当归醇提物阿魏酸含量和体外抗氧化性检测

孙晓春，李 铂，黄文静，王 楠，宋忠兴，唐志书

(陕西中医药大学 陕西省中药资源产业化协同创新中心，陕西 咸阳 712083)

当归为伞形科植物当归Angelicasinensis( Oliv. ) Diels的干燥根，其性温，味甘、辛。归肝、心、脾经；具有补血活血、调经止痛等功效[1～2]。主要包括挥发油[3]、多糖[4]、有机酸[5]等成分。研究显示，阿魏酸具有抗氧化和清除自由基的作用，同时还具有抗肿瘤、降血脂、抗病毒等重要作用[2,6]。《中国药典》2015年版将阿魏酸规定为当归药材的检测指标。王婕等[7]建立了HPLC法测定当归药材中阿魏酸和藁本内酯含量的方法。李琰等[8]以HPLC法测定21个产地当归的阿魏酸含量，阿魏酸的含量在0.243%～1.026%之间，结果表明不同产地的当归阿魏酸含量相差较大。目前关于当归多糖[9～10]、挥发油[11]的抗氧化活性研究均有报道。笔者对甘肃省陇南市宕昌县采收的12批当归药材中阿魏酸含量进行了测定，并对其中4批药材醇提物的体外抗氧化活性进行了检测，为天然抗氧化剂的开发提供数据。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

当归采收于甘肃省陇南市宕昌县。经陕西中医药大学中药鉴定教研室王继涛高级实验师鉴定为为伞形科植物当归Angelica sinensis ( Oliv. ) Diels的干燥根。

阿魏酸对照品(批号wkq17022303，四川省维克奇生物科技有限公司出品)，甲醇(成都市科隆化学品有限公司)，DPPH (笛医生物科技有限公司)，Vc(成都科龙化工试剂厂)，总抗氧化能力试剂盒 (批号20180306，南京建成生物工程研究所)，超氧阴离子清除能力试剂盒(批号201702，苏州科铭生物技术有限公司)。

KQ3200超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，FA2004B电子天平(上海佑科仪器仪表有限公司)，UV-2600紫外分光光度计(日本岛津)，1510全波长酶标仪(赛默飞世尔科技公司)，e2695高效液相色谱仪(沃特世科技有限公司)。

1.2 当归醇提物制备

参照《中国药典》2015年版进行制备。

1.3 阿魏酸含量检测

参照《中国药典》2015年版，色谱条件：色谱柱Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)为流动相；流速1.0 mL·min-1检测波长为316 nm；柱温35 ℃。

1.4 清除DPPH·活性测定方法

参照吴小燕等[12]的清除DPPH·活性测定方法。

1.5 清除·OH活性测定方法

参照汪荔等[13]的清除·OH活性测定方法，以水杨酸法测·OH清除率。

1.6 总抗氧化能力测定

按照试剂盒说明书操作。

1.7 清除超氧阴离子自由基活性

按照试剂盒说明书操作。

1.8 统计分析

试验所得数据利用Excel 2013进行分析和制图。

2 结果与分析

2.1 阿魏酸含量检测结果

阿魏酸对照品色谱图如图1A所示，当归样品色谱图如图1B所示，其中保留时间17.1 min色谱峰为阿魏酸。12批当归样品中阿魏酸含量检测结果如表1所示。阿魏酸含量在0.1393%～0.2335%之间，均高于中国药典规定的0.05%。

图1 对照品(A)和供试品(B)高效液相色谱

编号s1s2s3s4s5s6s7s8s9s10s11s12阿魏酸含量/%0.23350.22310.18580.13930.18630.20640.18340.17650.21420.15970.15940.1955

2.2 体外抗氧化性检测结果

2.2.1 清除DPPH·活性测定结果 随机选取4批当归醇提物(s2、s7、s10和s12)进行体外抗氧化活性检测，以Vc作为对照。对DPPH·清除结果如图2所示。4批当归醇提物对DPPH·均具有清除作用，并且随浓度增加，清除作用增加，呈量效关系。浓度为8 μg·mL-1时，s2、s7、s10和s12对DPPH·的清除率分别为77.98%、81.44%、81.97%和85.16%，相同浓度下Vc对DPPH·的清除率为53.65%。结果表明当归醇提物对DPPH·的清除作用高于Vc对DPPH·的清除作用。

2.2.2 清除·OH活性测定结果 对·OH的清除结果如图3所示。4批当归醇提物对·OH的清除作用良好。浓度为0.5 μg·mL-1时，s2、s7、s10和s12对·OH的清除率分别为53.06%、47.15%、67.45%和62.42%，相同浓度下Vc对·OH的清除率为6.56%。结果表明当归醇提物对·OH的清除作用高于Vc对·OH的清除作用。

图2 当归醇提物和Vc对DPPH·清除结果

图3 当归醇提物和Vc对·OH清除结果

图4 当归醇提物和Vc对清除结果

2.2.4 总抗氧化能力测定结果 按照试剂盒方法操作，样品抗氧化活性以达到同样A 值所需的FeSO4 的浓度(mmol·L-1)表示，所需FeSO4的量越大，表明总抗氧化能力越高。结果如图5所示，在相同浓度下，当归醇提物的总抗氧化能力均高于Vc的总抗氧化能力。

图5 归醇提物和Vc的总抗氧化能力检测结果

3 结论

所采样品中阿魏酸含量在0.1393%～0.2335%之间，均高于中国药典规定的0.05%。采用四种体系(·OH、DPPH·、O2-·和总抗氧化能力)检测了当归醇提物的体外抗氧化能力，均高于同浓度下Vc的抗氧化能力。结果表明，宕昌当归醇提物具有良好的体外抗氧化能力，可为天然抗氧化剂的开发提供理论数据。