真菌感染性疾病的检验方法与鉴定

容富强

（广东省江门市新会区皮肤医院检验科，广东 江门 529100）

真菌主要是真核细胞型的微生物，在临床上的真菌感染的病原菌可分为条件致病性真菌、病原性真菌、致癌真菌以及产毒型真菌等[1]。近年来，实验室检验常见以条件致病性真菌导致感染[2]。此类感染症状主要与抗生素、激素以及免疫抑制剂的滥用、自身机体免疫缺陷存在相关性。本文主要探讨关于对真菌感染性疾病的检验方法及鉴定情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本院2017年9月-2018年9月间收治的200例真菌感染性疾病患者作为研究对象，包括由各种标本培养分离得出的真菌200株。纳入对象包括男性124例、女性76例，患者年龄13岁-82岁，平均（62.4±6.3）岁。纳入样本包括痰液样本142例、尿液样本30例、粪便样本5例、血液样本15例以及其他样本8例。患者对研究均知情同意，研究经伦理委员会审批。

1.2 方法 通过无菌采集样本，对采集处进行局部消毒与处理，将采集到的样本置于无菌容器中并立即送检。要求对于不同的真菌感染进行不同部位样本采集。对怀疑深部真菌感染患者的血液、痰液、脑脊液以及脓液等应及时进行样本采集；对于浅部感染如表皮真菌感染、体癣等，则应刮取病变边缘处的痂或皮屑等进行检查；头癣则应采集病变的发根等进行检查。对于活组织检查的部分样品需采集双份，将其中获得的一份进行病理组织检查，另一份进行真菌培养检查，其中，真菌培养检查主要采用直接镜检、培养检查以及免疫学检查方法进行检查。各检查方法均按照规范操作，对化学免疫分析仪及检验试剂盒等仪器依据使用说明书操作步骤进行，做好样本的检测记录，综合分析检验的结果。

1.3 统计学方法 采用统计软件SPSS 19.0进行分析。计数资料采用率表示。

2 结果

200例患者检出白色念珠茵134例（67.00%）、热带念珠茵30例（15.00%）、光滑念珠茵24例（12.00%）、近平滑念珠菌7例（3.5%）、葡萄牙念珠茵5例（2.5%）。

3 讨论

真菌感染主要指致病性的真菌侵入到粘膜、皮肤、肌肉以及内脏等人体表层以下组织所引起的感染症状[3]。真菌感染可局限在机体内的某一脏器组织中，也可播散至全身。对于病原性的真菌主要包括浅部感染真菌以及深部感染真菌两种，其中浅部感染真菌主要为皮肤丝状菌，深部感染真菌主要为白假丝酵母菌以及新型隐球菌等。深部致病性真菌在正常的人体内不存在，此类真菌一旦侵入人体即可致病，此类真菌常见有球孢子菌、组织胞浆菌以及芽生菌等。而条件致病性真菌则是属于人体的正常菌群之一，当机体的抵抗力下降时可致病，此类真菌常见如白念珠菌、新型隐球菌以及曲霉菌等。

在临床上，对于感染性真菌的实验室检验主要步骤包括样本采集、检验程序以及方法，对于检验的方法常用有直接镜检、培养检查、免疫学检查等：（1）直接镜检是最为简单且重要的一种检验方法。对于疑似浅部真菌感染的部分病变样本（皮屑、甲屑、毛发）等的检测中，将其置于玻片上并滴加浓度10%的氢氧化钾溶液覆盖玻片，通过微加热熔化样本的角质层使组织透明化，并置于显微镜下进行观察。通过镜检可观察到皮屑、甲屑中存在真菌的菌丝，在毛发内、外部可观察到成串的孢子，出现上述情况的样本可初步诊断癣菌感染。对于深部感染的真菌标本（痰液、脑脊液），涂片通过革兰染色可对真菌的形态特征进行观察并准确查出感染的种类。深部感染涂片常用染色方法除了革兰染色，还包括瑞氏染色、乳酸酚棉蓝染色以及荧光染色等。（2）培养检查中，常用葡萄糖蛋白胨琼脂培养基进行培养，对于深部真菌可采用血琼脂或采用脑心浸液葡萄糖血琼脂，于37oC下进行培养。根据不同菌种的可运用不同的培养基培养。在培养检查中对细菌生长进行有效抑制，可于培养基中加入抗生素进行处理。培养方法常用有大试管培养法、平皿培养法以及玻片培养法等，多数的真菌培养温度可选择28oC，对于深部真菌则应选择37oC进行培养。该检查方法对于菌种鉴定需通过鉴别培养基结合分子生物学或生化反应等鉴定。（3）免疫学试验是在近年来兴起的一种用以对深部感染真菌抗体检测的方法，可辅助诊断假丝酵母菌、荚膜组织胞浆菌以及曲霉菌等。但由于系统性感染的患者常出现免疫功能下降导致检测不出抗体，多数真菌间的抗原性存在交叉反应，且在正常人群中存在一定比例的检测阳性率，因此免疫学试验结果需结合临床实际情况进行诊断。通过免疫学可检测血清以及其他部位的真菌抗原，因此对于真菌感染的早期诊断中具有一定的价值。

对于真菌感染性疾病的检验中，通过直接镜检、培养检查、免疫学检查等方法，可对临床真菌感染患者的菌种进行有效检出，而通过对真菌感染性疾病进行真菌检验与鉴定，可减少或避免临床滥用抗生素的现象，该检测方法具有重要的临床价值。