骨髓增殖性肿瘤病人外周血中细胞因子水平的表达及其意义

徐海涛,姚福生

骨髓增殖性肿瘤(MPN) 中最常见的4种亚型分别是慢性粒细胞白血病(CML)、真性红细胞增多症(PV) 、原发性血小板增多症(ET) 和原发性骨髓纤维化(PMF)。细胞因子是一类可溶性蛋白质，在许多生物过程中发挥重要的调节作用[1]。已有研究表明，一些异常细胞因子的产生以及部分细胞因子水平的失调，参与许多疾病包括肿瘤的发生和发展[2]。国外有一些研究发现部分细胞因子水平在MPN 病人中同样出现失调[3-4]。但国内MPN病人细胞因子水平情况报道较少。本文拟对MPN病人外周血细胞因子水平进行检测，并对其在MPN发病机制中的作用进行初步探讨。

1 资料与方法

1.1一般资料收集2013年5月至2017年2月安庆市立医院血液科收治的68例骨髓增殖性肿瘤(MPN)病人作为研究对象，其中男性37例，女性31例，年龄(51±6)岁，年龄范围为14～79岁。按照世界卫生组织的诊断标准[5]，其中PMF组11 例，PV组22例，ET组16例，CML组19例；另选择同期院内体检健康职工20例为对照组，其中男性11例，女性9例，年龄(47±5)岁，年龄范围为27～76岁。排除标准：(1)合并感染的病人；(2)免疫缺陷或免疫抑制的病人。本研究获安庆市立医院伦理委员会批准，病人或近亲属对研究方案均签署知情同意书。

1.2标本采集收集病人和健康体检者空腹静脉血4 mL，检测细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-2R、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及IL-10等。

1.3细胞因子水平的检测细胞因子IL-1β、IL-2R、IL-6、IL-8、TNF-α及IL-10均采用免疫荧光法进行检测，试剂由美国luminex公司提供。由安庆市立医院免疫实验室于采血当日进行检测。

2 结果

2.1外周血细胞因子水平的比较PMF组中，IL-2R、IL-6、IL-8及IL-10平均值较对照组明显升高，差异有统计学意义(P=0.001、0.021、0.031、0.026)；PV组中，IL-2R及IL-8平均值较对照组明显升高(P=0.012、0.046)，其余细胞因子差异无统计学意义(P>0.05)；ET组中，IL-2R及IL-8平均值较对照组明显升高(P=0.026、0.017)，其余细胞因子差异无统计学意义(P>0.05)；CML组中，IL-2R、IL-6及IL-8平均值较对照组明显升高(P=0.031、0.026、0.019)，其余细胞因子差异无统计学意义(P>0.05)。与ET和PV相比，PMF病人表现出更高的IL-2R、IL-6和IL-10浓度。与ET和PV相比，CML病人IL-6的浓度也更高。与CML相比，PMF病人表现出更高浓度的IL-2R，具体数据见表1。

2.2MPN各亚组间IL水平与临床特征的关系检测了MPN各亚组间年龄、性别、白细胞计数(WBC)、血红蛋白(HGB)、血小板计数(PLT)、乳酸脱氢酶(LDH)、脾大、红细胞输注次数、JAK2V617突变与不同IL水平之间的相关性，结果发现，MPN各亚组间年龄、性别、脾大、LDH与不同IL水平间均无相关性；PV组IL-2R与HGB呈正相关；ET组IL2-R与WBC、PLT均呈正相关；PMF组IL-2R与WBC、红细胞输注次数及JAK2V617突变均呈正相关。

3 讨论

MPN是获得性造血干细胞发生变化导致外周血细胞(包括红细胞，白细胞或血小板)产生失调的血液病[6]。现已证实JAK2V617F基因突变是MPN发病的一个主要机制[7]。Janus激酶/信号转导与转录激活子(JAK/STAT)信号通路的活化与MPN发生密切相关，而JAK/STAT信号通路是细胞因子信号通路的主要介导者[8]，因此，细胞因子与MPN同样密切相关。但国内相关研究报道较少。虽然细胞因子水平有显著的异质性，但本研究表明：MPN病人中，IL-2R及IL-8水平较对照组明显升高。此外，不同MPN各亚组间细胞因子水平也明显不同：与ET组和PV组相比，PMF组病人表现出更高的IL-2R、IL-6和IL-10浓度，CML病人IL-6的浓度也更高。IL-2R与MPN各亚组的临床特征相关：PV组IL-2R与HGB呈正相关，ET组IL-2R与WBC、PLT均呈正相关，PMF组IL-2R与WBC、红细胞输注次数及JAK2V617突变均呈正相关。

表1 初诊MPN病人与对照组外周血细胞因子浓度比较

注：两两比较为LSD-t检验，a、b、c、d分别为和对照组、PMF组、PV组、ET组比较，P<0.05

Tefferi等[4]对127例PMF的外周血细胞因子进行测定，结果发现：IL-2R、IL-6、IL-8及IL-10的浓度较健康对照组明显升高，这与我们的研究一致，但IL-1β及TNF-α的浓度较对照组也显著升高。同时，他们研究还发现，IL-2R及IL-8与较短的生存期相关。并且IL-8 与PMF的全身症状有关，IL-12和IL-2R浓度的升高提示需要输注红细胞，IL-8与IL-2R水平的升高与白细胞增多密切相关。Pourcelot等[3]对17例PV和21例ET的细胞因子进行检测发现，除IL-1β外，IL-4、IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α的浓度均明显升高；PV组与ET组相比，ET组IL-8明显升高，IL-6、IL-10及TNF-α两组间差异无统计学意义。Pardanani等[9]对PMF病人的外周血细胞因子及相关临床特征进行研究，结果表明 IL-2R及IL-8与较短的生存周期及白血病转化有关，而且IL-8 可能通过新生血管形成促使肿瘤微环境的形成。

国外已有研究证实，JAK2V617突变几乎在所有的PV以及55%～65%ET或PMF中都有表达。 在JAK2V617F的已知下游效应物中，STAT5转录因子在MPN的发病中起关键作用。当STAT5转录靶标出现失调时，MPN就处于疾病活化状态。与STAT5在MPN病理生理学中的重要作用一致，JAK2V617F表达无法在STAT 5a/b缺陷小鼠中产生疾病[10]。在JAK2V617表达的MPN小鼠模型中，STAT3的缺失，导致小鼠的临床症状加重[11]，生存期缩短[12]。此外，STAT3通过激活JAK途径，还激活IL-6及IL-10等细胞因子参与MPN的发生、发展[13]。

综上所述，MPN病人中细胞因子的表达出现失调，不同MPN亚组间各种细胞因子的表达水平也不尽相同，但MPN各亚型的IL-2R及IL-8水平较对照组均明显升高，并且细胞因子水平与MPN临床特征存在一定的相关性，细胞因子介导的JAK/STAT信号通路的持续激活可能是导致MPN 发生、发展的重要因素。但由于我们的病例数较少，因此还需进一步研究。