地中海贫血产前基因诊断回顾性分析

朱丽秀 赖晓兰 林烨 汤一榕 陈琦 陈仁利 宋一凡 唐宝佳

【关键字】地中海贫血；产前；基因诊断；回顾性分析；突变；并发症

地中海贫血是一种南方常见的单基因遗传疾病，可以分为α型和β型地中海贫血这两种类型[1]。据统计，广东省携带α地中海基因的概率为8.53% ，而β型地中海贫血基因携带概率为2.54%[2]。对于重型α地中海贫血的患者也被称为是水肿胎，大多会在妊娠晚期死于子宫中，即便能够妊娠到十月也会出现短时间内死亡，而且妊娠妇女会合并多种并发症，包括产后大出血，高血压疾病，胎盘早剥等。因此，有必要进行产前诊断，能够有效预防重型地中海贫血患者的出生，是当前减轻疾病负担的主要方法。在本研究中通过对某医院进行产前诊断的1 500例α型地中海贫血患者以及650例β型地中海贫血患者的胎儿进行产前基因诊断，具体情况如下所示。

1 研究资料和方法

1.1 一般资料

在本研究中，我们通过对2016年1月—2019年1月在本院产前基因诊断进行地中海产前基因诊断的产妇，在产前基因诊断前需要明确夫妻双方的基因型，其α型地中海贫血产前诊断患者共计1 500例，β型地中海贫血产前基因诊断共650例。基因前诊断可以选妊娠中，不同于14周行绒毛穿刺活检，16周之后可以进行羊水穿刺，在产前诊断中穿刺手术能够排除母体组织污染，同时需要抽取母亲的2 mL外周血。

1.2 研究方法

采用DNA提取试剂盒，按照试剂盒的说明书完成DNA提取，采用复合荧光标记排除绒毛，羊水，组织污染。排除母体污染后完成相应的基因检测。在进行α型地中海贫血经检测过程中采用单管四PCR反应检测三种α珠蛋白基因，常见基因缺失性为--SEA，-α3、7，-α42。对于父母一方和双方存在突变的患者，可以采用裂隙PCR结合点杂交的方式，完成点突变检测。对于β型地中海贫血经检测过程中可以采用PCR和点杂交的方法检测人体中常见的17种β型地中海贫血，基因突变对于罕见突变可以采用DNA测序的方式完成基因诊断[3]。

2 研究结果

鉴定母体污染可以利用复合荧光标记以及血红蛋白电泳的方式[4]，对采集的产前基因诊断样本中，发现有3例绒毛标本存在中到重度母体组织污染的问题，不能进行产前基因诊断，最终符合标准的有2 150例标本，能够排除母体组织的污染，被列入本次研究范围中。

在1 500例α型地中海贫血基因诊断胎儿中，诊断重型胎儿水肿共计800例，312例静止型、164例轻型、224例中间型。所有的胎儿为水肿胎的妊娠，且在诊断后1周内完成终止妊娠。针对β型地中海贫血基因检测结果来看，在对650例β型地中海产前基因诊断，其中患儿诊断中重型β地中海贫血患儿共计174例，轻型为176例，中间型为300例，其中有3对夫妇一方β型地中海基因为罕见突变，因此在产前诊断过程中还需要完成DNA测序，测序结果检测中表明有2例突变IVS-II-2以及1例突变CD6，其余为常见突变基因型IVS-II-654/βA，所有的胎儿为重型β地中海贫血的妊娠在诊断1周后停止妊娠。通过基因检测，能够为产前诊断做准备。

针对中孕期（17～22周）进行羊水穿刺以获取胎儿细胞，通过基因检测明确胎儿是否存在α/β珠蛋白基因的缺失或者突变及类型，进而有效防止重型地中海贫血症或畸形患儿的出生。

3 讨论

在重型地中海贫血产前基因诊断过程中取材需要通过母体，因此可能会从一定程度上导致母体组织出现污染，进一步会影响产前基因诊断的准确性[7]。在本研究中，可以通过利用复合荧光标记STR技术来完成母体污染鉴定，该方法具有一定的可靠性和准确性。由于对于我国南方来说，很多地区为地中海贫血高发期，其中α型地中海贫血其主要是由于大片段基因缺失导致的，其中常见的三种基因缺失类型为大部分的分患者可以采用PCR的方式进行诊断，然而不能忽视出现点突变的[8]。α型地中海贫血症状，由于点突变引发的血红蛋白H病贫血症状相比缺失导致的血红蛋白病变程度更为严重，因此在产前基因诊断中需要明确夫妻双方的基因型，避免点突变α型地中海患者被漏诊[9]。当夫妇双方存在点突变时，需要结合PCR，PDR等多种方法进行共同分析。对于β型地中海贫血来说，主要是由于部分核苷酸缺失或者插入导致突变的。目前研究发现，β型地中海基因突变已超过两百多种，我国很多人β型地中海基因突变有34种，然而不同的地区人群有各自基因突变类型，利用披PCR和DNA测序方法，可以一次检测17种人体常见基因突变，而且该方法在国内遗传实验室中已经被实现广泛应用[10]。对于一些罕见疾病来说，应当同时结合PCR，PDR，基因测序的方法进行共同分析诊断，防止出现重型β地贫地中海贫血患者的漏诊问题，进一步说明在产前检查过程中对于地中海贫血筛查应当高度重视，是否存在β型地中海贫血，而采用常规的PCR方法无法检测到突变者，因此需要进行DNA的测序分析，防止出现罕见突变β型地中海贫血患者漏诊。在本研究中通过测序检出两种突变类型，分别是1例突变IVS-II-2以及1例突变CD6，其改变的是第六位密码子，将谷氨酸转变为甘氨酸，形成突变的血红蛋白，这种突变主要发生在黑色人种身上。而另一种突变目前相关报道较少。

羊水或者脐血穿刺，穿刺后得到标本中都是直接的胎儿的遗传物质，根据这个去做胎儿的染色体分析或者基因检测，这个准确性是目前最高的，是“金标准”[11]。但是它的劣势在于，都需要用细针穿过子宫肌层取得胎儿的遗传物质，穿刺的过程都存在一定的对胎儿损伤的风险。

通过地中海贫血产前诊断能够从一定程度上减少重型地中海贫血患儿的出生，以及减少水肿胎患儿出生，进一步对于指导优生优育，减少围生期过程中并发症的产生具有十分重要的作用[12]。在本研究中，通过分析地中海基因检测的经验，能够为进行基因遗传咨询和产前诊断起到重要的指导意义。