周氏烧烫伤膏对SD大鼠深Ⅱ度烫伤创面的修复作用研究*

2019-02-23袁宙新张晓芹刘忠达

浙江中医杂志 2019年2期

袁宙新张晓芹刘忠达

浙江省丽水市中医院浙江丽水 323000

烧烫伤是指因沸水、油、光、烈火、电、放射线或化学物质作用于人体而引起的损伤，是临床常见病和多发病，也是人们生活和工作中最常见的意外伤害之一[1]。临床上常采用抗生素和手术治疗烧烫伤，虽有一定的疗效，但患者常常出现创面收敛缓慢、耐药菌产生、肝肾功能损伤以及机体免疫功能降低等不良反应。由于烧烫伤破坏了皮肤的防御功能，并且大量的坏死组织和细胞在创面生成，容易滋生细菌，造成感染[2,3]。因此，能否及时有效的促进烫伤创面的修复，对于烧烫伤病人的恢复、避免伤口感染具有重要意义。周氏烧烫伤膏由鸡油、冬青叶、蜂蜡等药物组成，是民间中医祖传秘方，具有化腐生肌、抗菌、消炎、止痛、促进皮肤表皮细胞再生的功效。本研究采用大鼠深Ⅱ度烫伤模型，观察周氏烧烫伤膏对大鼠深Ⅱ度皮肤烫伤的皮肤修复作用，为促进周氏烧烫伤膏在临床应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物：SD大鼠，雄性，SPF级，昭衍（苏州）新药研究中心有限公司提供，实验动物生产许可证：SCXK（苏）2013-0003；实验动物合格证编号：NO.201721832。

1.2 实验试剂：周氏烧烫伤膏，棕黑色软膏，有芳香气味，白色软壳塑料管装，由丽水市中医院提供；湿润烧伤膏，浅棕色软膏，有麻油香气味，浅棕色软壳塑料管装，批号1702803A，汕头市美宝制药有限公司；0.9%氯化钠注射液，批号D17080204，贵州科伦药业有限公司；硫化钠，批号20110624，成都市科龙化工试剂厂；水合氯醛，批号20130513，成都市科龙化工试剂厂；透明硫酸纸，华东医药股份有限公司器材化剂分公司。

1.3 实验仪器：Sartorius BS100S型电子分析天平，北京赛多利斯天平有限公司产品；XK3124型电子秤；CAMRY EK 3252型电子秤，广东香山衡器集团股份有限公司生产；Canon 1XUS照相机；Motic显微数码摄像系统，厦门麦克澳迪实业有限公司产品。

1.4 模型的制备：SPF级SD大鼠45只，雄性，体重430～585g，适应性饲养后，背部脊柱两侧用10%硫化钠脱毛约6cm×8cm。第2天10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，将预先放入沸水中预热的50g砝码（直径2.0cm）压放在背部脱毛区8sec，每侧2个伤口，每只大鼠4个烫伤伤口，造模后大鼠单笼饲养。烫伤后2d，称体重，伤口拍照（置标尺），用于图像分析软件分析伤口面积，并用透明硫酸纸画出伤口创面，采用称重计算伤口面积（每只大鼠4个烫伤口数据合并计算，作为一个动物的数据）。

1.5 实验分组与给药：分组：根据体重和伤口面积大小，将烫伤大鼠分成3组，每组15只，分别为模型对照、阳性对照、周氏烧烫伤膏组（伤膏组）。给药：模型对照、阳性对照、伤膏组分别涂抹生理盐水、湿润烧伤膏、周氏烧烫伤膏；每天给药2次，间隔6h，给药前用生理盐水洗去残留药物，多少时间后再给药，连续13d。

1.6 大鼠烫伤组织创面愈合率：给药前和给药期间每3～4d，对伤口创面摄影，并用透明硫酸纸描记伤口创面轮廓，扫描，Motic软件下测量轮廓面积，透明硫酸纸称量纸裁剪后称重，采用称重计算伤口面积，计算伤口愈合率，伤口愈合率=(1-给药组伤口面积/模型组伤口面积)×100%。

1.7 HE染色：最后一次给药后第2天，麻醉处死大鼠，取伤口部位皮肤置福尔马林中固定，每组随机取2只大鼠伤口皮肤制作切片，HE染色，观察皮肤变化。

1.8 统计学方法：采用Excel软件进行处理，所有计量数据以-x±s表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 周氏烧烫伤膏对大鼠外观、行为活动、死亡数量的影响：各组大鼠烫伤后的连续4d，行为活动减弱，食欲下降，给药后期各组大鼠食欲逐渐恢复正常。各组在给药期间有大鼠死亡，见表1。

表1 各组连续给药大鼠死亡数量（只）

表2 周氏烧烫伤膏对大鼠体重的影响（-x±s，g)

2.2 周氏烧烫伤膏对大鼠体重的影响：大鼠造模后至连续给药3d，体重略有下降。3d后体重逐渐增加。与模型组比较，周氏烧烫伤膏组在给药的13d体重的明显增重（P＜0.05），其余各组大鼠体重未见明显差异。具体数据见表2。

2.3 周氏烧烫伤膏对大鼠伤口面积及愈合率的影响：大鼠皮肤烫伤后1d颜色灰白，肿胀，与正常皮肤分界清楚，之后坏死皮肤逐渐发黑，失水干燥、发硬，表面凹凸不平，坏死皮肤边缘翘起。实验过程中对翘起的死皮做清创处理，见创面呈粉红色，边缘有菲薄的新生上皮形成。同时伤口周围正常皮肤收缩，使伤口总面积逐渐缩小，各组创面表现基本类似。与模型组比较，周氏烧烫伤膏组创面有一定缩小趋势，愈合率增加，于连续给药10d时有统计意义。阳性对照组在给药10d和13d伤口面积也明显降低，愈合率明显提高，但无统计学意义。具体结果见表3～4、图1。

2.4 周氏烧烫伤膏对大鼠伤口轮廓面积的影响：对描记伤口轮廓的半透明称量纸进行扫描，Motic软件下测量轮廓面积，和模型组相比，连续给药时间10天，周氏烧烫伤膏组面积明显减小。具体数据见表5。

表3 周氏烧烫伤膏对大鼠伤口面积的影响(-x±s，cm2)

表4 周氏烧烫伤膏对大鼠伤口愈合率的影响（-x±s，%）

表5 周氏烧烫伤膏对大鼠伤口轮廓面积的影响（-x±s，cm2）

图1 各组大鼠烫伤创面给药前后创面图

2.4 周氏烧烫伤膏对大鼠皮肤组织病理学的的影响：连续给药13d，烫伤大鼠模型对照组镜下检查发现上皮细胞缺失，表皮及真皮大量细胞变性、坏死，炎症细胞浸润，细胞间出现空泡，未见毛囊、皮脂腺等附属结构；周氏烧烫伤膏组上皮细胞基本分化完全，细胞层次清晰，炎症细胞浸润显著减轻，可见附属结构和肉芽组织，可见新生血管，大量纤维增生；阳性组炎症细胞浸润显著减轻，增生的纤维组织，排列整齐（图2）。

图2 连续给药13天的大鼠烫伤创面病理图

3 讨论

周氏烧烫伤膏的组成，主要有鸡油、冬青叶、蜂蜡等成分，其中鸡油由鸡腹内的脂肪炼制而成，其营养物质主要为蛋白质和脂肪，缺乏钙、铁、胡萝卜素等微量元素，鸡油有良好的润滑、保湿、保护皮肤黏膜的作用，因此在周氏烧烫伤膏中鸡油为主要成分；冬青叶又名四季青叶，《本草图经》载：“烧灰，面膏涂之，治皲瘃殊效，兼灭瘢疵。”药理研究表明，其主要含有原儿茶酸、挥发油、黄酮类成分，对于烫伤和溃疡久不愈合等疾病具有良好效果，故用在组方中可以协助增加皮肤的愈合。蜂蜡是由蜂群内适龄工蜂腹部的4对蜡腺分泌出来的一种脂肪性物质，含有丰富的游离脂肪酸和维生素A等成分，中医学认为其具有收涩敛疮，生肌止痛的功效，对皮肤溃疡有良好的治疗作用，是广泛应用于化妆品中的基质，在周氏烧烫伤膏既是良好的基质，又是良好的皮肤保湿剂。本实验结果表明，周氏烧烫伤膏具有较好的皮肤修复作用，可供临床借鉴应用。