GLP实验室生化检测系统的性能验证

赵映淑,林应学,黎良程,刘 春

(海南省药品检验所/海南省药物研究重点实验室，海南海口 570216)

生化检测体系(系统)由生化分析仪与检测试剂及其校准品组成，该体系的性能在一定程度上受仪器本身和(或)试剂的影响，在进行常规工作前应该对其性能进行分析评价，以证实其能满足预期要求[1-2]。除在仪器首次使用前进行安装验证、操作验证和性能验证外，仪器安装地点发生改变、有过重大维修、控制系统或检测方法发生改变也应该视情况对仪器重新进行3Q验证[3-4]。这也是良好实验室规范(GLP)对仪器设备验证的最基本要求[5-7]。医学实验室质量和能力认证也要求仪器设备在常规使用中能达到规定的性能指标[8-10]。本实验室由日立7100型全自动生化分析仪与日本和光试剂及其校准品组成的生化检测体系在首次使用前已进行3Q验证，运行稳定良好，但因其运行成本较高，考虑使用国产试剂进行替代，故该体系的有效性必须加以验证[11]。本研究所述生化指标体系改变后的验证，是在GLP条件下，以7100型日立全自动生化分析仪为依托，基于检测试剂改变(更换为国产科华生化检测试剂)后，选择血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、总胆固醇(TC)、血糖(GLU)、三酰甘油(TG)、肌酸激酶(CK)、尿素(Ur)和肌酐(Cr)13项常规生化指标进行精密度、准确性、线性和携带污染率等性能的验证。

1 材料与方法

1.1样本来源 质控血清Ⅰ(批号：TP738)、质控血清Ⅱ(批号：DP658)购于日本和光纯药株式会社，线性及携带污染率实验采用的血清样本由海南省肿瘤医院提供。

1.2仪器与试剂 仪器为日立7100型全自动生化分析仪(日本日立高新技术株式会社)。ALT(批号：20170722)、AST(批号：20170222)、ALP(批号：20170812)、GGT(批号：20170712)、CK(批号：20170712)、TP(批号：20170122)、ALB(批号：20170612)、TBIL(批号：20170722)、TG(批号：20170412)、CHO(批号：20170322)、GLU(批号：20170712)、CERA(批号：20170622)、BUN(批号：20170512)及其校准品均购于上海科华生物工程有限公司。

1.3方法

1.3.1精密度 按照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP15-A2[12]文件要求，将高、低水平质控血清复溶后每天重复测定3次，连续测定5 d，记录每天的测定结果，计算批内变异系数(CV%)及批间CV%，并与美国临床实验室修正法规(CLIA′88)比较，若批内CV%<1/4允许总误差(TEa)，批间CV%<1/3TEa证明其性能良好。

1.3.2准确度 将正常值质控血清连续测定5次，求平均值，与质控血清靶值进行比较采用相对偏差判断各项的准确度[13]。相对偏差=(检测值-靶值)/靶值×100%。偏差小于CLIA′88对检测项目分析质量要求的TEa的1/3则判定测定结果准确、可靠。

1.3.3线性 根据CLSI EP6-P2[14]文件要求进行实验。将高值(H)、低值(L)血清按一定比例混合(H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、L)，每个混合物重复检测4次，取均值。以稀释度为横轴、每个稀释度的测量均值为纵轴进行线性回归，根据线性回归方程求出每个稀释度的理论浓度，计算每一稀释度下实测浓度和理论浓度的差异，即线性偏差。若相关系数(R2)>0.995、线性偏差≤1/2TEa则可判断测定方法在实验所涉及的浓度范围内成线性。

1.3.4携带污染率 根据CLSI EP10-A2文件要求[15]，将低水平血清分为3份(分别为L1、L2、L3)和一份高水平血清(H)，按L1、L2、H、L3顺序排列进行测定，根据携带污染率计算公式[(L3-L2)/H×100%]，计算每项携带污染率，<0.5%为合格。

1.4统计学处理 采用Excel2003软件对数据进行分析。

2 结 果

2.1精密度及准确度实验 13项生化指标水平Ⅰ和水平Ⅱ的批内CV%和批间CV%分别小于基于生物学变异确定1/4 CLIA′88和1/3 CLIA′88，均符合性能要求，说明该仪器具有较高的精密度。见表1。标准质控血清水平Ⅰ和水平Ⅱ测定值与靶值的相对偏差均小于CLIA′88对检测项目分析质量要求的总允许误差的1/3,13项生化指标中有10项相对偏差均在±3%以内，其余3项指标也均符合该仪器的准确度要求。见表2。

2.2线性实验 13项生化指标的线性决定系数R2值均>0.995，说明该仪器在定值血清的稀释范围内呈良好的线性关系。见表3。

表1 精密度检测结果与性能比较(n=5)

表2 准确度检测结果与性能比较(n=5)

续表2 准确度检测结果与性能比较(n=5)

2.3样品携带污染率实验 13项生化指标检测的携带污染率均<0.5%，说明前一个样品对下一个样品测定结果不存在影响，符合该仪器的基本要求。见表4。

表4 携带污染率检测结果

3 讨 论

本研究依据CLIA′88对13个常规生化项目检测的精密度、准确度及线性偏差的结果进行了判定，结果显示，批内CV%<1/4 CLIA′88TEa，批间CV%<1/3 CLIA′88TEa；准确度相对偏差明显小于1/3 CLIA′88TEa；线性验证R2均>0.995，线性偏差均<1/2 CLIA′88 TEa。表明该仪器检测重复性、准确性和线性良好，也说明国产试剂和校准品与日立7100型全自动生化分析仪构成的新检测体系符合质量要求，能保证毒理学研究中的临床检验工作。

GLP实验室的临检对象是实验动物，一般以提供客观检测数据为主，不涉及疾病诊断，在检测方法、仪器选择和结果解释方面与临床存在差异，且实验动物饲养和样品采集的标准化也使临床常见的干扰现象减少。除定期测试精密度、准确度、线性范围和携带污染率外，首次验证还应该考虑最低检测限和最大稀释度。

综上所述，经GLP条件下的性能验证，本实验室日立7100型全自动生化分析仪在更换试剂后各方面性能良好。