液相芯片系统在检测抗核抗体谱中的应用

2019-01-19吴姗姗

国际检验医学杂志 2019年1期

张程，吴姗姗，吕丹

(辽宁中医药大学附属医院检验科,辽宁沈阳 110032)

抗核抗体是以真核细胞核内的DNA、RNA、蛋白或这些物质的分子复合物产生的自身抗体。按其核内各个分子的性能不同可将各抗核抗体区分开来，如抗双链DNA抗体(dsDNA)、抗组蛋白抗体、抗核仁抗体等。目前，抗核抗体靶抗原的分布已由传统的细胞核成分扩散至整个细胞，细胞质、细胞膜等结构均可成为自身免疫系统的目标抗原，无器官特异度和种属特异度[1]。抗核抗体可特征性地出现在自身免疫性疾病中，对疾病的活动性及预后、治疗反应均具有一定的临床意义[2]。现有的检测自身免疫性疾病的方法主要有间接免疫荧光法(IFA)、线性免疫印迹法(LIA)等[3]，而这些方法存在需要血清量大、费时费力等缺点[4]。近年来，液相芯片技术已得到广泛应用，包括对可提取核抗体的检测均得到了认可[5]。该法提供了一种快速而灵敏的技术手段，通过对单一微球表面进行多种抗原的包被而实现相应抗体的同时检测，达到快速、灵敏的目的[2]。

1 资料与方法

1.1一般资料选择本院收治的已确诊为自身免疫性疾病患者120例，其中男45例，女75例。选择健康对照组血清90例。研究对象均已签署知情同意书。

1.2仪器与试剂 AtheNA Multi-Lyte自身抗体检测试剂盒由美国宙斯公司提供。

1.3检测方法液相芯片(AtheNA法)可半定量检测的抗体包括Ro52、SSA、SSB等15种。比对方法包括IFA法和LIA法。3种检测方法均严格按试剂盒说明书要求进行操作。IFA法以任一核型滴度>1∶100为阳性标准，LIA法和AtheNA法以检测抗核抗体谱中任一种抗体阳性为阳性标准。

1.4统计学处理采用SPSS22.0统计软件对数据进行学分析，计数资料以率(%)表示，采用χ2检验；采用kappa一致性检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.13种检测方法阳性率比较病例组AtheNA法、IFA法和LIA法检测阳性率分别为61.7%、71.7%和50.8%;健康对照组分别为6.7%、5.6%和5.6%，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2AtheNA法与LIA法检测15种抗体结果比较除抗dsDNA抗体外，AtheNA法总符合率超过85.0%。2种检测方法检测抗dsDNA抗体具有高度一致性，其他14种抗体检测结果一致性极佳。表明AtheNA法具有较高的灵敏度。见表2。

表1 3种检测方法阳性率比较[n(%)]

2.3交叉反应验证及标准曲线 1种微球仅针对其待测抗原发出高强度荧光，导致该种抗原只与其对应的抗体结合而并不与其他蛋白标志物结合，因此，抗体之间无交叉反应存在。由于目前缺乏抗核抗体谱抗体的国际校准品，所以无法通过联合检测的标准曲线去溯源，但AtheNA法可通过携带抗体的微球数来半定量反应抗体水平，而LIA法无法实现，所以，与LIA法比较，AtheNA法能实现半定量检测，提高灵敏度，满足临床检测需求。

表2 AtheNA法与LIA法检测15种抗体结果比较

3 讨论

抗核抗体检测对自身免疫性疾病的诊断已有50多年的历史，尤其诊断系统性红斑狼疮的灵敏度几乎达100%，抗核抗体阳性对系统性红斑狼疮的预测也具有较为重要的作用[6-8]。目前，常用的有免疫扩散法、酶联免疫吸附法、免疫印迹法、液相芯片法和LIA法。随着抗原提纯技术的提高，LIA法、免疫印迹法和液相芯片法被越来越多的实验室所采用。

液相芯片是新一代高通量生物芯片技术，因其具有高精准、特异性强等优势可同时综合分析多种标志物，在自身免疫、肿瘤筛查等方面体现出较高的诊断价值。传统的“金标准”酶联免疫吸附试验虽然灵敏度较高，但每一反应孔只能检测一种抗体，当多种抗体同时检测就变得繁琐、费时，AtheNA法的优点：(1)高通量。液相芯片可同时检测100种生物标志物，可通过重组蛋白不断更新自身抗体谱来建立诊断体系。(2)用血量少。(3)操作简便。液相芯片采用荧光分析方法，活性范围大大增强，节省了洗涤和稀释的时间，使实验时间大大缩短。

有研究结果表明，由于IFA法的基质为HEP-2/猴肝细胞，细胞结构较为完整，可几乎完全捕获待测血清中的抗核抗体，使其检测抗核抗体阳性率较高[9]，但其仅为定性实验，对临床“灰区”患者不能确切说明问题。液相芯片技术是一种以经过特殊编码、可识别的微球作为生物分子(抗原、抗体、蛋白质、核酸等)反应及信号检测载体的阵列分析技术。微球逐一通过检测通道时受到双色激光的照射，既可识别微球表面包被的分子种类；又可确定目标分子数量，所以，可半定量确定抗体的水平，达到实现高精准的目的[10-12]。

本研究以LIA法作为参照，采用AtheNA法对15种抗核抗体进行了检测，结果显示，2种方法具有较高的一致性。LIA法因其各模块上抗原浓度不详，不可根据显色条带的深浅度来判断待测抗体的水平[13-15]。而液相芯片通过每个微孔板中的大量微球，再配合不同激光的发射，可较精确地区别抗体，并实现待测抗体的半定量检测[16-18]。