药敏检测试剂盒产品安全有效性研究

李风梅 张龚敏 吴林蔚 广东省药品监督管理局审评认证中心 （广东 广州 510080）

内容提要： 根据《体外诊断试剂注册管理办法》《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》及《免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评价资料基本要求（试行）》等的要求，对药敏检测试剂盒的性能指标、临床评价等方面进行研究分析。

随着医学的日益发展进步，疾病治疗中如何合理使用抗生素，进而达到有效减少或避免耐药菌株的产生，已成为现今卫生领域的一大重要任务。故而临床上在控制患者感染时，实验室诊断中抗菌药物敏感性试验的结果至关重要。药敏检测不但可以直接指导患者用药，预测抗菌药物治疗效果的好坏，亦可评估耐药菌感染的一些流行病学特征，从而为控制及预防耐药菌的流行扩散提供应对措施[1]。

目前临床诊断实验室多采用自动化药敏分析系统进行药敏检测，相比传统的手工法，自动化操作的重现性、检测结果的准确性及可靠性都得到了大幅提升。进而，市场上大量自动化药敏分析系统应运而生。

一般而言，药敏控制系统包括药敏检测试剂盒及其配套的微生物鉴定药敏分析仪器两部分。本文结合注册技术审评的要求，对自动化药敏分析系统中药敏检测试剂盒的安全有效性进行研究[2]。

1.性能要求

药敏分析系统中药敏试剂盒部分应结合常规注册中体外诊断试剂的性能要求进行考虑。药敏试剂盒介于定性检测试剂与定量检测试剂之间，没有完全清晰的界定，使用时先接种培养出鉴定细菌，最终确定出鉴定细菌的最低杀菌浓度。

在确定最低杀菌浓度之前，应先保证使用产品如下的一些基本性能要求：

1.1 无菌要求

培养鉴定菌株的前体时，培养基应保持无菌环境，无其他杂菌的干扰。验证该性能要求时，可抽取5%的培养基进行无菌试验，培养结果应无细菌生长。若抽检的5%培养基中出现污染，则全部培养基应进行无菌试验，出现污染的培养基弃去不用。

1.2 pH要求

细菌对pH的敏感性也是影响其生长的重要因素，偏酸性或偏碱性的生存环境都可能出现抑菌的现象，从而造成结果判断的假阴性出现。故临床上，无菌培养基的pH一般要求7.2左右，或结合产品定位菌种的实际生长特点进行考虑，如结核杆菌、链球菌等菌种pH要求存在不同程度的差异。

1.3 生长试验

所谓生长试验，即前述无菌、pH两个基本性能满足要求后，应采用对照菌株（或质控菌株）进行培养，确定该培养基可长出培养菌。排除培养基因为营养不足或其他原因造成无菌生长的假阴性出现。不同的鉴定菌种其药敏对照菌种存在差异，如结核杆菌的质控菌种可采用结核分枝杆菌标准敏感株H37Ra（Mycobacterium tuberculosis H37Ra）ATCC 25177，[CMCC（B）93020]无毒菌株。

1.4 最低杀菌浓度

明确培养基可以培养出正常对照菌株（或质控菌株）后，可对鉴定菌种进行下一步的最小杀菌浓度探索。卫健委每年发布一系列针对不同菌种药物敏感性浓度的相关指南性文件。考虑到临床实际情况中，不同地区、不同人群、不同实验室中病原微生物的分布及生长、耐药等流行病学存在差异。具体应用过程中，参考该指南性文件内容的同时，应结合实际环境特点，对不同鉴定菌种的抗菌敏感浓度进行研究。验证该性能要求时，应针对不同的细菌分开进行研究。每个细菌再分不同的抗菌药物及不同抗菌药物的不同浓度，依次梯度逐步递增进行培养，从而最终与对照菌种进行对比，选出抑菌或者杀菌的最低药物浓度。如结核杆菌大多选异烟肼、链霉素、利福平、卡那霉素等多种抗菌药物进行研究，其中异烟肼抗菌浓度结合卫生部药敏指南浓度进行扩展探索。

2.生产过程控制

药敏试剂盒生产工艺基本以基础液的分装配置、过滤除菌为主，最终培养基无菌则是关键所在。故生产控制中涉及到的无菌室、微生物室、阳性对照室的空调系统应能够有效避免交叉污染[3]。检测用到的质控菌株应可溯源并记录其详细来源，如菌株的批号、效期、溯源途径、主要技术指标、保存状态等信息。药敏试剂盒作为微生物检测试剂盒中的一种，除生产设备要有要求之外，其工作人员亦应该具备一定的卫生及微生物专业知识，应对其菌种的操作，包括菌种复苏、传代、培养增菌以及使用过程中的洁净操作、防护等工作熟悉掌握，从而以确保生产人员的安全及产品的有效。

3.临床验证[4-6]

新版的免临床目录已发布，免临床的体外诊断试剂已增加至将近400个品种。用于淋病奈瑟菌纸片扩散法药敏试验及用于真菌的纸片扩散法药物敏感实验的药敏试纸属于免临床的范畴，具体评价方法应参照《免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评价资料基本要求（试行）》的要求进行临床评价。

非免临床的药敏检测试剂应按照《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的要求开展临床试验。这里以结核杆菌为例，进行简单阐述。药敏检测试剂盒进行注册检验合格之后，应选择两家国家局备案的医疗器械临床试验机构开展临床研究。通过各临床单位伦理委员会审批，并向当地监管部门进行临床备案之后，则可开展临床样本的收集。药敏检测试剂相对特殊，不同的抗菌药物临床试验应单独分别达到法规的要求。如结核杆菌要验证异烟肼、链霉素、利福平三种抗生素的敏感性时，首先选取前期研发研究的浓度生产相应

的培养基，如0.2μg/mL异烟肼培养基、4μg/mL链霉素培养基、40μg/mL利福平培养基。试验过程中，这三种抗菌药物异烟肼、链霉素、利福平在两家临床单位各自开展不少于200例的样本研究。每种阳性率不低于30%，即60例的要求。若每种抗菌药物涉及不同浓度，则每种浓度应达到统计学要求进行研究。与合适的对比产品同步进行试验后，最终应将试验结果应分别进行统计，形成统计报告。若简单的定性，则每种抗菌药物应与对比产品试验结果进行阴阳性、总符合率及一致性的统计分析。若涉及到不同的抗菌浓度，统计过程则应考虑不同抗菌浓度的分布及结果，选择合理的统计方法进行统计分析。

4.结语

目前，体外诊断试剂管理的法规相对全面完善。在众多指南文件中，生化、免疫类产品已发布的国、行标及指导原则相对较多；而微生物检测方面的试剂一直尚未有相关的、比较系统的指导性文件发布。

本文结合现行法规要求及药敏检测试剂盒的实际特点，对涉及药敏检测试剂盒安全有效性的几个关键点进行简要分析。可为技术审评部门审评该类产品的注册申报资料提供参考，同时也间接指导相关企业产品注册申报资料的准备及撰写。