浅析生鲜乳中黄曲霉毒素M1

2019-02-21左英芳

新农民 2019年1期

关键词：金标胶体金黄曲霉

左英芳

（焦作市畜产品质量安全监测中心，河南焦作 454003）

1 药物概述

黄曲霉毒素是黄曲霉菌属黄曲霉菌、寄生曲霉菌产生的有毒次级代谢物，黄曲霉毒素不仅是一种化合物，也是一组化学结构类似的化合物总称。黄曲霉毒素M1（AFM1）主要由黄曲霉毒素B1（AFB1）代谢产生，其基本结构为一个二呋喃环的氧杂萘邻酮。

2 黄曲霉毒素M1理化性质

AFM1不溶于正己烷、石油醚和乙醚，易溶于甲醇、和氯仿等。耐热性强，280℃时才能发生裂解，因此一般烹调加工温度下破坏很少，但某些化学试剂如 5%次氯酸钠和丙酮可使其完全分解，因此在实验室中用此方法对接触过的器皿作解毒处理。AFM1在紫外线下不稳定，容易分解，故也可采取紫外线照射法使之分解。

AFM1一般在中性溶液中较稳定，但易被碱性溶液及强氧化剂分解，在pH9-10的强碱溶液中分解迅速为无毒的盐，但此反应可逆，即在酸性条件下又能恢复原来结构。其纯品为无色结晶体。

3 黄曲霉毒素M1的主要来源

在黄曲霉毒素的几种亚型（B1、B2、G1、G2、M1、M2）中，黄曲霉毒素B1（AFB1）最为多见，毒性也最强。哺乳类动物通过摄入被AFB1和AFB2污染的饲料或食品后，在体内约有l%～6%的AFB1通过羟基化作用，转化成AFM1和黄曲霉毒素M2（AFM2），一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳、肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中AFM1与AFM2主要存在于牛奶中。由于牛乳及其制品是人类、特别是婴幼儿的主要食品，所以被AFM1污染的牛乳及其制品危害性更大。

4 黄曲霉毒素M1的主要危害

黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素，AF分子中的二呋喃环是产生毒性的重要结构基础，而香豆素可能与致癌作用有关。

1993年，黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质，其毒性相当于砒霜的68倍，氰化钾的10倍。黄曲霉毒素具有极强的强致突变性、致畸形、致癌性“三致”作用，长期摄入可诱发肝癌，是目前公认的最强致癌性物质。故各国对乳及乳制品中的AFM1做了及其严格的限定。目前，世界多数采取两种限量，即0.05µg/kg和0.5µg/kg。中国与美国、日本一致，均为0.5µg/kg，欧盟成员国相对严格为0.05µg/kg，而欧盟对婴幼儿配方食品及配方牛奶则限量0.025µg/kg。

5 黄曲霉毒素M1的检测方法

生鲜乳中对AFM1的检测主要是通过胶体金试纸条快速检测法、酶联免疫法、薄层色谱分析法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、和液相色谱-质谱法（LC-MS）对其进行定性定量分析。

5.1 胶体金试纸条快速检测法

应用竞争法胶体金免疫层析技术，用于乳及乳制品的AFM1快速筛查。样液中的AFM1与金标抗体结合形成复合物，若AFM1在样液中浓度低于设定检测限，未结合的金标抗体流到T区时，形成一条可见的T线。若AFM1浓度高于设定检测限，金标抗体即与AFM1形成复合物，不再与T线处抗原结合，T线不可见。C线为质控线，出现则说明该卡有效。此方法方便快捷，成本低，适用于大批量筛查。缺点为：本法仅可做为初步筛查结果参考，且有假阳性存在，不可用做定性定量手段。

5.2 酶联免疫吸附法

原理是样品中的AFM1与酶标板上固定的抗原特异性竞争抗体，在固相载体表面形成抗原抗体复合物。洗除多余抗体成分，加入酶标抗与抗体反应，通过酶催化显色剂显色，根据显色的深来判断样品中AFM1的含量。ELISA具有快速、灵敏、特异性强、成本低等特点，适合于AFM1大批样品的检测筛选，可用于现场检测。缺点为：由于免疫酶的活性不稳定，易受操作条件的干扰，影响结果的准确性。

5.3 薄层色谱分析法

该法是通过肉眼进行定性和半定量的检测方法。其原理是经提取、浓缩、薄层分离后，AFM1在一定波长的紫外光下产生蓝紫色荧光，依据在薄层板上的最低检出量来测定含量。其具有成本低、杂质干扰小、易普及等优点，曾广泛应用于基层筛查。但操作过程中，检验员接触大量的标准品及有毒有害试剂，对实验人员的危害性极大，且灵敏度较低。

5.4 高效液相色谱法

将试样经过离心、脱脂、过滤后，经免疫亲和柱层析净化除去其他杂质，再洗脱下AFM1，配以荧光检测器的HPLC法已经成为检测AFM1的主要测定方法，此法具有特异性高、灵敏度强、定量准确同时分离多种黄曲霉素的优点，而且不受样品的沸点、热稳定性和分子量等的限制。缺点为：前处理复杂，需要专业的技术人员，费用高。