马龙某鹅场大肠杆菌药敏实验

赵兴付

（云南省曲靖市马龙区大庄乡人民政府，云南曲靖 655199）

1 材料与方法

1.1 实验时间、地点

本实验于2016年7月至12月在云南农业大学动物科学学院动物病理学实验室进行。

1.2 实验材料

1.2.1 病料来源

马龙某地区某鹅场专业户送检的表现为拉白色稀粪、零星死亡。剖解有心包炎等病变的鹅肝、脾胃、肺、肾脏及粪便等。

1.2.2 生化试剂

尿素酶、V～P、M～R、吲哚、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇等所有试剂均由云南农业大学动物病理实验室提供。按常规方法制备备用。

1.2.3 培养基

培养基有：麦康凯琼脂培养基、普通琼脂培养基和鲜血琼脂培养基。

1.2.4 实验设备

培养盘、无菌手术台、孵化器、分析天平、普通显微镜、高压灭菌器、消毒平台等由云南农业大学动物病理学实验室提供。

1.2.5 大肠杆菌单因子血清

购自中国兽医药品监察所。

1.2.6 实验动物

18g～22g 20日龄SPF小白鼠，购自昆明医学院；养殖场提供10日龄大小健康、无感染的郎德鹅20只。

1.2.7 药物

≥98%氟苯尼考（上海瑞诺药业有限公司）、≥98%乳酸恩诺沙星（深圳圣威西药原料动物保健品有限公司）、强力霉素（北京中科动物药业有限公司）、≥98%乳酸诺氟沙星（深圳圣威西药原料动物保健品有限公司）、阿莫西林（深圳圣威西药原料动物保健品有限公司）、50%左旋氧氟沙星（深圳泰克动物药业有限公司）、呋喃唑酮（北京中科动物药业有限公司）、新霉素可溶性粉（淮纺市好利达兽药有限公司）、链霉素（北京中科动物药业有限公司）、硫酸新霉素可溶性粉（淮纺市好利达兽药有限公司）、硫酸黏菌素可溶性粉（淮纺市好利达兽药有限公司）、酒石酸泰乐菌素可溶性粉（河南那瑞森生物药业有限公司）、25%盐酸洛美沙星（河南那瑞森生物药业有限公司）、土霉素（华北联邦兽药股份有限公司）、硫酸阿米卡星（深圳泰克动物药业有限公司）、复方乙酰甲喹可溶性粉（淮纺市好利达兽药有限公司）。

2 实验方法

2.1 小白鼠接种实验

取实验室购买的健康小白鼠20只，把它随机分成2组，各组10只，实验组中用定型的24 h实验菌株静置肉汤培养物分别进行腹腔注射0.1ml/只（约含细菌2.58×109cfu/ml），对照组中用灭菌生理盐水，腹腔注射0.1 ml/只（约含细菌2.58×109cfu/ml），接种后观察，记录发病情况及死亡时间，并取接种小白鼠的肝、脾胃、心血进行病原的再分离。

2.2 雏鹅接种实验

取鹅场提供的健康雏鹅20只，把它随机分成2组，各组10只，实验组中用定型的24 h实验菌株静置肉汤培养物分别进行皮下注射0.3ml/只（约含细菌2.58×109cfu/ml），对照组中用灭菌生理盐水，皮下注射0.3ml/只（约含细菌2.58×109cfu/ml），接种后观察，记录发病情况及死亡时间，并取接种雏鹅的肝、脾胃、心血进行病原的再分离。

2.3 药敏实验

采用纸片法，用药物浓度是0.05mg/ml，每个平板将稀释好的微生物菌液接种0.1毫升，在一个平面上，用消毒好的无菌镊子夹起玻璃棒涂匀平板表面，再用消毒好的无菌镊子取各种药敏纸片贴于平板上，每个平板3～5张纸，间隔不少于3cm，把平板放于37℃恒温箱内，12h左右观察结果，测量所有的纸片周围的抑菌环直径。

3 实验结果

3.1 小鼠接种实验

接种后约12h，小鼠开始出现各种症状，如抑郁、腹围增大和3只小鼠在48h内死亡。尸检发现死鼠腹腔有黄色纤维素渗出物，心外膜出血，肝肿胀，变黑或出血。

3.2 雏鹅接种实验

所有雏鹅在接种后12h开始患病，出现腹泻症状，肝门周围有污垢，48h内全部死亡；立即解剖死鹅，发现雏鹅腹腔有心包积液和纤维素渗出；肝脏肿胀，有出血点、出血块和脆性结构；心包积液，心脏表面有出血点；腺、胃、乳头出血；肠充血，尤其是十二指肠充血明显。

从死亡小白鼠和雏鹅的肝脏、脾胃、心血中，分离提取到所接种的细菌。而对照组无异常表现。

3.3 药敏实验结果

我们对已鉴定的O2、、O7、 O26、O78和O35分别进行药敏实验。综合分析实验数据，药敏实验结果显示：本次分离鉴定大肠杆菌敏感度较高的药物是：硫酸黏菌素可溶性粉、阿莫西林和强力霉素。

4 结论

分离到的细菌中，共鉴定出15株大肠杆菌，包括：O354株，O783株，O263株，O72株，O1091株，O1411株，O21株。体外抑菌实验结果表明，强力霉素、阿莫西林对马龙某鹅场的鹅致病性大肠杆菌具有一定的治疗作用。