复方薄荷柳酯搽剂的质量标准研究

周震宇，许 奇

(苏州市药品检验检测研究中心，苏州 215014)

复方薄荷柳酯搽剂又名清凉止痒水，是OTC乙类皮肤外用制剂，具有清凉、消炎、止痒、消肿和止痛的作用，临床用于皮炎、痱子、皮肤瘙痒等皮肤病，疗效显著。其质量标准[1]较为简单，未对有效成分进行含量测定。该搽剂的主药成分有薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯和桉油精等。薄荷脑是从薄荷的叶和茎中提取，其含量可用GC法测定[2-4]；樟脑是萜类化合物，室温下为白色或透明的蜡状固体，其含量测定也可用GC法[5]；水杨酸甲酯和桉油精分别是冬青油和桉叶油的主要成分，水杨酸甲酯的检测方法通常为液相色谱法[6-7]，而桉油精则在《中国药典》中有专属的检测方法[8]。有文献报道，使用毛细管气相色谱法，能对其主药成分中的2或3种成分进行含量测定[9-14]，但未见文献报道能同时测定4种主要成分的含量。笔者采用毛细管气相色谱法同时测定薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯和桉油精的含量，该方法操作简便，定量准确，结果满意。

1 仪器与试药

1.1仪器 Agilent 7890B气相色谱仪，EZ Chrome软件控制仪器和数据采集(美国安捷伦公司)；XS205DU电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)；TGH-300氢气发生器(苏州市莱顿科学仪器有限公司)；LGA-5000W空气压缩机(上海市安谱科学仪器有限公司)。

1.2试药 复方薄荷柳酯搽剂(江苏省苏州市常熟星海制药有限公司，批号：20160501，20160502和20160503)；对照品：薄荷脑(批号110728-200506)，樟脑(批号110747-201409)，水杨酸甲酯(批号110707-201413)和桉油精(批号110788-201506)，均由中国食品药品检定研究院提供；萘(内标)(批号40035561，国药集团化学试剂有限公司)；无水乙醇为色谱纯(德国默克公司)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Agilent DB-WAX毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm，0.50 μm)，分流进样，分流比为5∶1；载气为N2；流速为2.0 mL·min-1；空气流速为400 mL·min-1；氢气流速为40 mL·min-1；检测器为FID；进样口温度为160 ℃，检测器温度为210 ℃；程序升温：起始温度为100 ℃，保持4 min，以50 ℃·min-1速率升温到200 ℃，维持7 min；进样量为1.0 μL，分析时间为13 min。在上述色谱条件下，各组分的理论塔板数均不低于30 000，各待测组分与相邻峰分离度均大于1.5，色谱图见图1。

2.2溶液的制备

2.2.1混合对照品溶液 分别精密称取薄荷脑对照品、樟脑对照品、水杨酸甲酯对照品和桉油精对照品243.62，100.14，102.87和101.19 mg，置于同一100 mL量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，得薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯和桉油精质量浓度分别为2.436 2，1.001 4，1.028 7 和1.011 9 mg·mL-1的混合对照品溶液，置于4 ℃冰箱中保存，备用。

2.2.2内标溶液 精密称取萘100.21 mg，置于100 mL量瓶中，用无水乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为1.002 1 mg·mL-1的溶液。

2.2.3对照品溶液 精密量取2.2.1项下制备的混合对照品溶液10 mL，置于100 mL量瓶中，精密量取2.2.2项下制备的内标溶液10 mL，置于同一量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4供试品溶液 精密量取复方薄荷柳酯搽剂2 mL，置于100 mL量瓶中，精密量取2.2.2项下制备的内标溶液10 mL，置于同一量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，再用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.2.5阴性样品溶液 根据处方比例制备不含薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯和桉油精的阴性样品，按照2.2.4项下制备方法制成阴性样品溶液，按照2.1项下色谱条件进样测定，结果表明，阴性样品无干扰，见图1。

2.3线性关系、检出限与定量限 分别精密量取2.2.1项下制备的混合对照品溶液2，4，10，14和20 mL，分别置于5个100 mL量瓶中，在上述各量瓶中精密加入内标溶液10 mL，再用无水乙醇稀释至刻度，摇匀；按照2.1项下色谱条件对系列对照品溶液进行测定，分别以薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯和桉油精的质量浓度为横坐标(x)、薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯和桉油精与内标峰面积的比值为纵坐标(y)，绘制标准曲线，回归方程及线性范围见表1。另将混合对照品溶液逐级稀释至一定质量浓度，以仪器的信噪比S/N为10时测定定量限，信噪比S/N为3时测定检出限，见表1。结果表明，4种主药成分化合物均呈良好的线性关系。

图1GC图

A.薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯和桉油精混合对照品；B.复方薄荷柳酯搽剂样品；C.阴性样品；1.桉油精；2.樟脑；3.薄荷脑；4.萘；5.水杨酸甲酯。

Fig.1 GC chromatograms

A.mixed standards of menthol，camphor，methylsalicylate and eucalyptol；B.sample of Fufang Boheliuzhi Liniment;C.negative sample；1.eucalyptol；2.camphor；3.menthol；4.naphthalene；5.methylsalicylate.

表14个主药成分化合物的回归方程及线性范围

Tab.1 Regression equations and linear ranges of the 4 main compounds

成分回归方程r线性范围/μg·mL-1定量限/ng检出限/ng薄荷脑y1=0.007 9x1-0.004 40.999 948.72^487.240.30.1樟脑y2=0.007 9x2+0.004 50.999 920.03^200.280.20.1水杨酸甲酯y3=0.005 2x3+0.002 70.999 920.57^205.740.40.1桉油精y4=0.007 5x4+0.010 40.999 620.24^202.390.50.2

2.4精密度实验 精密吸取2.2.1项下制备的混合对照品溶液，连续进样6次，测定各组分峰面积，计算RSD值，结果符合精密度实验的要求，说明该仪器精密度良好。见表2。

2.5重复性实验 取同一批样品(批号20160501)，按照2.2.4项下方法制备供试品溶液，平行操作6份，制得样品溶液，按照2.1项下色谱条件进行测定，计算4种主药成分含量的RSD值，见表2，薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯和桉油精的平均含量分别为100.5%，98.8%，96.4%和82.9%，表明该方法重复性良好。

2.6稳定性实验 取同一供试品溶液，按照2.1项下色谱条件，在0，2，4，8，12和16 h进行测定，各组分的RSD值见表2，结果表明，供试品溶液在16 h内稳定。

表24种主药成分精密度、重复性和稳定性的实验结果

Tab.2 Results of the precision，repeatability and stability of the 4 main components

成分RSD/%精密度重复性稳定性薄荷脑0.480.341.93樟脑0.130.170.79水杨酸甲酯0.230.130.71桉油精0.650.411.44

2.7回收率实验 精密量取已知含量的样品(批号20160503)1 mL，共9份，分别置于100 mL量瓶中，按照低、中和高3个质量浓度分别精密加入混合对照品溶液4，5和6 mL，按照2.2.4项下方法制备供试品溶液，按照2.1项下色谱条件进行测定，测定3组质量浓度共9份样品，计算回收率，结果见表3。

表34种主药成分回收率的实验结果

Tab.3 Results of the recovery test of the 4 main components (n=9)

成分样品中含量/mg加入量/mg测定量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%薄荷脑12.199.7522.10101.66101.903.3012.199.7521.95100.1312.199.7521.95100.1712.1912.1824.57101.6312.1912.1824.47100.8112.1912.1824.48100.8712.1914.6228.38110.7312.1914.6226.89100.5612.1914.6226.88100.51樟脑4.924.018.94100.27100.241.704.924.018.9299.894.924.018.93100.164.925.019.98101.114.925.019.8598.444.925.019.8498.164.926.0111.19104.084.926.0110.9399.974.926.0110.93100.04水杨酸4.844.119.00101.10100.611.65甲酯4.844.118.99100.764.844.118.99100.864.845.149.98101.014.845.149.9098.354.845.149.8998.184.846.1711.25103.874.846.1711.05100.624.846.1711.06100.73桉油精4.054.058.0298.1097.321.334.054.058.0298.034.054.058.0298.184.055.068.9095.904.055.068.9095.804.055.068.9195.824.056.079.9196.494.056.0710.0498.714.056.0710.0598.85

2.8含量测定 取样品3批，精密量取2 mL，按照2.2.4项下方法制备供试品溶液，按照2.1项下色谱条件进行测定，以内标法计算含量，结果见表4。

表4复方薄荷柳酯搽剂中4种主药成分的含量

Tab.4 The contents of the 4 main components in Fufang Boheliuzhi Liniment (n=3)

成分不同批号搽剂中的含量(标示量)/%201605012016050220160503薄荷脑100.5100.1101.6樟脑98.897.998.4水杨酸甲酯96.496.496.8桉油精82.981.581.0

3 讨论

分别选用正十六烷、正三十二烷、环己酮和萘作为内标物，综合其沸点和出峰情况等因素，最后选定萘为最佳内标物，且供试品溶液在萘峰的位置上没有出现色谱峰，不存在干扰。内标法测定使结果更加准确。

当柱温低时，样品中的其他挥发性成分保留时间太长；当柱温高时，桉油精与溶剂峰不能有效分离。经过摸索和优化，采用色谱柱程序升温测定，分离效果好，分析时间合适；同时优选Agilent DB-WAX毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm，0.50 μm)，比较HP-INNOWAX、OV-17和HP-5等毛细管色谱柱；结果表明，本文中的方法适用于HP-INNOWAX，而使用OV-17和HP-5的毛细管色谱柱并不能将各主药成分有效分离。

实验结果表明，采用文中介绍的毛细管气相色谱法能够同时测定薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯和桉油精的含量，且该方法简便、准确，有利于制剂的质量控制。本文所述方法，较之填充柱气相色谱法[15]，无论是理论塔板数还是分离度都有显著的提高，分析时间也更短，更有利于定性定量分析。

处方中含有桉叶油。桉叶油是一种无色油状液体，其主要成分是桉油精[16-20]。因此，桉油精的含量可通过桉叶油的标示量进行计算，桉叶油的质量控制标准可通过桉油精的含量来体现。

综上所述，笔者建议对现行的执行标准进行修订，使用毛细管气相色谱法进行定性鉴别和含量测定，薄荷脑、樟脑和水杨酸甲酯的限度定为标示量90.0%～110.0%，桉油精的限度定为不少于桉叶油标示量的70%[21]。