烯丙孕素对小鼠的经口急性毒性LD50试验

冯言言 郑 莉 孟 芳 林 红 李龙飞 田振平 孔 梅* 吴连勇*

（①齐鲁动物保健品有限公司 山东 济南 250100 ②齐鲁晟华制药有限公司 山东 德州）

烯丙孕素，为人工合成的甾类孕激素，属于19-去-甲睾酮系列，化学名为17α-烯丙基-17-羟基雌甾-4，9，11-三烯-3-酮。烯丙孕素外观呈白色结晶性粉末，具有脂溶性，能够渗入靶细胞，与特定的受体结合。烯丙孕素最初由英特威公司开发成溶液，可用于控制后备母猪同期发情 [1～3]。

烯丙孕素的作用机制同天然孕激素，具有拟孕酮和抗促性腺激素作用，同时也具有较弱的雌激素作用、促合成作用和雄性激素作用，但是无肾上腺皮质激素和抗炎作用[4]。口服烯丙孕素后能够抑制动物正常的性周期，降低血浆中内源性促性腺激素促黄体素和卵泡刺激素的浓度，继而使大卵泡退化，导致在治疗期间动物不会出现发情和排卵。一旦停止治疗，促黄体素的浓度便会稳步正常的升高，允许卵泡生长及成熟，动物便达到同期发情[5，6]。为考察烯丙孕素原料的急性毒性，特进行了烯丙孕素对小鼠经口染毒的急性毒性试验，以期为烯丙孕素制剂产品的开发以及临床应用提供一定的依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 清洁级健康ICR小鼠36只，体重18～22g，由扬州大学比较医学中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(苏)2012-0004，实验动物使用许可证号：SYXK(苏)2012-0004。小鼠自由采食和饮水，饮用水为符合城市饮用水标准的自来水。试验前在实验动物房环境中适应饲养3d。鼠饲粮的主要营养含量：水分(%)≤10，粗蛋白(%)≥18，粗脂肪(%)≥4，粗纤维(%)≥5，粗灰分(%)≤8，钙(%)1.0～1.8，磷(%)0.6～1.2。

1.1.2 试验器材 电子天平(感量0.1g)、无菌注射器(1ml)、灌胃器、剪刀、鼠笼、手套、口罩等。

1.1.3 受试物及配置 烯丙孕素原料，含量99.8%，批号：50031601001。根据烯丙孕素的预试验结果，染毒前准备称取一定量的烯丙孕素后用适量二甲基亚砜溶解，配成500mg/ml的溶液，备用。

1.2 方法[7， 8]

（1）预试验设计1000、2500、5000和8000mg/kg体重4个染毒剂量，每组4只小鼠(雌、雄各半)进行预试验，测定4/4致死剂量和0/4致死剂量。结果表明，烯丙孕素在上述染毒剂量下均未引起小鼠死亡。根据预试验结果，正式试验是采用最大给药剂量法测定烯丙孕素对ICR小鼠经口的半数致死量(LD50)。（2）正式试验时选用20只ICR小鼠，雌雄各半，禁食12h后分别称重。根据每只小鼠体重，计算给予受试物的体积。采用等体积灌服给药，小鼠经口灌服受试物体积为0.1ml/10g体重。当染毒剂量达到5000mg/kg体重后以上时，不再继续染毒。（3）受试物在染毒结束后持续观察30min，2h后再观察一次，之后观察1次/d，仔细记录动物的中毒表现和特点，毒性反应出现和小时的时间以及死亡时间。试验连续观察14d，观察期内动物自由采食和饮水。观察结束后将所有存活小鼠处死，进行眼观病理学检查。

2 结果

小鼠经口染毒后，观察期内所有小鼠临床表现正常，无明显神经症状，皮肤和被毛无异常，至观察期结束时20只小鼠均存活。试验结束后剖检存活小鼠，包括胃、十二指肠在内的内脏器官以及生殖器官均未发现明显眼观病变。结果见表1。结果表明，烯丙孕素对小鼠的经口LD50大于5000mg/kg体重。

表1 烯丙孕素对小鼠经口染毒试验结果

4 讨论及结论

（1）目前国内外有较少的关于烯丙孕素的急性毒性资料报道。EMA(European Medicines Agency，欧洲药品管理局)报道[9]，大鼠和小鼠腹腔注射烯丙孕素的半数致死量(LD50)分别为176mg/kg体重和233mg/kg体重，犬口服烯丙孕素剂量达 400mg/kg也能够很好地耐受，可以看出，烯丙孕素毒性较低。（2）本研究中烯丙孕素原料对小鼠经口染毒LD50大于5000mg/kg体重，根据外源性化学物毒性分级标准，可以确定烯丙孕素属于实际无毒化合物，可开发为临床使用制剂，用于控制后备母猪同期发情，便于规模化猪场的统一管理。