫功能低下。另有国外Sistigu等[7]研究CD8+T细胞的抗原性和免疫原性显示大多数感染性疾病CD4+/CD8+比率降低或倒置，同时Remick[8]G研究脓毒血症的病理生理显示免疫抑制的出现使得患者易于并发感染，并使感染难于控制，导致病情恶化。本研究人群为40多年的截瘫患者，长期受慢性疾病的影响，导致T淋巴细胞亚群结果异于正常人，免疫功能紊乱。此研究结果与江浪进等[9]的280例慢性乙型肝炎，顾盼瑾等[10]的36例肾癌患者的T淋巴细胞水平的分析结果相似。Dejong等[11]的慢性阻塞性肺病炎症中淋巴细胞改变主要是CD8+T淋巴细胞增多，CD4+T淋巴细胞减少或不变，CD4+/CD8+比值下降，与我们的研究结果亦相似。截瘫患者反复发作的感染及并发症，可能是免疫紊乱引起的恶性循环，还有待进一步研究。

CD19是B淋巴细胞表面的激活性受体，在B淋巴细胞分化及成熟全过程均有表达。本研究显示截瘫患者与正常对照的B淋巴细胞功能无显著性变化。但女性比男性有更高水平的CD19+B细胞，其意义尚不清楚。

CD16和CD56抗原是自然杀伤细胞主要的表面标记，不同NK细胞亚群的生物学功能各异[12]，并可通过释放细胞因子调节特异性免疫反应。Brigl等[13]在CD1抗原呈递和T淋巴细胞功能中阐述，虽然NK细胞在人体中的数量相对较少，但是调节机体自身免疫平衡，抵御感染，抵抗肿瘤的重要细胞。本研究的结果为截瘫患者外周血中NK细胞百分比明显低于正常对照，证明截瘫患者自然杀伤细胞能力降低。

CD4+与CD8+，CD4+与CD4+/CD8+，CD8+与CD4+/CD8+，CD4+与CD16+CD56+，CD8+与CD16+CD56+，CD19+与CD16+CD56+存在显著相关性，说明各种T细胞、B细胞与NK细胞，协同发挥生物学作用，从而维持机体内环境的稳定。

另外，本实验没有研究唐山地震截瘫患者外周血中的CD4+CD25+Foxp3+的Treg细胞水平，可以借鉴高硕等[14]的研究，对截瘫患者的细胞免疫水平做进一步探讨。

总之，1976年唐山地震截瘫患者四十多年来，机体淋巴细胞亚群水平严重紊乱，免疫功能降低，疾病恢复功能障碍，希望能对截瘫患者的预后提供一些参考和启发。