八宝五胆药墨长期用药对大鼠肝肾功能、 血糖、 血脂的影响

高华武， 龙子江， 王舒舒， 王 靓， 陈 明

（安徽中医药大学中药复方安徽省重点实验室， 安徽 合肥230012）

中国书画墨作为“文房四宝” 之一， 以明代嘉靖之后产自徽州者最佳。 到清末民初， 胡开文徽墨选料奇特， 独具匠心， 将徽墨推向了全球市场［1］， 其中以名贵中药材配制供药用的墨——八宝五胆药墨以水牛角、 羚羊角、 蟾酥、珍珠、 花红、 牛黄、 麝香、 朱砂8 味珍贵药材， 以及熊胆、蛇胆、 青鱼胆、 牛胆、 猪胆5 种动物胆制药入墨， 结合其他药材共20 余味， 具有消炎解毒、 活血止痛、 凉血止血、消肿软坚、 防腐收敛功效［2-3］， 还能抑制炎症因子， 对肿瘤有一定治疗作用［4］。 为探讨长期使用八宝五胆药墨的安全性， 本研究将进行24 周大鼠长期毒性实验， 观察它对肝肾功能、 血糖、 血脂变化的影响。

1 材料

1.1 药物 八宝五胆药墨由安徽墨药制药有限公司提供，批号130503， 临用时用蒸馏水配制。

1.2 动物 SD 大鼠120 只， 雌雄各半， 体质量80 ～90 g，由安徽省动物实验中心提供， 动物生产许可证编号SCXK（皖） 2016-002。

1.3 仪器 AU680 型全自动生化分析仪（美国贝克曼库尔特公司）； TS-12 生物组织自动脱水机、 BM-VII 生物组织包埋机（孝感市宏业医用仪器有限公司）； YD-315 轮转式切片机（金华市益迪医疗设备有限公司）； YT-6C 生物组织摊烤片机（孝感市亚光医用电子技术有限公司）。

2 方法

2.1 分组及给药 120 只大鼠适应性饲养1 周后， 根据《中药、 天然药物长期毒性研究技术指导原则》 和文献［5-7］ 随机均分成4 组， 每组雌雄大鼠各15 只， 分别为八宝五胆药墨低剂量（2.5 生药／kg）、 中剂量（5.0 生药／kg）、高剂量 （10.0 生药／kg） 组 （相当于成人临床日用量3.24 g 生药／d 的46、 92、 185 倍） 及正常对照组（等容量蒸馏水）。 各组大鼠灌胃给药， 剂量0.5 mL／100 g 体质量，连续24 周。

2.2 指标检测

2.2.1 生化指标 分别于给药12、 24 周及停药2 周后，每组随机选取10 只大鼠（雌雄各半）， 3.5% 水合氯醛麻醉， 腹主动脉取血， 分离血清， 检测谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶试剂盒（AST）、 碱性磷酸酶（ALP）、 白蛋白（ALB）、 血浆总蛋白（TP）、 总胆红素（TBi）、 直接胆红素（DBIL）、 血清尿素氮（BUN）、 肌酐（CREA）、 血糖（Glu）、 甘油三酯（TG）、 总胆固醇（CHOL） 水平。

2.2.2 病理指标 处死大鼠， 肉眼观察心、 肝、 脾、 肺、肾、 肾上腺、 胸腺、 胰腺、 子宫、 卵巢、 睾丸、 前列腺，并进行病理切片， 光镜下检测其组织变化。

2.3 统计学分析 通过SPSS 17.0 软件进行处理， 数据以（±s） 表示， 组间比较采用单因素方差分析。 以P＜0.05表示差异有统计学意义， 评价时综合考虑统计学差异和生物学意义［8］。

3 结果

3.1 八宝五胆药墨对大鼠肝肾功能的影响 雄性大鼠给药12 周后， 八宝五胆药墨中剂量组AST、 ALB、 BUN 水平显著升高（P＜0.05， P＜0.01）， 高剂量组AST 水平显著升高（P＜0.01）； 停药2 周后， 高剂量组DBIL 水平显著降低（P＜0.05）。 雌性大鼠给药24 周后， 八宝五胆药墨低剂量组ALP 水平显著升高（P＜0.05）， 中剂量组ALP 水平显著升高（P＜0.01）， 高剂量组ALP 水平显著升高（P＜0.01），AST、 ALB、 DBIL 水平显著降低（P＜0.05）； 停药2 周后，低剂量组TBIL、 DBIL 水平显著降低（P＜0.01）， 高剂量组ALB、 DBIL 水平显著降低（P＜0.05）。 但经分析后认为，AST、 ALP、 ALB 水平变化无明显剂量、 性别相关性， 也无明显毒理学意义； TBIL、 DBIL、 BUN 水平变化幅度不大，为正常生理波动。 见表1～2。

表1 八宝五胆药墨对雄性大鼠肝肾功能的影响（±s， n＝5）

表1 八宝五胆药墨对雄性大鼠肝肾功能的影响（±s， n＝5）

注：与正常对照组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01

组别 时间 正常对照组 八宝五胆药墨低剂量组 八宝五胆药墨中剂量组 八宝五胆药墨高剂量组ALT／（U·L-1）给药12 周 27.40±3.51 31.80±10.52 52.61±37.66 35.00±6.78给药24 周 55.20±7.12 48.60±5.68 47.60±10.90 46.40±9.45停药2 周 39.40±21.78 46.60±11.06 47.80±4.27 50.00±4.06 AST／（U·L-1）给药12 周 122.40±21.51 138.00±32.19 212.40±34.11∗∗ 173.40±26.44∗∗给药24 周 247.00±66.81 214.40±69.82 222.80±66.35 229.00±64.33停药2 周 178.60±85.43 176.20±44.03 142.20±28.22 131.00±22.79 ALP／（U·L-1）给药12 周 121.20±45.55 112.20±29.04 117.20±33.68 139.20±54.58给药24 周 105.80±23.89 119.20±44.30 155.00±57.11 126.00±94.67停药2 周 81.74±46.96 89.00±20.29 108.40±24.96 122.60±19.50 ALB／（U·L-1）给药12 周 33.78±1.34 31.28±1.39 30.90±1.94∗ 31.94±1.63给药24 周 31.32±1.91 32.40±1.97 30.30±2.95 33.14±7.47停药2 周 36.98±13.89 31.94±2.85 30.06±1.69 29.66±0.27 TP／（g·L-1）给药12 周 59.86±1.85 63.54±4.77 59.12±4.96 60.40±5.43给药24 周 61.84±2.77 63.10±2.33 65.62±3.79 62.48±2.27停药2 周 51.22±27.63 67.06±3.39 64.34±2.92 64.86±1.11 TBIL／（μmol·L-1）给药12 周 0.60±0.55 0.30±0.22 0.36±0.24 0.78±0.42给药24 周 1.54±2.12 1.68±0.51 1.62±1.11 1.10±0.28停药2 周 2.30±0.67 3.20±1.13 3.00±0.71 2.10±0.22 DBIL／（g·L-1）给药12 周 0.40±0.36 0.25±0.19 0.29±0.25 0.46±0.31给药24 周 0.88±0.58 0.60±0.31 0.56±0.34 0.40±0.35停药2 周 1.78±1.26 1.40±0.55 0.80±0.45 0.20±0.45∗BUN／（mol·L-1）给药12 周 5.08±0.38 4.90±0.60 6.38±1.16∗ 5.56±0.53给药24 周 6.02±1.81 5.90±2.09 7.40±1.48 6.12±1.89停药2 周 10.70±7.79 7.74±1.83 6.52±0.48 6.84±0.99 CREA／（μmol·L-1）给药12 周 59.06±4.92 60.08±5.20 68.64±11.70 64.44±18.49给药24 周 74.20±28.20 71.72±10.78 71.00±27.90 65.16±19.36停药2 周 86.64±68.19 103.24±10.62 103.24±10.62 95.18±10.73

表2 八宝五胆药墨对雌性大鼠肝肾功能的影响（±s， n＝5）

表2 八宝五胆药墨对雌性大鼠肝肾功能的影响（±s， n＝5）

注：与正常对照组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01

组别 时间 正常对照组 八宝五胆药墨低剂量组 八宝五胆药墨中剂量组 八宝五胆药墨高剂量组ALT／（U·L-1）给药12 周 28.00±4.47 29.00±9.71 28.00±3.54 30.40±6.43给药24 周 44.60±13.74 41.20±6.65 39.20±10.78 42.40±5.08停药2 周 40.00±10.70 48.40±9.96 39.20±7.05 38.00±7.84 AST／（U·L-1）给药12 周 104.40±8.85 125.40±28.63 127.20±29.39 148.00±8.40给药24 周 179.40±37.63 134.60±26.52 128.80±17.92∗ 154.00±10.93停药2 周 107.80±15.22 133.60±40.06 106.00±18.72 101.60±15.18 ALP／（U·L-1）给药12 周 77.40±46.15 80.60±26.71 77.60±36.21 61.00±13.67给药24 周 42.20±11.21 77.60±30.09∗ 125.40±44.12∗∗ 137.40±47.11∗停药2 周 76.40±54.10 69.40±24.06 74.20±26.35 74.00±23.54 ALB／（U·L-1）给药12 周 33.80±1.55 32.02±4.79 36.06±2.64 35.64±1.39给药24 周 39.36±1.69 40.16±1.92 35.64±2.76∗ 35.84±3.56停药2 周 39.14±3.43 36.08±2.82 35.22±3.76 34.00±3.51∗TP／（g·L-1）给药12 周 64.00±3.47 63.84±7.04 64.80±2.22 64.74±3.33给药24 周 76.48±4.39 73.58±2.34 67.60±7.54 70.64±1.49停药2 周 73.32±4.00 69.42±3.76 75.16±4.49 70.12±3.61 TBIL／（μmol·L-1）给药12 周 1.00±0.8 0.33±0.24 0.64±0.47 0.80±0.45给药24 周 1.38±0.39 1.10±0.22 1.00±0.00 1.38±0.39停药2 周 2.70±0.45 2.00±0.00∗∗ 2.70±0.27 2.80±0.27 DBIL／（g·L-1）给药12 周 0.80±0.45 0.28±0.24 0.59±0.41 0.72±0.38给药24 周 0.70±0.41 0.62±0.26 0.26±0.05∗ 0.90±0.17停药2 周 1.78±1.26 1.00±0.00∗∗ 0.80±0.45 1.00±0.00∗BUN／（mol·L-1）给药12 周 5.70±0.77 6.56±2.24 4.32±1.16 6.36±1.34给药24 周 8.14±0.41 7.56±0.60 7.20±2.51 7.02±1.16停药2 周 6.22±0.44 7.84±1.19 7.64±1.30 6.58±0.65 CREA／（μmol·L-1）给药12 周 65.92±8.45 75.00±17.90 54.20±12.60 65.16±4.07给药24 周 96.06±21.81 67.42±5.11 64.76±9.06 73.18±14.46停药2 周 96.48±18.38 98.54±9.44 113.06±13.11 102.54±15.07

3.2 八宝五胆药墨对大鼠血糖、 血脂的影响 雄性大鼠给药12 周后， 高剂量组TG 水平显著升高（P＜0.05）； 停药2 周后， 高剂量组TG 水平显著升高（P＜0.05）。 雌性大鼠给药12 周后， 中剂量组Glu、 TG 水平显著升高 （P ＜0.01）； 给药24 周后， 中剂量组TG 水平显著升高（P ＜0.05）。 但经分析认为， Glu、 TG 水平升高无明显剂量、 性别相关性， 而且幅度不大， 为正常生理波动， 无明显毒理学意义。 见表3。

表3 八宝五胆药墨对大鼠血糖、 血脂的影响（±s， n＝5）

表3 八宝五胆药墨对大鼠血糖、 血脂的影响（±s， n＝5）

注：与正常对照组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01

指标 性别 时间 正常对照组 八宝五胆药墨低剂量组 八宝五胆药墨中剂量组 八宝五胆药墨高剂量组Glu／（nmol·L-1）雄性 给药12 周 4.79±0.87 3.87±1.07 4.54±2.68 3.80±2.40给药24 周 8.12±4.58 8.78±2.11 3.96±1.98 6.54±4.45停药2 周 7.44±3.68 7.23±2.71 4.33±0.84 5.01±0.70雌性 给药12 周 5.08±0.81 4.49±1.01 8.71±1.57∗∗ 4.30±1.33给药24 周 5.93±1.55 7.54±0.55 6.45±2.48 7.45±2.41停药2 周 8.10±2.26 7.55±1.41 6.18±1.11 7.96±1.67 TG／（mmol·L-1）雄性 给药12 周 1.12±0.29 1.11±0.42 0.96±0.32 1.79±0.43∗给药24 周 8.37±17.12 0.81±0.25 0.59±0.16 0.63±0.35停药2 周 0.56±0.09 0.75±0.31 0.45±0.10 0.84±0.20∗雌性 给药12 周 0.70±0.18 0.96±0.29 1.71±0.53∗∗ 7.52±14.52给药24 周 0.49±0.18 0.68±0.22 0.86±0.29∗ 0.62±0.24停药2 周 0.59±0.17 0.61±0.13 0.52±0.07 0.52±0.16 CHOL／（mmol·L-1）雄性 给药12 周 1.66±0.17 2.24±0.41 1.80±0.62 2.10±0.41给药24 周 1.95±0.08 1.87±0.25 1.75±0.37 1.97±0.40停药2 周 1.52±0.52 1.80±0.44 1.36±0.38 1.77±0.18雌性 给药12 周 1.96±0.49 2.29±0.45 2.62±0.44 2.62±0.60给药24 周 2.26±0.59 2.66±0.56 2.18±0.55 2.44±0.32停药2 周 2.22±0.19 2.22±0.39 2.15±0.42 2.09±0.29

3.3 对大鼠脏器组织的影响 处死大鼠后解剖， 肉眼未发现脏器组织有明显变化。 镜下检测显示， 给药12、 24 周及停药2 周后， 除个别大鼠脾脏有轻度淤血， 肝脏肝门管区有少量炎细胞浸润， 肝细胞有轻度细胞水肿外， 其他大鼠脏器组织均无明显变化。

4 讨论

以药入墨在我国具有悠久的历史， 将书画墨与中药结合制成的八宝五胆药墨既是我国优秀的墨工艺品， 又兼具中医药治疗疾病的功效。 八宝五胆药墨由20 余味名贵中药制成， 方中水牛角清热解毒， 凉血止血； 羚羊角、 珍珠、牛黄为寒凉之品， 除热凉血， 清风祛痰， 清肝解毒［9］； 冰片清热止痛， 引风热湿邪而出， 牛胆、 猪胆清肝热， 利胆通肠， 清中下焦湿热； 藕节、 大小蓟、 牡丹皮、 白茅根清热凉血， 散结消瘀； 麝香、 蟾酥、 丁香、 川芎、 红花逐风散滞， 养血行气止痛； 松烟药墨随血通达全身， 收毒解毒，调和诸药［10-11］， 全方共奏凉血止血、 息风清热、 清肿止痛之功效［12］。 虽然八宝五胆药墨功效仍有待现代药理实验进行证实， 但由麝香、 羚羊角、 牛黄、 蛇胆、 珍珠等中药制成的八宝丹能抑制胃癌细胞AGS、 MGC-803 增殖， 诱导细胞凋亡［13］； 含有牛黄、 犀角、 麝香、 冰片成分的安宫牛黄丸能改善脑出血后的神经功能， 减轻脑水肿， 对脑出血具有治疗作用［14］； 课题组前期研究发现， 八宝五胆药墨能抑制炎症因子， 对肿瘤有一定治疗作用［4］。

本实验发现， 大鼠按2.5、 5.0、 10.0 g 生药／kg （按体质量计算， 分别相当于临床成人日用量3.24 g 生药／d 的46、 92、 185 倍； 按体表面积计算， 分别相当于8、 17、 34倍） 剂量给予八宝五胆药墨12、 24 周及停药2 周后， 仅个别大鼠肝肾功能指标有差异， 但并无毒理学意义， 并且脏器组织也无明显变化， 表明其长期用药毒性较小， 安全性良好。