基于环介导等温扩增技术检测社区获得性肺炎病原体的应用研究

冯远军 黄静

563000贵州航天医院，贵州遵义

在临床中，社区获得性肺炎为常见疾病，具有传染性。重症社区获得性肺炎患者具有较高的死亡率，病情发展迅速，容易出现因溶血功能障碍、呼吸衰竭等引发的弥漫性血管内凝血情况，以及引发脓毒性休克、脓毒血症，危及患者生命健康。社区获得性肺炎具有高发率，对人们的健康造成严重影响[1-2]。本研究对社区获得性肺炎患者进行环介导等温扩增技术检测，探究病原体检查灵敏度、特异度、阳性预测值与阴性预测值，为诊断与治疗提供参考。现报告如下。

资料与方法

2017年1月-2018年12月收治社区获得性肺炎患者86例，男48例，女38例；年龄31～69 岁，平均(42.1±3.9)岁。所有患者均签署知情同意书。

纳入标准：①确诊为社区获得性肺炎；②无非感染性疾病；③无肺结核；④无HIV感染；⑤无其他严重疾病。

方法：①采集患者支气管肺泡：对不同症状患者采取不同灌洗方法，肺部感染局限性病变灌洗支气管肺段，弥漫性间质性病变灌洗右肺中叶与左肺舌叶。进行局部麻醉，植入纤维支气管镜，推注生理盐水25～50 mL/次，总推注量为100～250 mL，推注后负压吸引，回收液体，保存于-80℃冰箱中，送往实验室检查。②痰液标本：切开患者气管，将无菌导管插入人工气道，收集呼吸道分泌物作为实验室研究标本。在获取痰液时需要注意吸痰操作，不采取负压操作，避免采集到非呼吸道标本。同时每次吸痰时间在15 s 以下，反复开放与关闭压力孔，慢慢吸取呼吸道分泌物，避免对患者造成严重影响，避免出现心跳骤停与缺氧情况。痰液采集后将其装入EP管中，其中含有0.5 mL细菌保存液，而后将其分成3 份送至实验室培养检测，标注好信息，保存于-80℃冰箱中。③环介导等温扩增技术检测：将600 mL 灌洗液与痰液放入灭菌离心管中做好标记，并加入600 mL 等体积NaOH溶液，混匀后放置核酸提取仪中摇动液化。再将其放至离心机中离心，10 000转/min，离心5 min。留沉淀物，并加入生理盐水洗涤，再次离心，10 000 转/min，离心5 min。弃上清液，100 mL Tris EDTA 悬浮，核酸提取仪震荡裂解15 min，震荡液离心1 mL 得核酸。选取社区获得性肺炎常见12 种病原体进行序列设计，将患者标本核酸与其对比。

观察指标：观察病原体检测结果，对比12 种社区获得性肺炎常见病原体，确定病原体；而后将检测结果与实验室培养检测结果进行对比，分析环介导等温扩增技术检测的特异度与灵敏度、阳性预测值与阴性预测值[3-4]。

统计学方法：数据应用SPSS 21.0 软件处理；计数资料以[n(%)]表示，采用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

86例患者经实验室培养检测均确诊为社区获得性肺炎，其中阴性31例(36.0%)，阳性55例(64.0%)。经过环介导等温扩增技术检测检出概率较高的为：铜绿假单胞菌20例(23.3%)，肺炎克雷伯菌19例(22.1%)，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌15例(17.4%)，嗜麦芽窄食单胞菌13例(15.1%)和鲍曼不动杆菌12例(14.0%)。而环介导等温扩增技术检测结果与痰液实验室培养检测结果相比，其灵敏度为95.8%，特异度为67.2%，阳性预测值为81.5%，阴性预测值为97.0%。

讨 论

社区获得性肺炎具有传染性，对患者及家属的健康与生活有着严重影响，而尽早确定病情，并检测出病原体，可以采取针对性的措施进行治疗，效果显著。但近年来随着抗感染药物的不断应用，临床中出现了很多有耐药性的病原体，影响治疗效果以及病情恢复，因此社区获得性肺炎病原体检测成为治疗的关键环节。对社区获得性肺炎进行早期诊断，并及时采取措施进行治疗，可提高治疗效果，降低死亡率，但为降低抗生素耐药性，需要了解病原体，制定合理有效的治疗方案，提高治疗效果。环介导等温扩增技术检测对病原体有着较高的灵敏度，且该检测方法操作简单，方便快捷，实验室操作人员技术要求较低，上手较快。同时环介导等温扩增技术的检测准确度相对较高，对社区获得性肺炎病原体检测有重要价值[5-6]。

实验结果表明，环介导等温扩增技术检测社区获得性肺炎患者病原体准确率较高，灵敏度与特异度也相对较高，铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等常见病原体检出率也相对较高。表明环介导等温扩增技术检测对社区获得性肺炎病原体的检测价值较高，准确性较高，值得作为常用检测方式，对治疗有重要意义，有望代替社区获得性肺炎病原体的传统检测方式。