玄参化学成分的研究

刘年珍， 赵碧清，2， 钱群刚， 陈乃宏， 周小江，

（1.湖南中医药大学，湖南长沙410208；2.湖南省中药饮片标准化及功能工程技术研究中心，湖南长沙410208）

玄参为玄参科植物玄参Scropularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，具有清热凉血、滋阴降火、解毒散结的功效，用于热入营血、温毒发斑、热病伤阴、舌绛烦渴、津伤便秘、骨蒸劳嗽、目赤、咽痛、白喉、瘰疬、痈肿疮毒［1］。玄参作为常用大宗药材，对其研究较多，主要含有环烯醚萜类、苯丙素类等成分，具有保肝、镇痛、抗炎、抗菌、抗氧化、免疫调节、降血压等作用［2-6］。

关于玄参的化学成分研究主要集中在环烯醚萜类成分，而对其他类成分报道较少，为了更全面地控制其质量，提升质量控制标准，课题组特对玄参其他类化学成分进行研究，从其醇提物中分离鉴定了13个化合物，其中化合物2、4、7～8、11～12为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

Bruker DRX-600 MHz核磁共振波谱仪 （TMS为内标，德国Bruker公司）；高效液相色谱仪 （日本岛津公司）；Büchi型旋转蒸发仪 （瑞士 Büchi公司）；Sephadex LH-20（法玛西亚Amersham Biosciences公司）。 Rp-18反相硅胶 （40～63 μm， 日本Daiso公司）；柱色谱硅胶 （200～300目）、硅胶H和薄层色谱硅胶 GF254（青岛海洋化工厂）。所用试剂均为分析纯。

实验用玄参采集于湖南省新绍县玄参种植基地，并由湖南中医药大学周小江教授鉴定为玄参科植物玄参Scropularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，药材标本保存于湖南中医药大学实验楼C栋426。

2 提取与分离

玄参16 kg，切片后加6倍量80%甲醇浸泡1 h后，回流提取2次，每次2 h，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至无甲醇味，得粗提物。粗提物加水混悬，加乙酸乙酯提取4次，每次4 L，减压回收乙酸乙酯得浸膏178 g，浸膏拌样，加于正相硅胶柱色谱柱上，石油醚-乙酸乙酯-甲醇 （70∶30∶0） ～（70∶30∶35）梯度洗脱，收集洗脱液，检识，合并成6段 （XS-1～XS-6）。XS-2经正相硅胶柱色谱，石油醚-乙酸乙酯 （100∶1） ～ （0∶1） 梯度洗脱，检识，合并成5段 （XS-21～XS-25）。

XS-21先经凝胶柱，甲醇洗脱，再经HPLC纯化 ［甲醇-0.5‰三氟乙酸水 （40∶60）为流动相］，得化合物6（257.4 mg）。

XS-22经凝胶柱，甲醇洗脱，检识，合并成6个部分 （XS-221～XS-226），其中XS-226经反相硅胶柱，甲醇-水梯度洗脱 （10%～100%），检识，合并成 4个部分 （XS-2261～XS-2264）。XS-2261经HPLC纯化 ［甲醇-水 （38∶62） ］，得化合物1（3.2 mg）、 2 （4.2 mg）。 XS-225先经反相硅胶柱，甲醇-水 （10%～100%）梯度洗脱，再经 HPLC［甲醇-水 （20∶80）］纯化，得化合物 3（4.3 mg）、 4 （1.1 mg）、 5 （1.5 mg）。

XS-24先经凝胶柱，甲醇洗脱，再过反相硅胶柱，甲醇-水 （10%～100%）梯度洗脱，最后经HPLC纯化 ［甲醇-0.5‰三氟乙酸水 （45∶55）］，得化合物 7（18.1 mg）、 8 （68.7 mg）、 9（80.3 mg）、 10 （31.4 mg）。

XS-25先经凝胶柱，甲醇洗脱，再过反相硅胶柱，甲醇-水 （10%～100%）梯度洗脱，再用薄层色谱 ［石油醚-乙酸乙酯 （5∶3）为展开剂］制备，最后经HPLC纯化 ［甲醇-水 （10∶90）］，得化合物11 （4.3 mg）、 12 （5.9 mg）、 13 （4.7 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色羽状晶体，易溶于甲醇。1HNMR （600 MHz，CD3OD） δ：7.61（1H，d，J＝15.9 Hz， H-7）， 7.45 （2H， dd， J＝ 6.8， 1.9 Hz， H-2，6）， 6.79 （2H， dd， J＝ 6.7， 1.9 Hz， H-3， 5），6.32 （1H， d， J＝15.9 Hz， H-8），3.76 （3H，s，10-OCH3）；13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δ： 170.0（C-9）， 162.0 （C-4）， 146.8 （C-7）， 131.3 （C-2，6）， 127.0 （C-1）， 117.1 （C-3， 5）， 114.8 （C-8），52.1（10-OCH3）。以上数据与文献 ［7］基本一致，故鉴定为对羟基肉桂酸甲酯。

化合物2：黄色油状物，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 7.61 （1H， d， J＝15.9 Hz，H-7）， 7.15 （1H， d， J＝1.6 Hz， H-2）， 7.04 （1H，dd， J＝8.2， 1.7 Hz， H-6）， 6.76 （1H， d， J＝8.2 Hz， H-5）， 6.32 （1H， d， J＝15.9 Hz， H-8）， 3.87（3H， s， 4-OCH3）， 3.76 （3H， s， 3-OCH3）；13CNMR （150 MHz， CD3OD） δ： 170.1 （C-9）， 153.2（C-4）， 150.2 （C-3）， 147.4 （C-7）， 126.5 （C-1），124.7 （C-6）， 117.1 （C-8）， 114.2 （C-5）， 111.5（C-2）， 56.3 （3-OCH3）， 52.0 （4-OCH3）。 以上数据与文献 ［8］基本一致，故鉴定为3，4-二甲氧基肉桂酸。

化合物3：白色固体，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 9.75 （1H， s， H-7）， 7.76（2H， m， J＝ 8.7， 2.1 Hz， H-2， 6）， 6.91 （2H，dd， J＝8.7， 2.1 Hz， H-3， 5）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ： 192.9 （7-CHO）， 165.5 （C-4）， 133.6（C-2， 6），130.3 （C-1），117.1 （C-3， 5）。 以上数据与文献 ［9］基本一致，故鉴定为对羟基苯甲醛。

化合物4：白色固体，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 9.64 （1H， s， H-7）， 7.39（2H， dd， J＝7.6， 1.9 Hz， H-2， 6）， 6.84 （1H， d，J＝8.0 Hz， H-5）， 3.89 （3H， s， 4-OCH3）；13C-NMR（150 MHz， CD3OD） δ： 192.5 （7-CHO）， 158.7（C-4）， 150.7 （C-3）， 129.1 （C-1）， 128.7 （C-2），117.0 （C-6），110.7 （C-5），56.2 （4-OCH3）。 以上数据与文献 ［10］基本一致，故鉴定为3-羟基对甲氧基苯甲醛。

化合物5：白色固体，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ：7.86 （2H， dd，J＝8.8，2.0 Hz， H-2， 6）， 6.78 （2H， dd， J＝8.8， 2.0 Hz， H-3， 5）， 2.51 （3H， s， H-8）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ： 199.5 （C-7）， 166.2 （C-4）， 132.3 （C-2， 6）， 129.1 （C-1）， 116.9 （C-3， 5）， 26.2 （C-8）。以上数据与文献 ［11］基本一致，故鉴定为对羟基苯乙酮。

化合物6：白色固体，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 7.68 （1H， d， J＝16.0 Hz，H-7），7.58（2H， m，H-2， 6），7.40 （3H， m， H-3， 4， 5）， 6.48 （1H， d， J＝ 16.0 Hz， H-8）；13CNMR （150 MHz， CD3OD） δ： 170.4 （C-9）， 146.5（C-7）， 135.9 （C-1）， 131.5 （C-4）， 130.1 （C-3，5），129.3 （C-2， 6），119.4 （C-8）。 以上数据与文献 ［12］基本一致，故鉴定为肉桂酸。

化合物7：紫红色固体，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 9.68 （1H， s， H-10）， 7.30（2H， t， J＝9.0， 1.8 Hz， H-4， 6）， 6.91 （1H， d，J＝7.8 Hz， H-7）， 6.85 （1H， s， H-2′）， 6.74 （2H，t， J ＝ 9.2， 1.8 Hz， H-5′， 6′）， 5.21 （1H， s， H-2）；13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δ： 193.2 （10-CHO）， 153.9 （C-9）， 147.3 （C-8）， 146.8 （C-1′），146.2 （C-3′）， 131.2 （C-4′）， 130.9 （C-5）， 126.6（C-6）， 119.5 （C-6′）， 116.4 （C-7）， 115.9 （C-5′）， 115.4 （C-2′）， 114.9 （C-4）， 104.9 （C-2）。以上数据与文献 ［13］基本一致，故鉴定为2-（3′， 4′-二羟基苯基） -1， 3-苯并二茂恶-5-甲醛。

化合物8：银白色晶体，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ：7.57 （2H， dd，J＝8.4，1.9 Hz， H-2， 6）， 6.85 （1H， d， J＝ 8.6 Hz， H-5），3.89 （3H， s， 4-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ： 170.2 （C-7）， 152.8 （C-4）， 148.7 （C-3）， 125.3 （C-6）， 123.1 （C-1）， 115.8 （C-2），113.7（C-5）， 56.4 （4-OCH3）。 以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为 3-羟基对甲氧基苯甲酸。

化合物9：铁锈色粉末，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 7.61 （1H， d， J＝15.9 Hz，H-7）， 7.45 （2H， d， J＝ 8.6 Hz， H-2， 6）， 6.82（2H， d， J＝ 8.6 Hz， H-3， 5）， 6.29 （1H， s， H-8）；13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δ： 171.2 （C-9），161.2 （C-4）， 146.8 （C-7）， 131.1 （C-2， 6），127.3 （C-1），116.9 C-3， 5）， 115.6 （C-8）。 以上数据与文献 ［15］基本一致，故鉴定为对羟基肉桂酸。

化合物 10：浅棕色固体，易溶于甲醇。1HNMR （600 MHz， CD3OD） δ： 7.60 （1H， d， J＝15.9 Hz， H-7）， 7.16 （1H， d， J＝1.9 Hz， H-2），7.06 （1H， dd， J＝8.2， 1.9 Hz， H-6）， 6.82 （1H，d， J＝8.2 Hz， H-5），6.32 （1H， d， J＝15.9 Hz， H-8）， 3.89 （3H， s， 3-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ： 171.2 （C-9）， 150.5 （C-3）， 149.4 （C-7）， 147.1 （C-4）， 127.9 （C-1）， 124.1 （C-6），116.6 （C-2）， 115.9 （C-5）， 111.7 （C-8）， 56.4（3-OCH3）。以上数据与文献 ［16］基本一致，故鉴定为阿魏酸。

化合物11：黄色固体，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 9.55 （1H， d， J＝ 7.9 Hz，H-9），7.58（1H，d，J＝15.7 Hz，H-7），7.23（1H，d， J＝1.9 Hz， H-2）， 7.16 （1H， dd， J＝8.1， 1.9 Hz， H-6）， 6.81 （1H， d， J＝ 8.1 Hz， H-5）， 6.63（1H， dd， J＝15.6，7.9 Hz， H-8），3.89 （3H， s，3-OCH3）；13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δ： 196.2 （9-CHO）， 156.7 （C-7）， 153.0 （C-4）， 150.3 （C-3），126.8 （C-1）， 125.7 （C-6）， 117.8 （C-8）， 111.9（C-5）， 111.5 （C-2）， 56.4 （3-OCH3）。 在 HMBC谱中，H-9与C-6，C-9相关，H-8与C-1相关，H-7与C-2， C-5， C-6， C-9相关， H-6与 C-2， C-4，C-7相关，H-5与C-1，C-3，C-8相关，H-2与C-3，C-4，C-6，C-7相关。与以上数据与文献 ［17］基本一致，故鉴定为3-甲氧基对羟基肉桂醛。

化合物12：白色固体，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ：7.02 （2H， dd，J＝8.5，2.0 Hz， H-2， 6）， 6.69 （2H， dd， J＝8.5， 2.0 Hz， H-3， 5）， 3.67 （2H， t， J＝7.2 Hz， H-8）， 2.71 （2H，t， J＝7.2 Hz， H-7）。 以上数据与文献 ［18］ 基本一致，故鉴定为对羟基苯乙醇。

化合物13：白色固体，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 9.53 （1H， s， H-1）， 7.38（1H，d，J＝3.6 Hz， H-3）， 6.58 （1H， d， J＝3.6 Hz， H-4）， 4.61 （2H， s， J＝ 7.2 Hz， H-6）；13CNMR （150 MHz， CD3OD） δ： 179.6 （1-CHO），163.4 （C-5）， 154.1 （C-2）， 125.1 （C-4）， 111.0（C-3），57.8 （C-6）。 以上数据与文献 ［19］ 基本一致，故鉴定为5-羟甲基糠醛。

4 讨论

在2015年版 《中国药典》 （一部）收载的玄参质量标准中，测定的是环烯醚萜类成分哈巴苷和哈巴俄苷的含有量。本研究分离鉴定的13个化合物均不是环烯醚萜类成分，其中肉桂酸、对羟基肉桂酸和3-羟基对甲氧基苯甲酸的含有量较高，初步测定三者含有量之和在0.3%左右，而哈巴苷和哈巴俄苷含有量总量也只有0.5%。其中肉桂酸具有抗肿瘤、抗菌等活性［20-21］。因此，增加这些成分的含有量测定，将全面提升玄参的质量控制水平。