微生物检验关键程序及操作要点

2019-01-10孙梦鸽陈湘

质量安全与检验检测 2019年4期

孙梦鸽陈湘

（上海市金山区众仁老年护理医院上海 201501）

1 微生物检验关键程序

1.1 样品采集

在微生物的样品采集过程中，应当保证全程无菌操作，防止由于外界因素造成的样品污染。同时，采集的样品应当确保具有代表性和随机性，并以检验目的、特性以及检验方法等科学确定采样方案。采集的样品需要详细记录其样品名、来源、采集时间和地点、保存方法、采样人员及批号等信息，并在完成后立即送往检验机构。为了防止样品性质和微生物数量出现变化，必须采取相应措施，保证样品在运输过程中没有发生改变，从而保证样品接近采集状态。

1.2 待检样品的预处理

液体样品的预处理，应当使用无菌吸管吸取一定量混合均匀的样品，并通过无菌操作装入内有无菌稀释液和适量玻璃珠的稀释瓶中，用力振荡混合均匀，或采用漩涡混匀器混匀[1]。

1.3 样品的检验

进行样品检验时，必须保证所使用的器具及环境是无菌的。选择微生物的检验方法时，应当结合样品种类、检验目的及相关要求科学选择，以国家标准为首选，以不同样品的行业标准及产品标准为参考[2]。检验过程中，应当设立标准对照组进行质量控制，若是使用微生物生化鉴定仪、PCR 仪等大型仪器，则需要科学制定一系列的调试、验收、使用、记录、维修和保养等管理制度，并定期进行仪器设备的校准等工作，从而保证仪器设备的精准性和灵敏性。

1.4 原始记录及检验结果报告

微生物检验原始记录是对检验相关内容的数据信息和现象等内容的全过程记录。原始记录的内容包括样品名称、编号；检验时间；检验的项目、方法及依据；检验的条件（仪器设备、温度、湿度等）；检验步骤；检验结果；检验人及复核人签字等。应当保证原始记录的填写随着检验过程进行，不能以转抄的方式进行，保证原始记录的可靠性。若是填写原始记录出现手误，可以使用“杠改法”进行改正，即划一条横线覆盖原数据，在旁边标明更正数据，再由更改人签章[3]。微生物检验过程结束后，应当由检验实验室客观、清晰地将检验结果上报，同时要保证检验报告符合格式规范，并保证数据结果无误、使用词汇确切、结果清楚明确等。

2 无菌操作注意事项

无菌是指保证检验环境中不存在维持生命活动的营养细胞的状态，是指为了防止微生物污染或误入人体，而在超净台、无菌室使用无菌器具进行操作的技术。无菌操作是微生物检验中的重要理念，需要确保检测设备及检测场所无菌，才能保证样品不被污染，使检验结果安全可靠。无菌操作的展开需要注意以下事项：首先，无菌操作必须严格按照微生物检验相关标准进行，一般样品需要保证操作区域干净，即在相应标准的检测实验室、工作台上进行；对于病原微生物的分离及检验等操作，则需要在二级生物实验室进行。保证无菌室的清洁，需要定期对无菌室墙面、工作台进行消毒，并在使用前用紫外线灯光照射30 min，定期计数实验室沉降菌，并检查微生物的繁殖情况[4]；另外，在进行无菌操作时，操作人员不得在无菌室谈笑，并避免频繁移动。在无菌室进行相关操作前，需要检测人员严格采用五步洗手法进行净手操作，并在缓冲间将工作服、工作帽以及工作鞋换好，否则不得进入。其次，检验人员打开微生物样品时，要与其保持一定距离，尽可能地减少微生物样品的暴露时间。在检验过程中，使用的器具必须保证消毒、无菌，取样时检验人员的身体部位不能停留于样品上方，已使用的样品不能放回原处。微生物检验过程中，操作速度应当保持在一定范围内，不能过快，也不能过慢。再次，在微生物检验样品取出之前，需要使用酒精棉球对瓶口、袋口擦拭消毒，接种液体培养物时防止菌液滴溅到其他器皿或工作台上，防止发生污染[5]。若已经滴溅到，也应当利用酒精进行灭菌，并使用消毒液进行擦拭。使用过的玻片、吸管等器具，在使用完成后都需要进行消毒。最后，应当将无菌物品分类存放，并定期进行检查和消毒，且不能与未灭菌的物品混合放置。

3 无菌操作技术分析

3.1 显微镜技术

微生物是难以直接用肉眼观察的生物，需要使用显微镜进行微生物的观察和检验等工作。显微镜技术的应用需要与染色、涂片等技术的结合。使用显微镜技术也需要在无菌环境下进行，防止微生物玻片受到杂菌的污染，从而影响观察结果。因此，显微镜技术的应用过程中，需要注意以下几点：首先，平板培养物的观察过程中不能进行开盖观察，只能开盖检查微生物检验结果；其次，在涂片操作过程中，需要使用移动架进行玻片的移动等操作，不能直接用手碰触，防止出现细菌感染；最后，对于使用过的玻片，必须严格进行消毒。

3.2 纯种分离技术

为了鉴定微生物种群，必须对其进行分离操作，从而获得具体菌株的纯培养物，该过程被称为微生物分离和纯化。一般情况下，可以根据微生物的生长特点，设计合适的培养基，使其在适宜的环境下进行生长和繁殖，或者通过加入抑制其他生物生长的抑制因素，使其他杂菌被淘汰。利用各种稀释方法，最终达到形成单菌种培养基的目的。形成单菌种培养基后，还需要完成后续的分离、纯化和鉴定，才能保证形成纯培养物。纯种分离技术主要包括平板划线分离法、稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法等，这些方法都具有操作简单、分离效果良好的特点。

3.3 纯种培养技术

为了实现微生物的纯种培养，通常会采用接种环接种法实现微生物的菌种移接。由于环境中存在各种各样的杂菌，一旦打开微生物培养器皿，就很有可能导致培养微生物被污染[6]。因此，菌种移接过程中必须保证其处于无菌环境，且要使用清洁的无菌器具进行操作。微生物的纯种培养过程中，一旦由于操作不规范造成污染，会失去微生物检验工作的意义，对后续工作也会产生不利影响。因此，应当充分掌握各种无菌操作技术，并保证无菌的工作环境，才能更好地开展纯种培养技术，为微生物检验工作提供优势。