重组促卵泡激素对波尔山羊超数排卵效果的影响

杨彦玲，操玉平

（1.施慧达药业集团（吉林）有限公司，上海 200433；2.吉林省康慧生物科技有限责任公司，白山 134300）

上世纪90 年代中期，我国开始规模化异地引进国外优良品种的种羊，从而促进了我国当地品种的改良，提升了羊肉品质。在优良种畜的繁殖过程中，超数排卵技术能够充分挖掘母畜的繁殖潜力，促进优良种群的快速扩繁。促卵泡激素（FSH）是常用的超数排卵产品，是由脑垂体前叶嗜喊性细胞合成并分泌的高度糖基化蛋白，能够刺激雌性动物多个卵泡发育，促进排卵［1］。目前国内使用的兽用超数排卵产品FSH 均来源于垂体提取，由于受到提取来源和工艺的影响，产品的批次间均一性不好，即使同一批次产品，活性也往往存在差异［2-4］。而超数排卵较稳定的加拿大进口产品Folltropin-v（付托平）价格昂贵，在科研和生产实践中使用成本较高［5］。为解决目前兽用FSH 的质量和价格问题，作者等通过基因工程技术在中国仓鼠卵巢细胞（CHO）中表达了rFSH，为确定rFSH 最佳给药剂量及不同批次的稳定性，本试验在前期预实验的基础上对波尔山羊进行了不同剂量和不同批次的超数排卵研究，并与付托平进行了比较，以期为科学研究和大规模生产提供适宜的超数排卵方法。

1 材料与方法

1.1 供体动物选择

经检查并选取处于繁殖期的健康波尔山羊母羊58只，年龄3～5 岁。

1.2 超数排卵药品

rFSH，吉林省康慧生物科技有限责任公司；付托平（加拿大贝尔尼奇）；羊孕激素阴道栓剂（CIDR，Zoetis）等。

1.3 试验分组设计

第1 批试验选取28 只波尔山羊，将其随机分成4组（均使用同一批次rFSH），即对照组（付托平）、低剂量组（每只200 IU）、中剂量组（每只400 IU）及高剂量组（每只600 IU）。

第2 批试验选取30 只波尔山羊，随机分成5 组（其中rFSH 为3 个不同批次），即A 批次组（每只400 IU）、B 批次组（每只400 IU）、C 批次组（每只400 IU）、付托平组和宁波三生FSH 组。

1.4 超数排卵处理和胚胎采集

1.4.1 处理程序 波尔山羊注射氯前列烯醇0.1 mg（第0 天），注射后即进行发情观察，无论是否发情均于第8天阴道放置羊孕激素阴道栓剂（CIDR）预处理，第17 天上午开始采用FSH+PG 法进行超数排卵处理。

FSH+PG 法超数排卵程序：用FSH 包装盒内所附稀释剂或用生理盐水溶解FSH，每天上午7：00—8：00和19：00—20：00 各注射1 次，连续3 d 共注射6 次，首次剂量为总剂量的25%～30%，以后每次注射剂量递减。在第6 次注射rFSH 的同时，注射氯前列烯醇0.1 mg，并撤除羊孕激素阴道栓剂。使用公羊进行试情，确认发情母羊，进入配种程序。

1.4.2 胚胎采集和鉴定 发情配种当天计为第0 天，在第3 天可进行输卵管采胚。将收集冲卵液的集卵杯放置在实体显微镜下静置2～3 min，检出胚胎，记录胚胎数量。胚胎用冲卵液反复冲洗处理后，置于高倍显微镜下进行形态学鉴定。

1.5 生物统计

各组检测数据使用JMP 9.0 软件对各组卵泡数量、胚胎数量进行统计分析，并且进行方差分析处理，结果用平均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 不同剂量rFSH 对波尔山羊超数排卵的影响

由表1 可知，3 个不同剂量rFSH 超数排卵后冲胚获得的平均胚胎数均在13 枚以上，大于或相当于对照组。各组间获得胚胎数无显著差异（P>0.05）。rFSH 各剂量组的卵巢表面的平均卵泡数在4 个以下，卵巢表面的卵泡数量同样低于对照组，各组间也无统计学差异（P>0.05）。低剂量组（200 IU）山羊超数排卵后获得胚胎的数量小于中剂量组（400 IU）和高剂量组（600 IU），中剂量组山羊的平均胚胎数16.8 枚，4 组中最高，说明超排效果最好。因此，为节约成本，验证不同批次rFSH对波尔山羊超数排卵的影响，选用中剂量（400 IU）的rFSH 进行第2 批试验。

表1 不同剂量rFSH 对波尔山羊超数排卵的影响

2.2 不同批次rFSH 对波尔山羊超数排卵的影响

由表2 可知，3 个批次rFSH 超数排卵处理后，获得的平均胚胎数均在15 枚以上，且不同批次获得的胚胎数量间均无显著差异（P>0.05），卵巢表面卵泡数量与对照组付托平及宁波三生FSH 相比也无显著差异（P>0.05）。

表2 不同批次rFSH 对波尔山羊超数排卵的影响

3 讨论

3.1 不同剂量rFSH 对波尔山羊超数排卵的影响

前期预试验结果发现，rFSH 能够有效促进波尔山羊的卵泡发育，可用于波尔山羊的超数排卵。并且600 IU给药剂量的超数排卵效果与付托平组的效果相同，且卵巢没有过度刺激现象。袁玉国等［6］研究了不同FSH剂量对山羊超数排卵效果的影响，结果显示，240 IU 剂量和300IU 剂量超数排卵效果差异显著（P<0.05）。为避免用药过量和节约成本，本试验探索了比预实验更低剂量的rFSH 对于波尔山羊的超数排卵效果，结果发现，不同剂量的rFSH 均有一定的超排效果，且获得的平均胚胎数无显著差异（P>0.05），但200 IU 剂量的rFSH 超数排卵后获得胚胎的数量小于400 IU 剂量组和600 IU剂量组，400 IU 剂量的rFSH 超数排卵后获得的胚胎数略高于600 IU 剂量组，这也与文献［6］的研究结果相似，表明给予外源FSH 能够促进山羊卵巢超数排卵，外源FSH 达到一定剂量才有最佳超排效果，且超数排卵效果并不随着外源FSH 剂量的增加而增加。对照组加拿大付托平超排效果和文献中通常报道的波尔山羊超排获得的胚胎数一致［7-8］，3 个剂量组超数排卵获得的胚胎数大于或等于对照组，表明3 个剂量组均可以获得与对照组相同数量的胚胎数。而3 个剂量组的卵泡数均小于对照组，表明本次试验药物剂量未引起卵巢的过度刺激。

3.2 不同批次rFSH 对波尔山羊超数排卵的影响

有报道表明［9-10］，不同批号的国产FSH 的超排效果存在很大差异。为验证不同批次rFSH 超数排卵的稳定性，本试验对波尔山羊进行了相同剂量不同批次的rFSH超数排卵处理试验，结果表明，不同批次的rFSH 具有相同的超数排卵效果，说明不同批次的rFSH 超排效果稳定。对照组（付托平）和宁波三生FSH 与文献中通常报道的波尔山羊超排获得的胚胎数一致［11-12］，rFSH 组与对照组相比超排效果也无显著差异（P＞0.05）。波尔山羊经3 个不同批次的rFSH 超数排卵后，卵巢表面卵泡数量与付托平组相比也无显著差异（P＞0.05），说明未引起波尔山羊的卵巢过度刺激。

4 结论

200～600 IU 剂量的rFSH 对波尔山羊的超数排卵效果等同于加拿大进口产品付托平。不同批次注射用rFSH 对波尔山羊的超数排卵效果一致，因此可以确定不同批次注射用rFSH 是稳定的。另外，在整个试验过程中，波尔山羊超数排卵后卵巢表面的卵泡数较少，且与对照组相当，说明注射rFSH 不会引起山羊卵巢的过度刺激，安全性较好。但是由于本试验超数排卵的供体羊数量有限，还需要进一步扩大试验验证。