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芝麻油灌肠对大鼠溃疡性结肠炎疗效的实验研究

2019-01-15高言国陈金林张月秋邓兆滨

中国医学创新 2019年35期
关键词:超氧化物歧化酶芝麻油丙二醛

高言国 陈金林 张月秋 邓兆滨

【摘要】 目的:研究芝麻油(SO)灌腸对大鼠溃疡性结肠炎(UC)的治疗作用。方法:25只健康SD雄大鼠按随机数字表法分为空白对照组(NC组)、空白对照+SO组(NC+SO组)、模型组(M组)、模型+低剂量SO组(M+SO1组)及模型+高剂量SO组(M+SO2组),每组5只。M组、M+SO1组、M+SO2组建造UC模型。M+SO1组结肠灌注SO 0.5 mL/100 g;NC+SO组与M+SO2组结肠灌注SO 1 mL/100 g;NC组与M组予以食用植物油灌肠0.5 mL/100 g。观察并比较肠黏膜损伤评分及病理表现,比较超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)。结果:M组病理表现为出现明显的炎症反应,隐窝出现破坏现象,说明建模成功。M组结肠损伤评分高于NC组(P<0.01);M+SO1组与M+SO2组结肠损伤评分均低于M组(P<0.01);NC+SO组结肠损伤评分高于NC组(P<0.05)。M组中MDA含量高于NC组,而SOD含量低于NC(P<0.01);M+SO1组与M+SO2组的MDA含量均低于M组(P<0.01);M+SO1组与M+SO2组的SOD含量均高于M组(P<0.01)。结论:SO可通过提高UC大鼠结肠组织抗氧化能力抑制炎症反应,发挥治疗作用。

【关键词】 芝麻油 溃疡性结肠炎 超氧化物歧化酶 丙二醛

[Abstract] Objective: To explore the effect of sesame oil (SO) on ulcerative colitis (UC) in rats. Method: A total of 25 healthy SD male rats were divided into blank control group (NC group), blank control+SO group (NC+SO group), model group (M group), model+low dose SO group (M+SO1 group) and model+high dose SO group (M+SO2 group) according to the random number table method, 5 rats in each group. M group, M+SO1 group, M+SO2 group were used to construct the UC model. M+SO1 group was given SO enema 0.5 mL/100 g. NC+SO group and M+SO2  group were given SO enema 1 mL/100 g. NC group and M group were given vegetable oil enema 0.5 mL/100 g. The intestinal mucosa injury score and pathological manifestations were observed and compared. Superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) were compared. Result: M group showed obvious inflammatory reaction and destruction of crypt, indicating successful modeling. The intestinal mucosa injury score in M group was higher than that in NC group (P<0.01). The intestinal mucosa injury score of M+SO1 group and M+SO2 group were lower than that of M group (P<0.01). The intestinal mucosa injury score of NC+SO group was higher than that in NC group (P<0.05). MDA content in M group was higher than that in NC group, while SOD content in M group was lower than that in NC group (P<0.01). The MDA content of M+SO1 group and M+SO2 group were lower than that of M group (P<0.01). The SOD content of M+SO1 group and M+SO2 group were higher than that of M group (P<0.01). Conclusion: SO can play a therapeutic role by improving the antioxidant capacity of UC rats colonic tissues and inhibiting inflammatory response.

[Key words] Sesame oil Ulcerative colitis SOD MDA

First-authors address: The Affiliated Xinhua Hospital of Dalian University, Dalian 116021, China

doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2019.35.003

溃疡性结肠炎(UC)又称非特异性潰疡性结肠炎,临床主要表现为腹痛、腹泻、黏液脓血便和里急后重等。该病无特效治疗,导致病情迁延反复,甚至癌变,严重影响患者的身心健康,随着其发病率的逐渐增高,受到国内外学者的更多关注[1]。目前,临床上5-氨基水杨酸、糖皮质激素及免疫抑制剂等药物的疗效不能完全达到预期的效果[2]。芝麻油(SO)主要药效成分是芝麻素,研究发现芝麻素具有调节血脂、抗氧化、调节免疫功能及消除对机体免疫细胞有害因素等诸多作用[3]。国外研究表明服用SO能通过抑制肠道炎症反应、酸性粘蛋白分泌和纤维化而加快炎症肠病的愈合,SO中的芝麻酚具有抗氧化、抑制炎症反应、清除自由基活性等,对UC的肠黏膜起着重要的作用[4-6]。对于肢体外伤的患者局部外用涂抹芝麻油可以减轻疼痛程度和减少NSAIDs药物应用次数[7-8]。芝麻油外用可以减轻化疗和胺碘酮导致的静脉炎以及应用口腔护理方面,但SO未见对外用治疗灌肠UC的研究[9-11]。本文将探究SO灌肠对溃疡性结肠炎的治疗效果及可能的作用机制,现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料、仪器与试剂 健康SD雄大鼠25只,体重220~260 g,由大连大学实验动物中心提供,动物室保持12 h昼夜循环,室温控制在19~29 ℃,湿度40%~70%,大鼠自由摄取水和标准颗粒食物。BDY-2型恒压恒流电泳仪:上海博通医用仪器厂产品;雷弗BT100S恒流泵:保定雷弗流体科技有限公司产品;GF-1型时调速式高速分散器:江苏海门麒麟医用仪器厂产品;电泳仪及玻璃板:大连竞迈生物科技有限公司(中国辽宁)Thermo 354酶标仪:Thermo Scientific(美国);试剂:芝麻油,来自中粮集团有限公司;2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS),来自美国Sigma公司,含量≥99%;丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)测定试剂盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)试剂盒(均购自南京建成生物工程研究所)。

1.2 方法 动物模型建立:25只健康SD雄大鼠按随机数字表法分为空白对照组(NC)、空白对照+SO组(NC+SO组)、模型组(M组)、模型+低剂量SO组(M+SO1组)及模型+高剂量SO组(M+SO2组),每组5只。M组、M+SO1组、M+SO2组在乙醚麻醉状态下,单次结肠灌注120 mg/kg TNBS乙醇溶液。治疗方法:入组后第2天予以灌肠处置,NC+SO组、M+SO1组及M+SO2组于第2~14天芝麻油灌肠 2次/d,M+SO1组结肠灌注SO 0.5 mL/100 g;NC+SO组与M+SO2组结肠灌注SO 1 mL/100 g,NC组、M组于第2~14天予以食用植物油灌肠0.5 mL/100 g,2次/d。第15天处死大鼠,获取结肠组织。取距肛门6~8 cm处损伤最严重的结肠组织,其中0.5 cm病变肠组织以4%甲醛固定,常规石蜡切片,HE染色和光镜检查;另取湿重约200 mg组织,剪碎制成10%的组织匀浆,离心10 min,取上清液,按照ELISA试剂盒测定MDA和SOD。

1.3 观察指标与评价标准 (1)比较肠黏膜损伤指数评分及病理表现。根据肉眼观察及临床症状综合评定,用损伤指数表示,具体方法参见Wallce的报道。溃疡情况:正常为0分;充血无溃疡为1分;一处溃疡为2分;两处溃疡为3分;溃疡长度经累计>1 cm的为4分;累计>2 cm为5分。腹泻情况:无腹泻为0分;有腹泻为1分。(2)比较M组、M+SO1组与M+SO2组中MDA与SOD含量。MDA与SOD含量采用ELISA测定,按试剂盒说明书操作。

1.4 统计学处理 采用SPSS 11.5软件对所得数据进行统计分析,计量资料用(x±s)表示,组间比较采用独立样本t检验,组内比较采用配对t检验;计数资料以率(%)表示,比较采用字2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结肠损伤评分及表现比较 M组表现为出现明显的炎症反应,隐窝出现破坏现象。NC组结肠损伤评分为0分,M组结肠损伤评分为(4.41±0.81)分,M组结肠损伤评分高于NC组,差异有统计学意义(P<0.01)。M+SO1组结肠损伤评分为(2.34±0.75)分,M+SO2组结肠损伤评分为(1.98±0.99)分,M+SO1组与M+SO2组结肠损伤评分均低于M组,差异均有统计学意义(P<0.01)。NC+SO组结肠损伤评分为(0.83±0.41)分。NC+SO组结肠损伤评分高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

2.2 不同剂量SO对溃疡性结肠炎大鼠肠组织的MDA、SOD的影响 NC组中MDA含量为(0.84±0.14)U/mg,SOD组的含量为(57.61±10.22)nmol/mg。M组中MDA含量为(2.92±0.56)U/mg,SOD的含量(31.00±5.63)nmol/mg。M组中MDA含量高于NC组,而SOD含量低于NC组,差异均有统计学意义(P<0.01)。M+SO1组中MDA含量为(1.79±0.26)U/mg,M+SO2组中MDA含量为(0.99±0.18)U/mg。M+SO1组与M+SO2组的MDA含量均低于M组,差异均有统计学意义(P<0.01)。M+SO1组中SOD含量为(44.97±4.98)nmol/mg,M+SO2组中SOD含量为(54.64±9.88)nmol/mg。M+SO1组与M组+SO2的SOD含量均高于M组,差异均有统计学意义(P<0.01)。见图2。

3 讨论

芝麻油与其他食用油相比具有独特的强大的抗氧化能力和抑制炎症反应性质,强大的抗氧化活性主要因为芝麻中木脂素类物质(含量0.5%~1.0%),包括芝麻素、芝麻林素、芝麻酚所发挥的作用,芝麻中的木酚脂素类和生育酚类等抗氧化性物质能有效地清除细胞内的自由基,阻止其引发的细胞膜内不饱和脂质的过氧化反应[12-14]。UC是一种慢性复发性的非特异性肠道炎症,其确切病因和发病机制尚不明确,一般认为与遗传、免疫、感染和精神心理因素等有关,其发病机制复杂,多种因素、多种成分参与了UC的发病过程[15]。近年研究发现氧自由基在UC的发病机制中起重要作用,体内氧自由基还参与脂质过氧化反应并产生脂质过氧化物,通过检测MDA来反映脂质过氧化物程度,间接评价细胞、组织受损程度,并且SOD能有效地清除氧自由基从而抑制肠组织中的脂质过氧化反应并能稳定细胞膜,SOD活性是反映细胞膜功能和机体抗炎症反应的主要指标[16-18]。

本研究表明,芝麻油灌肠后,大鼠出现一定腹泻现象,相对于NC组,具有一定的副作用出现,但是芝麻素可以显著降低UC大鼠肠组织的SOD,增加MDA水平,从而抑制大鼠肠黏膜氧化应激和炎性反应,且这种促进作用与芝麻素呈剂量依赖关系。而随着芝麻素用量加大,组织髓过氧化物酶活力降低,说明芝麻素具有抗炎作用,并且有研究证实芝麻素可以提高SOD活性等作用达到抗氧化作用。M组中MDA含量高于NC组,而SOD含量低于NC组(P<0.01),说明UC模型大鼠结肠组织自由基清除能力下降,而给予不同剂量芝麻油后大鼠结肠组织中MDA水平均降低,SOD活力升高,机体的抗氧化能力提高,减少机体的过氧化损伤,从而减轻结肠损伤及炎症反应。有研究表明芝麻素具有抗菌作用,而且芝麻中尿囊素还具有保护修复消化道黏膜以及止痛作用,这些因素也可能在治疗上起一定作用,但是需要进一步研究[19-20]。

综上所述,芝麻油具有较强的抗氧化活性,可以降低组织中MDA水平,提高SOD活性,减轻自由基和脂质过氧化作用对肠组织的损伤,从而对TNBS所造成的结肠炎发挥治疗作用,为芝麻油用于UC的防治提供理论依据。

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(收稿日期:2019-07-16)(本文编辑:田婧)

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