冠心宁片对小剂量氯吡格雷抗血小板聚集增效的实验研究

王 奇

浙江省杭州市中医院 浙江 杭州 310007

冠心宁片是丹参和川芎两味中药配伍而成的丹参复方制剂，主治冠心病心绞痛（属中医学“胸痹”“心痛”范畴），其主要成分有丹酚酸B、阿魏酸、原儿茶醛、丹参素等。本研究初步探索了冠心宁片对小剂量氯吡格雷抗血小板的增强作用，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 药物及试剂：冠心宁片浸膏（正大青春宝药业有限公司）；阿司匹林（拜尔公司，H20110419）；氯吡格雷（赛诺菲公司，国药准字J20130083）；花生四烯酸（AA，美国sigma公司）；二磷酸腺苷（ADP，美国sigma公司）采用磷酸盐缓冲液配置成300µmol/L；P2Y12、CD62P及GPⅡb/Ⅲa试剂，美国BD公司。

1.2 主要仪器及实验动物：流式细胞仪（美国BD公司，FACSCanto）；酶标仪（赛默飞，Multiskan FC）。SD大鼠，400±20g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，动物合格证：SCXK(沪)2010-0015，分笼饲养，适应性喂养1周后进行实验。

1.3 实验分组与给药：取SD大鼠24只，随机分为4组各6只，空白对照组、冠心宁片组（生药0.5g/kg）、氯吡格雷（5mg/kg）组及联合治疗组（冠心宁生药0.5g/kg，氯吡格雷5mg/kg），雌雄各半。大鼠分别灌胃给药生理盐水、冠心宁片浸膏及氯吡格雷，给药体积为0.5ml/100g。连续给药7天。

1.4 血小板聚集率测定：末次给药60min后，腹腔注射2%的戊巴比妥钠0.2ml/100g麻醉，腹主动脉取血，采用3.8%的枸橼酸钠抗凝。然后抗凝全血首先1000rpm离心10min，制备富血小板血浆；剩余血浆再3000rpm离心15min，取上层清液即为贫血小板血浆，用贫血小板血浆调节富血小板血浆，配制血小板浓度为4.5×108个/ml的血小板悬浮液。在37℃恒温条件下孵育5min，加入ADP。采用血小板聚集仪测定血小板聚集率，并计算抑制率。抑制率=（对照组血小板聚集率-受试物处理组血小板聚集率）/对照组血小板聚集率×100%。

1.5 血小板内磷酸腺苷含量测定：取腹主动脉血，加入聚集诱导剂ADP诱导血小板聚集，5min后，加入10mM EDTA沸水浴5min终止反应。冷却后，4000rpm，离心10min，收集上清液。采用放射免疫法检测环磷酸腺苷（cAMP）含量。

2 结果

2.1 冠心宁片对小剂量氯吡格雷抗血小板聚集的影响：小剂量氯吡格雷对血小板聚集率无显著抑制作用，联合冠心宁片后能有效抑制血小板聚集，联合治疗组血小板聚集率显著低于小剂量氯吡格雷组（P＜0.05）。见表1。冠心宁片、氯吡格雷、冠心宁联合氯吡格雷对血小板聚集的抑制率分别为14.51%、14.91%和26.20%。

2.2 冠心宁片对小剂量氯吡格雷促血小板cAMP表达的影响：小剂量氯吡格雷对血小板内磷酸腺苷表达无促进作用，联合冠心宁片后能有效促进血小板内磷酸腺苷表达，联合治疗组血小板cAMP表达水平显著高于氯吡格雷组（P＜0.05）。见表1。

表1 各组血小板聚集率和cAMP表达比较（-x±s）

3 讨论

血小板的异常激活和聚集致血栓机制在心血管疾病的发病中具有重要地位，抗血小板药物的研发也成为了目前医药界研究的重点。氯吡格雷在急性冠状动脉综合征（ACS）和脑卒中患者的急救中发挥了重大作用，但是其存在口服起效较慢、基因多态性影响药物代谢等不足，另外还有出血、严重粒细胞减少、胃肠道反应等不良作用，不利于其临床进一步应用。本研究发现当小剂量的氯吡格雷联合冠心宁片使用后，能增强其对血小板聚集的影响，提高其对促血小板内磷酸腺苷表达的作用，我们认为在临床上冠心宁片与氯吡格雷联合使用或许能降低氯吡格雷的使用剂量，从而减轻氯吡格雷的毒副反应和患者的经济负担。