原发性高血压病人Th22细胞及其细胞因子的临床意义

原发性高血压(EH)是指无确切病因的以体循环动脉压升高为主要临床表现的心血管综合征[1-2]。既往研究认为，EH是一种慢性低级别炎症性疾病，免疫功能异常在EH发生、发展过程发挥重要作用[3]，因此有关EH与免疫细胞、免疫分子的相关研究已成为当前心血管病学研究的重要方向。本研究探讨Th22细胞及其细胞因子在EH病人中表达的临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取2013年1月—2016年10月我院收治的64例1级EH病人(A组)、70例2级EH病人(B组)、49例3级EH病人(C组)及同期体检科体检的50名健康对照者(D组)作为研究对象。A组、B组、C组研究对象纳入标准：符合EH诊断标准[4]；最近6个月内未服用降压药物、免疫抑制剂类药物。排除标准：继发性高血压病人；合并免疫系统疾病；合并脑血管疾病；合并冠心病、心力衰竭等心脏疾病；合并重要脏器功能不全；合并恶性肿瘤。4组研究对象性别、年龄比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2 研究方法

1.2.1 外周血Th22细胞检测 采用美国BD公司FACSCalibur流式细胞仪进行检测，步骤如下：①抽取研究对象空腹静脉血2 mL，肝素抗凝。②取500μL肝素抗凝血，依次加入氟波酯液12.5 μL、莫能霉素液0.35 μL、伊诺霉素液1.3 μL，混匀，37 ℃水浴6 h。③取一根流式细胞管，加入孵育后样本300 μL、CD4单克隆抗体30 μL，混匀，室温避光孵育10 min。④加入红细胞裂解液3 mL，混匀，室温避光孵育10 min。待红细胞裂解完全后，采用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤细胞2次或3次，将PBS液吸净。⑤加入破膜剂250 μL，混匀，室温避光孵育25 min，采用PBS液洗涤1次或2次，将PBS液吸净。⑥加入PBS液2 mL，混匀，备用。⑦取两根流式细胞管，一根为试验管加入100 μL细胞液及5 μL 藻红素(PE)标记白介素-22(IL-22)抗体、异硫氰酸荧光素(FITC)标记干扰素-γ(IFN-γ)抗体、PE标记白介素-17(IL-17)抗体，另外一根作为对照管，加入细胞液100 μL及PE 5 μL标记IL-22抗体、FITC标记IFN-γ抗体、PE标记IL-17抗体的同型对照抗体，混匀，室温避光孵育30 min。⑧两管中均加入PBS液2 mL，混匀，离心弃上清，加入1%多聚甲醛300 μL，4 ℃冰箱保存。⑨48 h内检测完毕，采用CD4设门，CD4+ IFN-γ- IL-17- IL-22+ 细胞即为Th22细胞，采用软件分析结果。

1.2.2 外周血IL-22检测 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测，试剂盒由上海康朗生物科技有限公司提供，严格按照试剂盒说明书操作。

2 结 果

2.1 4组研究对象外周血Th22细胞和IL-22水平比较 A组、B组、C组、D组外周血Th22细胞、IL-22水平比较，差异有统计学意义(Th22细胞：F=14.763，P=0.000；IL-22：F=30.074，P=0.000)，D组外周血Th22细胞、IL-22水平显著低于A组、B组、C组(Th22细胞：qA vs D=9.910，P=0.000；qB vs D=11.489，P=0.000；qC vs D=12.657，P=0.000；IL-22：qA vs D=29.870，P=0.000；qB vs D=25.100，P=0.000；qC vs D=24.595，P=0.000)，A组外周血Th22细胞水平低于B组、C组(qA vs B=2.001，P=0.047；qA vs C=3.481，P=0.001)，B组外周血Th22细胞水平低于C组(qB vs C=2.022，P=0.046)，A组、B组、C组外周血IL-22水平比较差异无统计学意义(qA vs B=1.471，P=0.145；qA vs C=1.173，P=0.243；qB vs C=0.189，P=0.850)。详见表1。

表1 4组外周血Th22细胞和IL-22水平比较(±s)

2.2 4组研究对象血压水平比较 4组研究对象收缩压及舒张压从高到低依次为：C组>B组>A组>D组，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 4组研究对象血压水平比较(±s) mmHg

2.3 EH病人外周血Th22细胞及IL-22与血压相关性分析 EH病人外周血Th22细胞水平与收缩压(SBP)呈正相关(r=0.407，P=0.033)，与舒张压(DBP)无相关性(r=0.219，P=0.155)。EH病人外周血IL-22水平与SBP(r=0.155，P=0.210)、DBP(r=0.190，P=0.286)均无相关性。

3 讨 论

EH是目前临床常见的心血管系统疾病之一，约占所有高血压病人的95%以上[5]。EH发病机制至今尚未完全明确，尽管临床已确认其是一种多因素病因疾病，尤其是遗传因素、环境因素交互作用在EH发生发展过程中发挥重要作用，这两个因素具体通过何种途径促使血压升高目前尚无完整统一认识[6-7]。

随着研究深入，炎症因素与EH的关系逐步得到重视。周言等[8]报道，EH病人血清人软骨糖蛋白(YKL-40)水平显著高于健康对照组，EH合并代谢综合征(MS)病人血清YKL-40水平显著高于EH未合并MS病人，EH病人血清YKL-40水平与其SBP、DBP、白细胞计数(WBC)呈正相关，由此可见，炎症因子YKL-40可能参与EH的病理生理过程，其在高血压病人预后评估方面可能有一定的临床价值。朱瑞英等[9]报道，EH病人血清C反应蛋白(CRP)水平显著高于健康对照组，进一步多元Logistic回归分析显示，血清CRP水平是EH发生的独立危险因素。由此可见，EH发生发展与机体炎症因素密切相关。Th22细胞是Eyerich等于2009年在CD4+T细胞中发现的一种新型效应性T细胞，其与Th1、Th2、Th17细胞明显不同，存在特有的分化和转录因子[10]。关于Th22细胞研究认为，其典型特征是大量分泌IL-22而不分泌IFN-γ，不分泌或少量分泌IL-17，因此临床对Th22细胞的相关研究常同时检测外周血IL-22水平[11-12]。目前研究认为，外周血Th22细胞及IL-22水平异常可见于多种疾病。戴小波等[13]报道，慢性乙型肝炎病人外周血Th22细胞、IL-22水平显著低于健康对照组、乙肝病毒携带者、非病毒性肝炎病人，因此外周血Th22细胞数量减少或功能减退、IL-22水平降低可能是慢性乙型肝炎发病的重要因素。贺燕妮等[14]报道，斑秃病人外周血Th22、IL-22水平显著高于健康对照组，重型斑秃病人、活动期斑秃病人外周血Th22、IL-22水平显著高于轻型斑秃病人、稳定期斑秃病人，因此Th22及其细胞因子可能参与斑秃的发生、发展。可见，Th22细胞及IL-22在慢性炎症性疾病中发挥重要作用。

本研究结果显示，EH病人外周血Th22细胞、IL-22水平均显著高于健康对照组，且EH分级越高，外周血Th22细胞亦逐步升高，但不同分级EH病人外周血IL-22水平比较差异无统计学意义。进一步相关，分析显示，EH病人外周血Th22细胞水平与SBP呈显著正相关而与DBP无显著相关性，其外周血IL-22水平则与SBP、DBP均无显著相关性。本研究结果与杨子聪[15]报道不一致，其可能原因是两者研究对象选择、样本量方面存在差异。

综上所述，外周血Th22细胞可能在EH发生发展过程中发挥一定的作用，其具体作用机制尚未明确，有待临床进一步研究。