急性缺血性脑卒中患者血浆miR-124表达变化及其意义

谢尊椿 刘彬 周美鸿 陈永康

1南昌大学第一附属医院神经内科（南昌330006）；2广州医科大学中西结合研究所（广州510260）

急性缺血性脑卒中（AIS）是临床常见的神经系统急症。微小RNA（micro RNA，miRNA）是内源性的非编码调节RNA，能与靶基因的3'UTR 区结合，抑制靶基因的转录［1］。已有研究［2］表明miRNA可调控细胞的增殖、分化、凋亡等生理病理过程，并与缺血性脑血管疾病的发生、发展过程关系密切。小RNA-124（miR-124）是一种中枢神经系统特异性的miRNA［3］，相关临床［4-6］及动物［7-8］研究显示，在缺血性脑卒中后血浆miR-124 水平呈现动态变化，表现出成为缺血性卒中发病风险新的生物标志物的潜力。然而miR-124 与AIS 的关系及确切的作用机制尚未完全阐明。本研究旨在探索miR-124 在AIS 诊断及预后评估中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2016年2月至2017年10月，于南昌大学第一附属医院神经内科就诊AIS 患者40 例，男28 例，女12 例，平均年龄（65.03 ± 10.18）岁。对照组为无AIS 病史体检者，共40 例，男25例，女15 例，平均年龄（63.18 ± 8.16）岁。 两组患者的年龄、性别构成、高血压病、冠心病、糖尿病病史差异无统计学意义（P＞0.05）。纳入标准：2018中国急性缺血性脑卒中诊治指南诊断标准及MRI和（或）CT 结果确诊AIS。排除标准：合并脑出血者；合并严重的肝肾功能不全者；有严重的心、肺功能障碍；有恶性肿瘤、自身免疫性疾病。所有AIS 患者入选时均进行NIHSS 评分评价神经功能缺损症状，NIHSS≤5 提示轻度神经功能受损，NIHSS ＞5 提示中度及重度神经功能受损。进行MRI 弥散加权成像测定梗死体积，参考文献［9］将梗死面积＜3 cm3的纳入小面积梗死组，将梗死面积＞3 cm3的纳入大面积梗死组。

1.2 miRNA-124 相对定量检测AIS 入院后24 h内抽取静脉血5 mL，3 000 r/min 离心分离血浆。采用TRIzol 法提取血浆总RNA。采用Takara 公司的Mir-X miRNA 第一链合成试剂盒进行逆转录。采用Takara 公司的SYBR qRT-PCR 试剂盒检测miR-124 和U6 的表达。miR-124 上游引物：5'-CGT GTT CAC AGC GGA CCT TGA T-3'，下游引物为试剂盒提供的通用引物mRQ 3' Primer；U6 上游引物：5'-CTC GCT TCG GCA GCA CA-3'；下游引物：5'-CGC TTC ACG AAT TTG CGT GTC-3'。采用2-ΔΔCT法计算miRNA 的相对表达量。

1.3 统计学方法采用SPSS 16.0 进行统计学分析。计量资料以均数± 标准差表示，两组间比较用t检验。采用Pearson 相关分析对连续资料的变量间相关性进行分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AIS 患者血浆miR-124 水平降低AIS 患者血浆miR-124 水平检测结果见图1，与对照组比较，AIS 组患者的血浆miR-124 水平显著降低，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.001）。

图1 AIS 患者血浆miR-124 水平Fig.1 Plasma miR-124 levels in AIS patients

2.2 AIS 患者梗死区大小与miR-124 水平的相关性将AIS 患者分为梗死体积＞3 cm3和梗死体积＜3 cm3两个组，比较不同梗死程度AIS 患者的血浆miR-124 水平。结果如图2 所示，梗死体积＞3 cm3的AIS 患者的血浆miR-124 水平显著低于梗死体积＜3 cm3的AIS 患者，与梗死体积＜3 cm3组比较差异有统计学意义（t= 4.34，P＜0.001）。AIS患者的梗死体积与miR-124 水平的升高呈负相关（r=-0.473，P＜0.001）。

图2 AIS 患者梗死体积与miR-124 水平的关系Fig.2 The correlation between infarction volume and miR-124 level in AIS patients

2.3 AIS 患者血浆miR-124 与NIHSS 评分的相关性将AIS 患者根据NIHSS 评分分为NIHSS ＞5 和NIHSS ≤5两个组，比较不同神经损伤程度AIS患者的血浆miR-124 水平。结果如图3 所示，NIHSS ＞5的AIS患者的血浆miR-124水平显著低于NIHSS ≤5的AIS 患者，与NIHSS ≤5 组比较差异有统计学意义（t=3.24，P=0.002）。AIS 患者的NIHSS 评分与miR-124 水平的升高呈负相关（r=-0.567，P＜0.001）。

图3 AIS 患者NIHSS 评分与miR-124 水平的关系Fig.3 The correlation between NIHSS score and miR-124 level in AIS patients

3 讨论

AIS 已成为导致我国居民致死和致残的最重要的中枢神经系统血管事件［10］。近年来众多相关研究［11-12］显示，缺血性脑卒中后组织和血浆中的miRNAs 的表达谱发生显著变化。AIS 的发生及发展过程中，血浆miR-124 水平在不同时间点的变化尚存在争议［4-6，13］。有研究［14］发现缺血性卒中患者发病后血浆miR-124 水平显著升高，上升时间一般能够持续48 h。还有研究［4，6］发现在AIS 患者发病后24 h 内血浆miR-124 水平显著降低。本研究通过临床研究发现，AIS 患者发病后24 h 内血浆miR-124 水平显著降低，这与之前的研究［4，6］结果一致。本研究结果进一步丰富并完善了AIS 患者血浆miR-124 水平的变化特点，为miR-124 可用于AIS 患者的早期诊断提供了实验证据。

此外，在AIS 患者血浆miR-124 水平与脑梗死体积及神经功能缺损严重程度的相关性研究中亦存在争议，JI 等［5］研究发现，AIS 患者血浆miR-124水平与梗死体积及NIHSS 评分均呈正相关。而动物研究发现：在大脑中动脉闭塞小鼠模型中抑制miR-124 的表达显著增加模型小鼠的梗死体积［7］。大脑中动脉闭塞模型小鼠颅内注射miR-124 拟似物脂质体后，脑梗死面积显著减少，且具有保护及改善AIS 患者神经功能损伤的作用［15］。表明miR-124与脑梗死体积及NIHSS评分呈负相关。本研究发现AIS 患者的脑梗死体积及NIHSS 评分与miR-124 水平均呈负相关，结果与动物实验研究结果一致，提示miR-124 可作为评估AIS 患者脑梗死体积及神经功能损伤严重程度的潜在标志物。

综上，本研究从AIS 患者血浆niR-124 水平、梗死体积及神经功能损伤等方面，从临床角度为血浆miR-124 表达水平在评估AIS 患者病情严重程度及预测神经功能损伤中的应用提供了依据。本研究还存在以下不足：首先，本研究的样本量过小，NIHSS ＞15 分的仅有1 例，造成无法准确评估miR-124 在判断重度神经功能损伤中的意义。其次，未检测AIS 患者发病后多个时间点miR-124 的表达，无法观察miR-124 表达水平在AIS 患者中的演变规律。笔者将在未来研究中从这些方面继续探索血浆miR-124 在AIS 中的意义，为AIS 的临床治疗提供新的思路和依据。