几种抗球虫药物对獭兔球虫感染和幼兔生长性能的影响

兰加花 福建省福安市潭头镇畜牧兽医站 福建福安 355014

兔球虫病是家兔最常见且危害最为严重的寄生虫病之一，目前据国内外文献报道已检测出17种兔球虫，其中包括16种艾美耳属（Eimeria）和1种等孢属（Isospora）球虫[1-3]，除了斯氏艾美耳球虫寄生肝脏胆管上皮细胞内，其余均寄生在肠上皮细胞内，多数为混合感染[4-5]，主要危害1～3月龄幼兔，60日龄内最为敏感，感染率高达90%以上，患病幼兔死亡率高达40%～70%，成年兔多为临床型或带虫者[6]。如不及时防治，常常导致幼兔大批死亡，给养兔业带来巨大的经济损失。因此，应用抗兔球虫药对防?治兔球虫病大面积的暴发具有重要意义。在獭兔抗球虫药物预防和临床治疗上，先后有开展过莫能菌素、盐霉素、氯苯胍、地克珠利、磺胺六甲氧嘧啶、复方抗球散等试验[7-9]。我们先期调查了福建省某獭兔场球虫感染情况，40～65日龄幼兔感染率最高，达98%以上；检出的球虫种类有11种[10]；该场有些抗球虫药物使用效果不佳，幼兔球虫病死亡率最高达27%。因此，选取妥曲珠利等抗球虫药，观测抗球虫感染的效果以及对獭兔幼兔生长的影响，为獭兔养殖场正确防控球虫病提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验用动物及分组 选取福建省福安市某獭兔场母兔健康状况良好、出生时间相近的断乳幼兔210只，随机分为7组，抗球虫药物为2.5%妥曲珠利、5%肠球双效和5%优球乐，分为一次给药组和二次给药组，另设对照组。每组试验幼兔死亡不补充、不寄养，按常规饲养和免疫。幼兔饲料采用临沂市瑞泰饲料有限公司生产的兔用1号粒料，粗蛋白≥17%，断乳后少量饲喂，逐渐加量，以15 min内吃完为标准，每天投喂量约为体重的4%～5%，分2次投喂。

1.2 试验器材 电子称，最大称量20 kg（精确度0.01 g）；注射器（1 mL）；生物显微镜；麦克马斯特计数板；饱和食盐水等。

1.3 试验药物 2.5%妥曲珠利溶液，拜耳（四川）动物保健有限公司生产（批号：CN18887）；5%肠球双效（有效成分为盐酸氨丙啉+磺胺喹噁啉钠），南京龙马动物药业有限公司生产（批号：20150123）；5%优球乐（有效成分为癸氧喹酯），广州华农大实验兽药有限公司生产（批号：14060501）。

1.4 抗球虫药物试验剂量、给药及称重、粪便采样2.5%妥曲珠利、5%肠球双效（盐酸氨丙啉+胺喹噁啉钠）、5%优求乐（癸氧喹酯）分别设2个试验组（一组为一次给药组，另一组为二次给药组），对照组为生理盐水组，每组30只幼兔。试验幼兔在断乳时进行分笼、称重和标记。2.5%妥曲珠利组按有效剂量30 mg/kg体重，5%肠球双效组和5%优球乐组按有效剂量50 mg/kg体重，分别用注射器经口灌服，对照组每只灌服1 mL生理盐水；1周后，二次给药组再分别按上述剂量灌服。定期测定各组獭兔从断乳到用药后第8周的体重。

定期采集各组獭兔从断乳到用药后第8周新鲜粪样（每笼采集2份样品，每份20 g左右），分别装入干净链封塑料袋，注明兔笼编号、日龄、用药情况等，最后将所采集的新鲜样品装入放有冰袋的采样箱中带回实验室镜检。

1.5 OPG值检测 用电子称（精确度0.01 g）称取2 g粪样置于l00 mL烧杯中，用长柄药匙将粪便捣碎，先加入l0 mL饱和食盐水，充分搅拌成粪浆，再加入饱和盐水至60 mL，用玻璃棒混匀；先用80目金属筛网过滤一次，再用120目金属筛网过滤，即刻用胶头滴管吸取滤液注入到麦克马斯特氏计数板的2个计室内（避免产生气泡），室温下静置2 min，然后在显微镜（×100）下检查，计算左右2个刻度室的卵囊数（n1、n2），求得2个计室卵囊的平均数（单个该计数室的容积：1 cm×1 cm×0.15 cm=0.15 cm3），乘200即为每克粪样中的卵囊数，即：OPG=（n1+n2）/2×200。

1.6 统计方法 用统计软件SPSS 17.0的ANOVA模块对不同药物组的不同日龄獭兔体重、獭兔球虫卵囊OPG值（原始数据对数化后）分别进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 獭兔断乳时球虫感染情况 共采集福建省福安市某獭兔场母兔健康状况良好、出生时间相近的断乳幼兔粪样1 980份，通过高倍显微镜下观察孢子化的卵囊，根据其具体特征结合相关参考文献鉴定卵囊种类，共检测出穿孔艾美耳球虫（Eimeria perforans）、小型艾美耳球虫（E.exigu）、纳格浦尔艾美耳球虫（E.nagpurens）、松林艾美耳球虫（E.matsubayashi）、盲肠艾美耳球虫（E.coecicola）、维氏艾美耳球虫（E.vejdovsky）、中型艾美耳球虫（E.media）；兔艾美耳球虫（E.lepori）、大型艾美耳球虫（E.magna）、斯氏艾美耳球虫（E.stieda）、肠艾美耳球虫（E.intestinal）、长型艾美耳球虫（E.elongat）、无残艾美耳球虫（E.irresidu）、黄艾美耳球虫（E.flavescens）、新兔艾美耳球虫（E.neotepor）、梨形艾美耳球虫（E.piriformi）等16种艾美耳球虫，其孢子化卵囊的形态、大小、结构与相关文献描述一致；感染率达到100%，平均OPG值为4.98×104。

2.2 抗球虫药物对獭兔球虫感染的影响

2.2.1 不同药物作用下獭兔球虫感染率 该獭兔场试验幼兔在断乳时的球虫感染率为100%，用药后第1周，2.5%妥曲珠利1次用药组獭兔幼兔球虫感染率降为86.77%，肠球双效组与优球乐组的感染率仍为100%，比对照组（97.56%）高。用药后第2周，妥曲珠利2次用药组球虫卵囊阳性率降至77.42%，显著低于其他各组（P＜0.05）；用药第3周后各组獭兔球虫卵囊的阳性率出现升高趋势；用药后第8周，妥曲珠利组和优球乐2次用药组球虫卵囊阳性率低于其他组（见表1）。

2.2.2 妥曲珠利等抗球虫药物对獭兔幼兔球虫感染强度的影响 獭兔各组试验幼兔用药前球虫平均OPG值在46 833～57 933，差异不显著（P＞0.05）。给药后第1周，妥曲珠利组幼兔球虫OPG值比用药前减少了78.39%，下降幅度极显著高于优球乐组（P＜0.01）；其2次用药组獭兔在给药后第2周球虫OPG值比用药前减少了88.35%，下降幅度极显著高于其他药物组和对照组（P＜0.01），此后均保持较低感染水平。说明妥曲珠利2次用药对獭兔幼兔球虫感染有较为稳定的抑制作用（见图1）。用药后第8周比用药前减少了92.99%，下降幅度极显著高于其他药物组和对照组（P＜0.01）；自第8周起，各试验组獭兔幼兔球虫感染均转归为相对较低水平。

表1 不同药物作用下獭兔球虫感染率情况

2.3 妥曲珠利等抗球虫药物对獭兔幼兔生长的影响 测定獭兔幼兔口服不同抗球虫药物后的个体增重，结果显示，幼兔用药前各组间平均体重差异不显著（P＞0.05），至用药后第8周，2.5%妥曲珠利组獭兔平均增重显著高于对照组（P＜0.05），料重比则显著低于对照组和5%肠球双效1次用药组（P＜0.05），见表2。

3 讨 论

大样本调查结果显示，该獭兔场兔球虫多样性丰富，有16种艾美尔球虫，比此前调查增加5种[10]；感染比例最高的为穿孔艾美耳球虫，与乔军等[11]、宋鸿雁等[12]以及孟庆玲等[13]对兔球虫的调查结果相同。

图1 妥曲珠利等药物对獭兔幼兔球虫卵囊OPG值的影响

表2 试验獭兔体平均增重情况

在獭兔不同生长阶段，以40～65日龄幼兔球虫感染率最高，接近100%；从感染率变化曲线看，哺乳仔兔球虫感染率最低（19.23%），40日龄左右的断乳仔兔球虫感染率急剧升高到98.61%，此后仍可保持高感染率，150日龄左右成年兔和怀孕母兔的感染率下降至70%～80%。獭兔球虫感染强度（OPG值)变化前期与感染率变化基本一致，亦为哺乳仔兔最低（OPG值：330），40～65日龄幼兔平均OPG值很快上升至5×104～6×104，80日龄后平均OPG值下降至1.5×104，150日龄后平均OPG值下降至1.64×103[9]。成年兔球虫病多为亚临床型或带虫者[14]，母兔的球虫感染强度也不高，但可传播球虫卵囊使幼兔感染，导致兔球虫病[15-16]，因此，獭兔幼兔球虫病防控是獭兔场球虫病防控的重点。

药物防控仍是目前兔球虫病防控的主要手段。聚醚类、喹啉类、嘧啶类、磺胺类、三嗪类、中草药类等抗球虫药在兔球虫病防控中均有应用，尤其在幼兔阶段抗球虫药物基本上是必用药物。在獭兔抗球虫药物预防和临床治疗方面先后进行过一些试验，曾有报道在獭兔日粮中添加莫能菌素、盐霉素、氯苯胍以及地克珠利均能很好地预防球虫病的发生，其中在降低死亡率方面，盐霉素最低、效果最好[7]；在交替使用抗球虫药物方面，有研究者在氯苯胍、地克珠利、磺胺六甲氧嘧啶、三字球虫粉等抗球虫药物中选择2～3种交替使用，抗球虫感染效果好于使用单种药物[8]。在中草药应用方面，由白头翁、常山、贯仲、大黄、苦参等10味中药组成的复方抗球散试验组球虫卵囊减少率可达97.84%[9]；常山、蛇床子、大黄、苦楝皮、苍术、使君子、苦参、玉片、地榆炭、白茅根、柴胡、黄连等中草药煎剂与球虫血痢散（主要成分为磺胺喹噁啉钠）结合使用，防治獭兔球虫病总有效率达97%[17]。

在该獭兔场使用过多种抗球虫药，检测球虫卵囊强度仍高居不下，幼兔常发球虫病，说明该场兔球虫对一些抗球虫药物产生耐药性。妥曲珠利系新一代的抗球虫药，可阻断球虫整个生活周期，破坏球虫细胞内有性生殖和无性生殖，降低球虫卵囊排出，阻止球虫病流行[18]。妥曲珠利在体内生物半衰期长，生物利用度高，不易产生耐药性[19]。妥曲珠利口服溶液能够有效用于鸡、猪和兔球虫病的治疗，显著降低球虫病所导致的球虫卵囊排出量[20-21]。妥曲珠利运用于兔球虫病防治的研究较少，我们选择该药物观察其对獭兔幼兔球虫感染及生长性能的影响，以肠球双效（有效成分为盐酸氨丙啉和磺胺喹噁啉钠）和优球乐（有效成分是癸氧喹酯）作参照药物进行比较。以獭兔的球虫卵囊阳性幼兔试验，用药后第1周、第2周和第8周妥曲珠利组獭兔幼兔球虫平均OPG值分别下降了78.39%、88.35%和92.99%，下降幅度显著高于其他药物组和对照组（P＜0.01），死亡率也比对照组显著下降。对于生长性能提高，累积到用药第8周时才体现出来，有报道在13～14日龄肉仔鸡饮水中按7 mg/kg体重添加妥曲珠利溶液，能够显著提高饲料转化率和体重[20]；在3～6日龄哺乳仔猪口服5%妥曲珠利1.0 mL后，等孢球虫OPG值和球虫病的发生率下降，断乳仔猪的生长率有所提高[21-22]。本试验獭兔幼兔用药前期差异不显著，表明妥曲珠利以30 mg/kg体重的剂量能有效防控兔球虫的感染，且2次用药效果更佳。表明妥曲珠利能有效控制獭兔幼兔球虫感染，这与Peeters等[23]报道一致。

参照药物肠球双效（有效成分：盐酸氨丙啉和磺胺喹噁啉钠）和优球乐（有效成分是癸氧喹酯）对该场球虫抑制作用不明显。盐酸氨丙啉为广谱抗球虫药，可竞争性抑制球虫对硫胺（维生素B1）的摄取，从而妨碍虫体细胞内的糖代谢过程，抑制球虫的发育；磺胺喹噁啉钠为治疗球虫病的专用磺胺药，对鸡的各种球虫均有作用，一般认为盐酸氨丙啉与磺胺喹噁啉钠合用可扩大抗球虫范围，增强疗效；但两种药物的试验效果不好，原因可能为，一是该场球虫已经产生了对盐酸氨丙啉和磺胺喹噁啉钠药物的耐药性，二是给药方式不足以达到抗球虫效果。

优球乐药物的有效成分为癸氧喹酯，主要用于鸡球虫病的预防。目前，少见抗兔球虫作用机制方面的研究。有关资料介绍，癸氧喹酯对鸡柔嫩艾美耳球虫的子孢子有抑制作用，对第1代裂殖体有杀灭作用，对第2代及第3代裂殖体没有影响[24]。索勋等[25]研究了癸氧喹酯抗柔嫩艾美耳球虫豪顿株的效果，发现以20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg三种浓度拌料给药，其抗球虫指数均为180以上，且试验动物盲肠中未发现卵囊，当时认为该药为高效抗球虫药物。本次试验按高剂量50 mg/kg溶解水中口服给药，未见明显的抗球虫效果，原因可能也是球虫耐药性和给药方式问题，具体原因尚需进一步研究。