苦杏仁提取物乳剂的处方研究

陈坤，祁金玉，刘黎瑶,, 通信作者，王庆奎



苦杏仁提取物乳剂的处方研究

陈坤a，祁金玉a，刘黎瑶a,b, 通信作者，王庆奎b

（天津农学院a. 基础科学学院，b. 天津市水产生态及养殖重点实验室，天津 300384）

中药苦杏仁中含有苦杏仁苷等有效成分，小剂量口服给药之后具有止咳平喘的生物活性。结合乳剂给药剂型在药物递送方面的优势，将苦杏仁提取物制备成稳定的水包油型乳剂，并通过相关处方工艺筛选，得到了分散均一、稳定性良好的制剂。首先通过超声浸提法对苦杏仁中的有效组分进行提取，并将其减压浓缩，得到提取物浸膏；之后，以分散均一性、离心稳定性以及耐寒耐热性的综合评分结果为评价指标，通过正交设计法对油相、乳化剂以及稳定剂的用量进行筛选，确定了苦杏仁提取物乳剂的最优处方。该乳剂以中链油为油相，磷脂为乳化剂，西黄蓍胶为稳定剂，优选处方下，油相、磷脂以及西黄蓍胶的质量比例（/）分别为30.0%、1.5%以及1.2%。根据筛选得到的优选处方，制备得到的苦杏仁提取物乳剂稳定性良好，分散均一，为中药提取物的新剂型研究及应用奠定了基础。

苦杏仁提取物；正交设计；乳剂；处方筛选

通常，药用杏仁大多数为苦杏仁，其有效成分主要为苦杏仁苷[1-2]。在适宜条件下，苦杏仁苷能够水解得到微量的氢氰酸，具有镇静呼吸中枢，发挥止咳平喘的药用功能[3]。在传统应用中，一般使用苦杏仁经水煎之后的粗提制剂进行给药，味道苦涩，导致患者顺应性不佳。近年来，随着中药新剂型的发展，出现了大量以中药提取物为主药形式的新式给药剂型[4]，而乳剂即是其中的主要代表剂型。乳剂具有使用方便、易于掩饰苦涩味道的优势，并且能够促进其中有效成分的口服吸收[5]，但目前尚未查阅到苦杏仁提取物相关的制剂学研究。在本研究中，首先通过超声浸提法得到苦杏仁提取物的有效组分浸膏[6]，之后，以分散均一性、离心稳定性以及耐寒耐热性的综合评分结果为评价指标[7]，通过正交设计，考察油相用量、乳化剂用量以及稳定剂用量对于乳剂成型性的影响，确定将苦杏仁提取物制备成乳剂的最优工艺处方。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

电子天平（Sartorius，BSA 223S）；超声波清洗仪（昆山禾创仪器有限公司，KH5200B型）；高速剪切机（德国IKA超高速高剪切乳化分散机，T18）；紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；低速离心机（长沙湘仪仪器有限公司，L550）；高速粉碎机、恒温水浴锅等。

1.2 试药

中药苦杏仁饮片（北京同仁堂大药房，产地：河北承德）；苦杏仁苷标准品（中国药品生物制品检定院，HPLC≥98%）；中链油（新兴（铁岭）药业股份有限公司）；大豆磷脂（德国Lipoid S75，分析纯）、西黄蓍胶（G.L.B England，进口分装，分析纯，批号041328）；石油醚、柠檬酸钠（天津市风船化学试剂有限公司，分析纯）；其他试剂均为分析纯。

2 试验方法

2.1 苦杏仁提取物的提取方法

称取适量干燥至恒重的苦杏仁饮片，使用高速粉碎机粉碎，留碎粉待用。参考文献报道，在超声辅助条件下对苦杏仁碎粉进行溶剂浸提[6]。具体操作方法为：称取30 g苦杏仁碎粉置于250 mL三角瓶中，加入150 mL 石油醚，磁力搅拌24 h脱去油脂。之后，抽滤，取滤饼，加入150 mL 4%柠檬酸钠溶液，在80 ℃水浴条件下进行超声提取30 min，冷却后将滤液在4 000 r/min条件下离心20 min，取上清液进行减压浓缩，至提取物质量浓度约为1 g/mL，作为苦杏仁提取物浸膏液，密封于4 ℃条件下，备用。

2.2 苦杏仁提取物中苦杏仁苷含量的测定[8]

2.2.1 标准曲线绘制

准确称量10 mg苦杏仁苷标准品置于容量瓶中，加入4%柠檬酸钠溶液溶解并定容至100 mL，得到质量浓度为100 μg/mL的储备液。使用移液管移取适量储备液，使用4%柠檬酸钠溶液稀释并定容，得到质量浓度为10、30、50、80、100 μg/mL的系列梯度浓度标准溶液。通过紫外分光光度法测定上述系列标准溶液在220 nm波长处的吸光度，以质量浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线并拟合线性回归方程。

2.2.2 精密度测定

取低、中、高质量浓度的标准溶液连续进样5次，测定其在220 nm波长下的吸光度，记录吸光度数值，计算相对标准偏差（）。

2.2.3 加样回收率测定试验

精密量取已知苦杏仁苷含量的提取物浸膏，加入适量苦杏仁苷标准品，并使用质量浓度为0.04 g/mL柠檬酸钠溶液稀释定容，使得其中外加苦杏仁苷质量分别为10、50、100 μg。经微孔滤膜过滤之后，通过紫外分光光度法，测定续滤液在220 nm波长下的吸光度，通过线性回归方程，计算苦杏仁苷标准品的加样回收率。

2.2.4 提取物中苦杏仁苷含量测定

量取适量苦杏仁提取物浸膏至容量瓶中，使用质量浓度为0.04 g/mL柠檬酸钠溶液稀释定容。经微孔滤膜过滤之后，通过紫外分光光度法，测定续滤液在220 nm波长下的吸光度，使用标准曲线的回归方程，计算苦杏仁苷含量。

2.3 苦杏仁提取物乳剂的处方研究

2.3.1 处方筛选

根据相关文献[9]和前期试验结果，在本研究中，以中链油为油相，大豆磷脂为乳化剂，西黄蓍胶为稳定剂。通过前期单因素试验结果，发现上述3种主要辅料的用量对于乳剂的成型性影响较大，因此，拟通过三因素三水平（L9，34）的正交设计，对油相、大豆磷脂以及西黄蓍胶进行用量筛选。正交设计因素水平表如表1所示。

表1 正交设计因素水平表 %

2.3.2 考察指标及评价方法

在处方筛选过程中，通过分散均一性、离心稳定性以及耐寒耐热性作为评价指标[7]，按照表2中的评分方法进行评分。各项考察指标的评价方法如下：

（1）分散均一性评价。取适量样品置于透明离心管中，静置24 h，观察其外观均一性，是否发生自然分层，记录结果并评分。

（2）离心稳定性评价。称取各处方下的乳剂样品1 g，置于透明离心管中，于4 500 r/min条件下离心30 min，观察是否发生油水分离现象，记录结果并评分。

（3）耐寒性评价。称取各处方下的乳剂样品各1 g，置于透明离心管中，置于-20 ℃条件下静置24 h，观察是否发生油水分离现象，记录结果并评分。

（4）耐热性评价。取各处方下乳剂样品各1 g，置于透明离心管中，于60 ℃恒温箱中静置24 h，观察是否发生油水分离的现象，记录结果并评分。

综合上述4项评价的得分，作为处方考察的最终综合评分。

表2 各项考察指标评分方法表

2.4 制备方法

根据正交设计方法得到的各处方剂量，通过乳化法来制备苦杏仁提取物乳剂，为保证平行可比性，使得各个处方的制备总量相同，且其中提取物浸膏的加入量也保持一致（均为1 g/处方）。首先取处方量的大豆油，向其中加入处方量的大豆磷脂，超声分散均匀，作为油相待用。另取适量蒸馏水，向其中加入处方量的西黄蓍胶，搅拌至分散均匀；向其中加入1 g浸膏液，作为水相待用。在高速剪切分散条件下（10 000 r/min），将油相滴加至水相中。滴加结束后，继续保持匀速搅拌高速剪切分散15 min，即得。

2.5 稳定性考察

在优选处方设计下，制备3批苦杏仁提取物乳剂，分别对其分散均一性、离心稳定性以及耐寒耐热性进行评价。并于4 ℃条件下密封放置0、1、2个月，对该优选处方的长期放置稳定性进行初步评价。

3 结果与分析

3.1 苦杏仁提取物中苦杏仁苷含量的测定

3.1.1 标准曲线绘制

按照既定试验方法，配制不同质量浓度苦杏仁苷标准品系列溶液，采用紫外分光光度法测定标准曲线。结果表明：以吸光度（纵坐标，）对质量浓度（μg/mL，横坐标，）进行线性回归，回归方程为＝0.007 9＋0.011 3（2＝0.999 4）。线性测定结果表明，在既定测定方法下，苦杏仁苷标准品系列溶液质量浓度在10～100 μg/mL范围内线性关系良好（图1）。

图1 苦杏仁苷系列溶液标准曲线

3.1.2 精密度测定

对低、中、高质量浓度的苦杏仁苷标准品溶液的精密度测定结果如表3所示。表3表明，对上述溶液分别连续重复5次测定，值均小于2%，表明测定方法的精密度良好。

表3 精密度测定结果

3.1.3 加样回收率测定

依法对苦杏仁苷对照品进行加样回收率测定，结果如表4所示。试验结果表明，在既定测定方法下，低、中、高质量浓度样品的回收率均大于95%，且平均回收率的值均小于2%，表明既定测定方法的回收率合格。

表4 加样回收率测定结果

3.1.4 提取物中苦杏仁苷含量测定

使用超声辅助浸提法对苦杏仁中有效组分进行提取，提取的苦杏仁苷量为14.19 mg/mL。

3.2 苦杏仁提取物乳剂的处方研究

通过三因素三水平（L9，34）的正交设计，以分散均一性、离心稳定性及耐寒耐热性评价的综合评分作为评价指标，对油相、乳化剂（大豆磷脂）以及稳定剂（西黄蓍胶）的用量进行了正交筛选，得出制备苦杏仁提取物乳剂的最佳处方，正交分析评价结果如表5所示。

表5 乳剂处方筛选的正交评价结果

表5表明，在影响该乳剂成型性的主要因素中，乳化剂对于乳剂成型性的影响程度较大，而油相比例与稳定剂用量之间的极差差异较小，表明相关影响权重较小。通过正交设计的极差分析，得出最优处方为：油相用量为30.0%，乳化剂大豆磷脂用量为1.5%，稳定剂西黄蓍胶用量为1.2%。

3.3 初步放置稳定性评价

苦杏仁提取物放置稳定性评价结果如表6所示。结果表明，优选处方下，制备的3批苦杏仁提取物乳剂中苦杏仁苷含量为（0.142±0.07）%，外观分散均匀，耐寒耐热性评价结果良好，离心稳定性良好，于4 500 r/min条件下离心30 min，未发生发生油水分离等不良现象。

表6 苦杏仁提取物乳剂的放置稳定性评价（4 ℃）

将所制备的苦杏仁提取物乳剂置于4 ℃条件下进行放置稳定性评价，结果表明：上述3批样品放置2个月以内的稳定性良好，苦杏仁苷含量、分散程度、离心稳定性以及耐寒耐热性均未发生显著变化。

4 结论

在本研究中，首先通过超声浸提法对苦杏仁中的有效组分进行提取，并将其减压浓缩，得到提取物浸膏，使用紫外分光光度法测定其中苦杏仁苷含量为14.19 mg/mL。之后，以分散均一性、离心稳定性以及耐寒耐热性的综合评分结果为评价指标，通过正交设计法对油相、乳化剂以及稳定剂的用量进行筛选，确定了苦杏仁提取物乳剂的最优处方。该乳剂以中链油为油相，磷脂为乳化剂，西黄蓍胶为稳定剂，优选处方下，油相、磷脂以及西黄蓍胶的质量比例分别为30.0%、1.5%以及1.2%。利用筛选出的优选处方制备得到的3批苦杏仁提取物乳剂稳定性良好，为中药提取物的新剂型研究及应用奠定了基础。

5 讨论

5.1 乳化剂种类的选择

在口服乳剂的乳化剂选择中，应选择具有较强乳化能力的天然乳化剂，并在保证乳剂性质稳定的前提下，应尽量减少乳化剂的加入量[10-12]。因此，根据文献报道以及前期预试验结果，选择了天然乳化剂中乳化能力最强的大豆磷脂。试验结果表明大豆磷脂的乳化效果非常出色，仅需1.5%的加入量即可获得均匀分散、性状稳定的乳剂，比阿拉伯胶等其他天然乳化剂的乳化效力高出约10倍。

5.2 稳定剂种类的选择

在苦杏仁提取物普通口服乳剂（水包油型乳剂）制备过程中，由于外水相黏度较低，若直接加入乳化剂，极易出现油水分离现象。因此，选择加入稳定剂来调节外水相的黏度，根据文献[13-15]以及预试验结果，认为西黄蓍胶的黏度符合本乳剂制备的相关黏度参数，故向水相中加入西黄蓍胶，使其均匀分散以增加水相的黏稠度，继而提高乳剂的稳定性。

5.3 中药提取物乳剂处方的进一步优化

在传统中药新剂型研究中，中药提取物乳剂是非常重要的一种剂型。因此，本研究的处方筛选在一定程度为中药新剂型研究奠定了基础。通过引入制剂学的优势，来实现中药有效成分的高效递送，是极具研究意义和价值的[9]。在本研究中，通过将中药苦杏仁提取物有效成分制备为稳定的乳剂，能够掩蔽中药的异味，提高口服顺应性。但是，在实践过程中，由于乳剂中含丰富的油脂，且使用了天然乳化剂，导致预试验中所制备的乳剂在不同程度上发生霉变，提示在后期处方研究中，应注意乳剂防腐方面的问题[16]，进一步优化处方，以期得到性质更加稳定的苦杏仁提取物乳剂。

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责任编辑：宗淑萍

Emulsion formulation optimization of extracts from

CHEN Kuna, QI Jin-yua, LIU Li-yaoa,b, Corresponding Author, WANG Qing-kuib

（Tianjin Agricultural University, a. College of Basic Science, b. Tianjin Key Lab of Aquatic Ecology and Aquaculture, Tianjin 300384, China）

Amygdalin is abundant in effective extracts fromwith bioactivities of relieving cough and asthma through oral administration in lower dose. Combining advantages of emulsion in drug delivery, homogeneous and stable water-in-oil type emulsion was established successfully after relevant formulation optimization. In this study, effective extracts were acquired through ultrasonic extraction firstly. Afterwards, comprehensive scoring of homogeneity, centrifugal stability and cold/heat resistance were set as the evaluation indicators in orthogonal screening. And optimal proportion of oil phase, emulsifier and stabilizer were obtained for the preparation ofextracts emulsion. In the optimal formulation, medium-chain triacylglycerol was used as the oil phase and soybean lecithin was chosen as emulsifier with the mass percentage of 30% and 1.5% respectively. Moreover, tragacanth was added as stabilizer with addition amount of 1.2%. Under the optimal formulation, 3 batches ofextracts emulsion were prepared with favorable stability and homogeneity. This study provides the basis for further application ofextracts emulsion.

extracts; orthogonal screening; emulsion; formulation screening

1008-5394（2018）04-0058-05

10.19640/j.cnki.jtau.2018.04.013

P641.131；S152.72

A

2018-05-09

天津市教委科研计划项目（2017KJ181）；天津市水产产业技术体系创新团队项目（ITTFRS2017004）

陈坤（1995-），女，本科在读，研究方向：中药新剂型研究。E-mail: 861519782 @qq.com。

刘黎瑶（1988-），女，讲师，博士，主要从事药物制剂方面的研究。E-mail: llymeilin@163.com。