甘遂的化学成分研究

董乐乐，姚鸿萍，张国刚，王新鹏，牛 壮，冀 彬，雒 磊，贺银丽

(西安交通大学第一附属医院药学部，西安 710061)

大戟属(Euphorbia)植物归属大戟科(Euphorbiaceae)大戟族(Trib.Euphorbieae)，本科植物分布于世界各地，主产于中南美洲和非洲地区的亚热带和温带。本科不同属不同种类中，叶子和根茎都可作为药材使用。本属植物种类繁多、生活环境复杂且存在较大变异性，是该科植物中最难分类的属之一，约2 000余种，有60余种分布于我国境内。甘遂(Euphorbiakansui)是大戟属中相对常见的中草药，也是具有中国特色的道地药材[1]，多年生草本，主要生长于我国陕甘宁晋豫等地的低山坡、荒坡和沙地路旁，目前已由人工种植。对于该植物化学成分的探索，最早可追溯到日本学者于20世纪40年代的研究[2]。甘遂是大寒之物，有毒，对皮肤具有刺激性，对肝肾和胃肠道有一定的毒性[3-5]；通过中药炮制的方法可达到增效减毒的效果[6]，具有通大小便、泻下、祛除体内湿气和缓解腹部胀闷疼痛不适等功能；临床上一般用其治疗胸腔积液、水肿和肝硬化腹水，也可用于治疗咳喘和肿瘤等症状[7-8]。本实验对甘遂的化学成分进行了分离鉴别，从其根部乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到9个化合物，用现代波谱方法鉴定其结构。

1 仪器与试药

1.1仪器 INOVA-600型、mercury 300BB型核磁共振波谱仪(美国 Varian公司)；AVANCE Ⅲ-400型核磁共振波谱仪(美国 Bruker公司)；Taisite X-4型数字显微熔点仪(天津泰斯特仪器有限公司)。

1.2试药 柱层析硅胶和薄层色谱硅胶(青岛海洋化工厂)；葡聚糖凝胶Sephadex LH-20(瑞典Amersham公司)；所用溶剂均经过重蒸后再使用；甘遂根(25 kg)在河北省安国中药材市场购买，由兰州大学药学院李建银博士鉴定为大戟属植物甘遂(Euphorbiakansui)的根块，标本目前存放于该学院天然药物实验室。

2 提取与分离

将甘遂根(25 kg)在常温下浸泡于乙醇中提取，每次浸泡时间为1周，共浸泡4次，将每次所得乙醇粗提物收集并加热挥干，称定质量为470 g。将其悬浮于1.5 L蒸馏水中，分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取3次，得到乙酸乙酯部分浸膏324 g，以石油醚-丙酮(40∶1，20∶1，10∶1，5∶1，2∶1和1∶1)作为柱层析色谱的洗脱剂进行梯度洗脱，以薄层色谱显示对比的结果为依据合并相似成分，共得到6个部分(以A～F标注)。

A(石油醚-丙酮=40∶1和20∶1，18 g)部分，用石油醚-乙酸乙酯(40∶1，20∶1，10∶1，5∶1和2∶1)梯度洗脱，所得样品通过薄层色谱实验合并相似成分，再依次选择体系进行纯化，得到化合物1(22 mg)和化合物7(8 mg)。B(石油醚-丙酮=20∶1和10∶1，21.8 g)部分，通过薄层色谱实验合并，再经过硅胶柱层析分离和石油醚-丙酮(5∶1)体系PTLC纯化和葡聚糖凝胶Sephadex LH-20(氯仿∶甲醇=2∶3)进一步纯化得到化合物2(28 mg)和化合物6(5 mg)。C(石油醚-丙酮=10∶1和5∶1，41 g)部分，用石油醚-乙酸乙酯(20∶1，10∶1，5∶1，2∶1和1∶1)梯度洗脱，从本样品中分离得到化合物8。其余部分(20 g)先用氯仿-丙酮(80∶1，40∶1，20∶1，10∶1和5∶1)梯度洗脱，再使用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20(氯仿∶甲醇=2∶3)对硅胶柱色谱不易分离的部分进行再次分离，最后将所得筛选部分(2.8 mg)用氯仿-丙酮(40∶1)为洗脱剂制备薄层色谱纯化，得到化合物3(4 mg)和化合物4(3 mg)。D(石油醚-丙酮=5∶1和2∶1，35 g)部分用氯仿-丙酮(80∶1，40∶1，20∶1，10∶1和5∶1)梯度洗脱，合并相似成分，分离后将得到的晶体部分重结晶，再使用葡聚糖凝胶(氯仿∶甲醇=2∶3)进一步分离纯化，从此部分中分离出化合物5(28 mg)。E(石油醚-丙酮=2∶1和1∶1，18 g)部分经进一步分离，未得到单体化合物。F(石油醚-丙酮=1∶1和甲醇，32 g)部分用氯仿-甲醇(40∶1，20∶1，10∶1和5∶1)梯度洗脱，合并相似成分，得到不溶于石油醚、氯仿、丙酮和甲醇等有机溶剂的白色无定形粉末，为化合物9。

3 结构鉴定

3.1化合物1白色针状结晶；mp 116～118 ℃；1H-NMR (400 MHz，CDCl3):δH3.25 (1H，m，H-3)，0.82(3H，s，H-18)，0.77(3H，s，H-19)，0.86(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.09(1H，t，J=6.4 Hz，H-24)，1.61(3H，s，H-26)，1.68(3H，s，H-27)，0.90(3H，s，H-28)，0.96(3H，s，H-29)，0.85(3H，s，H-30)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3):δC35.0(C-1)，27.7(C-2)，78.6(C-3)，38.6(C-4)，50.5(C-5)，18.7(C-6)，27.5(C-7)，133.5(C-8)，133.1(C-9)，37.0(C-10)，21.2(C-11)，30.4(C-12)，43.7(13)，49.5(C-14)，29.5(C-15)，27.8(C-16)，49.7 (C-17)，15.2(C-18)，20.0(C-19)，36.0(C-20)，18.7 (C-21)，36.2(C-22)，24.6(C-23)，124.6(C-24)，130.2 (C-25)，17.6(C-26)，25.5(C-27)，27.8(C-28)，15.5 (C-29)，24.1(C-30)。将该化合物的波谱数据与文献[9]对照，确定化合物1为大戟二烯醇(euphol)。

3.2化合物2白色块状固体；1H-NMR(400 MHz，CDCl3)：δH1.65(1H，m，H-1α)，0.91(1H，m，H-1β)，1.57 (2H，m，H-2)，3.17(1H，dd，J=4.8，10.8 Hz，H-3)，0.71(1H，d，J=10.8 Hz，H-5)，1.44 (2H，m，H-6)，1.64(1H，m，H-7α)，1.31(1H，m，H-7β)，1.70(1H，m，H-8)，1.30(1H，m，H-9)，1.48(1H，m，H-11α)，1.24(H，m，H-11β)，1.24(1H，m，H-12α)，1.55(1H，m，H-12β)，1.45(1H，m，H-15α)，1.05(1H，m，H-15β)，1.86(1H，m，H-16α)，1.24(1H，m，H-16β)，1.73(1H，m，H-17)，0.94(3H，s，H-18)，0.82(3H，s，H-19)，1.11(3H，s，H-21)，1.54(1H，m，H-22)，2.08(2H，m，H-23)，2.22(1H，m，H-25)，1.03(6H，d，J=6.4 Hz，H-26和H-27)，0.95(3H，s，H-28)，0.74(3H，s，H-29)，0.86(3H，s，H-30)，4.76和4.69(2H，s，H-31)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3):δC39.2(C-1)，27.3(C-2)，77.4(C-3)，39.2(C-4)，52.2(C-5)，18.3(C-6)，25.1(C-7)，43.3(C-8)，50.4(C-9)，36.5(C-10)，21.7(C-11)，32.8(C-12)，49.8(C-13)，39.3(C-14)，31.0(C-15)，27.2(C-16)，48.9(C-17)，17.7(C-18)，15.1(C-19)，76.5(C-20)，23.5(C-21)，40.5(C-22)，28.1(C-23)，156.9(C-24)，34.8(C-25)，21.9(C-26)，22.0(C-27)，28.1(C-28)，15.5(C-29)，15.7(C-30)，105.9(C-31)。通过与已发表文献[10]对照该化合物的1H-NMR，13C-NMR和DEPT谱数据，确定化合物2为euphane-3β，20-dihydroxy-24-ene。

3.3化合物3白色针状晶体；mp 205～206 ℃；1H-NMR (400 MHz，CDCl3):δH3.60(H，m，H-3)，5.61(H，brs，H-6)，3.86(H，brd，J=7.6 Hz，H-7)，0.68(3H，s，H-18)，0.80(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.84(3H，t，J=8.0 Hz，H-29)0.92(3H，d，J=6.4 Hz，H-21)，1.06(3H，s，H-19)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3):δC37.0(C-1)，31.6(C-2)，71.5(C-3)，41.7 (C-4)，143.5(C-5)，125.5(C-6)，73.4(C-7)，40.9(C-8)，48.3(C-9)，36.5(C-10)，21.1(C-11)，39.6(C-12)，43.0(C-13)，55.4(C-14)，26.4(C-15)，28.6(C-16)，56.0(C-17)，11.8(C-18)，19.2(C-19)，36.1(C-20)，18.9(C-21)，34.0(C-22)，26.1(C-23)，45.9(C-24)，29.2(C-25)，19.0(C-26)，19.8(C-27)，23.1(C-28)，12.0(C-29)。将该化合物的1H-NMR和13C-NMR数据与文献[11]对照，从而确定化合物3为stigmast-5-ene-3β，7β-diol。

3.4化合物4白色针状晶体；mp 210～211 ℃；1H-NMR (400 MHz，CDCl3):δH 3.59(H，m，H-3)，5.61(H，dd，J=4.2，1.6 Hz，H-6)，3.85(H，brd，J=7.6，H-7)，0.69(3H，s，H-18)，0.81(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.84(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.86(3H，t，J=8.0 Hz，H-29)0.93(3H，d，J=6.4 Hz，H-21)，1.00(3H，s，H-19)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3):δC 37.0(C-1)，31.6(C-2)，71.3(C-3)，41.7(C-4)，146.2(C-5)，123.8(C-6)，65.4(C-7)，40.9(C-8)，48.3(C-9)，36.5(C-10)，21.1 (C-11)，39.6(C-12)，43.0(C-13)，55.4(C-14)，26.4 (C-15)，28.6(C-16)，56.0(C-17)，11.8(C-18)，19.2 (C-19)，36.1(C-20)，18.9(C-21)，34.0(C-22)，26.1 (C-23)，45.9(C-24)，29.2(C-25)，19.0(C-26)，19.8 (C-27)，23.1(C-28)，12.0(C-29)。1H-NMR中δH 3.86 (1H，d，J=7.8 Hz)处的氢质子发生裂分，说明H-7与Me-19之间存在高烯丙型偶合，则H-7是β-构型，7-OH为α-构型，这是与其同分异构体化合物3的不同之处。通过与已发表文献[11]对照该化合物的1H-NMR和13C-NMR谱数据，从而确定化合物4为stigmast-5-ene-3β，7α-diol。

3.5化合物5无色针状晶体；1H-NMR(400 MHz，C5D5N)：δH6.28(H，d，J=8.4 Hz，H-2)，7.66(H，d，J=8.4 Hz，H-3)，7.09(H，s，H-5)，7.01(H，s，H-8)，3.74(3H，s，MeO-7)；13C-NMR(100 MHz，C5D5N):δC 161.8(C-1)，113.8(C-2)，143.6(C-3)，108.0(C-4)，150.1(C-5)，150.7(C-6)，103.6(C-7)，144.4(C-8)，111.9(C-9)，56.8(C-10)。将该化合物的1H-NMR和13C-NMR数据与文献[12]对照，从而确定化合物5为异东莨菪素(isoscopletin)。

3.6化合物6白色无定形粉末；mp 81～83 ℃；1H-NMR (300 MHz，CDCl3):δH7.60(1H，d，J=15.9 Hz，H-7)，7.04(1H，dd，J=7.8，1.5 Hz，H-6)，6.93(1H，d，J=1.5 Hz，H-2)，6.90(1H，d，J=7.2 Hz，H-5)，6.32(1H，d，J=15.9 Hz，H-8)，5.84(1H，s，OH-4)，4.18(2H，t，J=6.6 Hz，OCH2-1′)，3.93(3H，s，OCH3-3)，1.25(50H，brs，H-2′-27′)，0.88(3H，t，J=5.4 Hz，H-28′)；13C-NMR(75 MHz，CDCl3):δC127.0(C-1)，109.3(C-2)，146.7(C-3)，147.9(C-4)，114.7(C-5)，123.0(C-6)，144.6(C-7)，115.7(C-8)，174.3(C-9)，70.2(OMe-4)，63.3(C-1′)，34.1(C-2′)，31.9(C-3′)，28.7-29.6(C-4′-25′)，25.9(C-26′)，24.9(C-27′)，14.0(C-28′)。将该化合物的波谱数据与文献[13]对照，从而确定化合物6为阿魏酸二十八醇酯(octacosyl ferulate)。

3.7化合物7无色片状结晶；mp 38～40 ℃；1H-NMR (400 MHz，CDCl3)：δH5.36(4H，m，H-9，10，12，13)，2.76(2H，dd，J=6.4 Hz，H-11)，2.35(2H，t，J=7.2 Hz，H-2)，2.04(4H，dt，J=6.4，6.4 Hz，H-8，14)，1.66(2H，m，H-3)，1.26～1.32(14H，m，H-4，5，6，7，15，16，17)，0.88 (3H，t，J=6.4 Hz，H-18)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3):δC 179.2(C-1)，130.3(C-9)，127.5(C-10)，128.1(C-12)，130.1(C-13)，22.5-31.8(C-2～C-8，C-11，C-14～C-17)，14.1(C-18)。通过与已发表文献[14]对照该化合物的1H-NMR和13C-NMR谱数据，从而确定化合物7为亚油酸(linoleic acid)。

3.8化合物8无色针状晶体；mp 137～139 ℃；1H-NMR (400 MHz，CDCl3):δH5.35(1H，d，J=4.0 Hz，H-6)，3.52(1H，m，H-3)，1.01(3H，s，H-19)，0.94(3H，d，J=6.0 Hz，H-21)，0.86(3H，m，H-29)，0.82(3H，d，J=7.4 Hz，H-26)，0.78(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.68 (3H，s，H-18)。通过与已发表文献[15]对照该化合物的1H-NMR和13C-NMR谱数据，从而确定化合物7为β-谷甾醇(sitosterol)。

3.9化合物9白色无定形粉末；mp 291～292 ℃。难溶于石油醚、氯仿、丙酮和甲醇等有机溶剂，易溶于吡啶。在紫外光灯254 nm处显示无荧光，并用质量分数为5%硫酸-乙醇显色液显示为明显的紫红色。将该粉末与已知对照品在3种不同溶剂不同比例的展开剂中分别进行TLC对比，其Rf值均相同，确定该化合物为β-胡萝卜苷 (daucosterol)[16]。

4 讨论

目前从大戟属植物甘遂中分离得到的主要化学成分为三萜类、二萜类和甾体类化合物，其他成分包括香豆素、脂肪酸、蔗糖、鞣质、棕榈酸和树脂等[17]。本实验对甘遂的化学成分进行分离鉴定，从根部分离得到9个化合物，其中化合物stigmast-5-ene-3β，7β-diol和stigmast-5-ene-3β，7α-diol为首次从甘遂中分离得到，二者属同分异构体。本实验的研究丰富了甘遂的化学结构类型，为大戟属植物的深度研究开发提供了更多依据。