实验室小鼠腹主动脉血液采集的优缺点

王晓娜

（沈阳沈化院测试技术有限公司，辽宁沈阳 110000）

1 材料与方法

1.1 实验动物

5周龄SPF等级小鼠80只，雌雄各40只。

1.2 实验器材

采血针、酒精棉球、采血管、CO2麻醉罐、解剖板、手术剪、镊子等。

1.3 麻醉方法

采用CO2麻醉法麻醉，将小鼠放入麻醉罐中，麻醉到适当深度（身体松弛，呼吸深而缓）后取出，取出后将其罩在麻醉面罩下。

1.4 消毒方法

将麻醉后的小鼠腹部朝上固定于解剖板上，用固定针固定其四肢，用0.9 %生理盐水将动物腹部皮毛喷湿。

1.5 采血过程

采血时间选择在上午空腹进行，拿取采血管，从生殖器上部至剑状软骨，用手术剪呈“V”字型开腹，右手取一张洁净滤纸轻轻将肠管推向动物身体左侧，充分暴露出中间粉红色腹主动脉，将采血针针尖斜面朝下向心脏方向刺入腹主动脉，进针速度要迅速，进针手不可乱动，保持针尖水平防止滚针，见采血针內有回血左手立即将采血管插入采血针尾部，采血量达到检测需求方可拔出采血针。依据检测要求选择相应的抗凝剂，含有抗凝剂的采血管在采血后应该立即上下颠倒混匀，若采集时间稍长则需要边采血边摇管，使血液与抗凝剂充分混合，防止血液凝固，注意动作要轻缓。采血过程中不断观察小鼠，麻醉面罩要根据小鼠状态取下或罩上，采血后，用手术剪剪断动物腹腔大血管，充分放血，将洁净滤纸盖在其上面防止血液乱溅。

2 注意事项

2.1 麻醉深度

观察小鼠状态，麻醉深度要掌握好（CO2浓度为50 %～80 %，O2浓度为20 %左右），因为CO2麻醉法容易苏醒，所以根据麻醉程度和采血时间选择是否需要持续麻醉，若需要，把面罩罩在动物口鼻处，持续通入CO2与O2的混合气体。

2.2 掌握正确进针方法

小鼠动脉没有大鼠清晰，所以进针一定要仔细，进针要平，勿要扎穿，若试验需要检测指标多并需要换采血管，换管要小心，勿将采血针带出，带抗凝剂的采血管要及时摇匀防止血液凝固。

3 结果

（1）80只小鼠平均每只采血量在2.0 ml左右；血常规与生化测试量足够；

（2）每只小鼠大约采血时间在2min左右；

（3）测试指标满足要求，动物发生溶血情况极少；

（4）小鼠脏器完整，不影响后期解剖。

4 讨论

目前，小鼠常用的采血方法有眼眶后静脉丛采血法、眼球摘除采血法、心脏采血法、剪尾 采血法等[2]，不同的采血方法适用于不同的实验用途和所需血量。眼眶采血法采血量约为0.2～0.3 ml，可重复采血，但对眼球的损伤是巨大的，不利于后期病理诊断；眼球摘除采血法采血量一般约为0.3～0.4 ml，缺点是不可重复采血，严重可导致小鼠失明，并且容易发生感染的情况，可致小鼠死亡，不符合动物福利基本原则；心脏采血法采血量可达0.8 ml，但由于小鼠个体小、心脏小、心脏搏动快，采血时位置不易固定，所以操作难度系数加大；断尾采血法，虽可以连续多次采血，但每次采血量极少，不到0.1 ml，不适于需要较多血量的实验。

根据需要妥善地选择采血方法是实验成败的关键环节，其方法的优劣主要看采血的数量、质量及操作的难易程度等。不同采集方法对血常规的检验结果有不同的影响[3]。而我们实验室通过大量的试验证明，腹主动脉采血法采血量大，无需多次采血，对血常规检测、生化指标检测、血凝检测、血液涂片均有显著性的意义，解决了因采血量不够而导致所测指标无意义的现象。腹主动脉采血法即采即测，速度快，不费时间，对试验后续解剖提供很大的帮助。

有相关工作的人员应该知道不当的血液采集方法可能导致血液溶血从而影响检测的结果，我认为这一般是与采血者的技术分不开的。通常来说眼眶、尾尖等采血方法很容易造成溶血；而颈动静脉、断头、心、腹主动脉等方法采血则发生溶血概率较小。腹主动脉采血法唯一缺点就是对麻醉人员及采血人员的要求极高，不但能够准确判断出腹主动脉走向，更能够通过观察小鼠状态立即判断是否处于最佳采血状态，深度麻醉将会导致小鼠死亡，麻醉过浅也将导致小鼠在采血过程中苏醒过来，而我们也通过多次的临床试验证明血液测试结果满足要求，不会出现因采血量不足而有指标测不出来的现象，所以在具备了专业的采血技术之后尝试腹主动脉采血无疑是最佳的选择。